氮酮對(duì)黃硝巴布劑中羥基紅花黃色素A體外皮膚滲透性的影響

曾明輝，譚正懷，邱建平，黃 娟

(1.四川省邛崍市醫(yī)療中心醫(yī)院藥學(xué)部，四川 成都 611530；2 四川省中醫(yī)藥科學(xué)院，四川 成都 610041)

氮酮對(duì)黃硝巴布劑中羥基紅花黃色素A體外皮膚滲透性的影響

曾明輝1，譚正懷2，邱建平1，黃 娟1

(1.四川省邛崍市醫(yī)療中心醫(yī)院藥學(xué)部，四川 成都 611530；2 四川省中醫(yī)藥科學(xué)院，四川 成都 610041)

目的 研究不同濃度氮酮對(duì)黃硝巴布劑中羥基紅花黃色素A體外皮膚滲透性的影響。方法 采用改良的Franze擴(kuò)散池，選用不同濃度氮酮(0%、1%、2%及5%)作黃硝巴布劑的透皮促滲劑，以HPLC法測定制劑中羥基紅花黃色素A的累積釋放量(Q)，計(jì)算穩(wěn)態(tài)流量(J)。結(jié)果 黃硝巴布劑中羥基紅花黃色素A的體外釋放符合Higuchi方程；當(dāng)?shù)獫舛葹?%、1%、2%和5%時(shí)，羥基紅花黃色素A12 h內(nèi)的累積釋放量(Q)分別是0.533、0.913、1.313及0.953 μg/ml、穩(wěn)態(tài)流量分別為0.4829、0.7657、1.0857及0.8114μg/ (cm2·h)。結(jié)論 氮酮可促進(jìn)羥基紅花黃色素A的透皮吸收，在實(shí)驗(yàn)濃度內(nèi)，以2%氮酮的促滲效果最佳，可為黃硝巴布劑的制備提供參考。

氮酮；巴布劑；羥基紅花黃色素A；裸鼠；透皮吸收

巴布劑系指藥材提取物、藥物與適宜的親水性基質(zhì)混勻后，涂布于裱背材料上制得的外用貼劑，具載藥量大、藥物釋放性能好、劑量準(zhǔn)確、使用方便等優(yōu)點(diǎn)[1]。黃硝巴布劑處方來源于四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院中醫(yī)科臨床驗(yàn)方，由紅花、大黃等中藥組成，具有活血化瘀、消腫止痛等功效[2，3]，筆者擬將其制成巴布劑，以便于患者用藥。該制劑中紅花為君藥，其主要有效成分為羥基紅花黃色素A[4](HSYA)，因此本文選擇以HSYA為指標(biāo)，采用裸鼠離體皮膚進(jìn)行透皮吸收實(shí)驗(yàn)，考察該制劑中透皮促進(jìn)劑氮酮(Azone)的含量對(duì)HSYA透皮性能的影響，為黃硝巴布劑的制備提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試藥 黃硝巴布劑浸膏(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院四川省人民醫(yī)院藥學(xué)部提供)，HSYA對(duì)照品(購于中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111637-200905)，Azone、丙二醇(成都科龍化化工試劑廠)為AR級(jí)，卡波姆981NF、聚丙烯酸鈉7S(美國諾譽(yù)化工公司)，聚乙烯吡咯烷酮K30、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯醇(上?；瘜W(xué)試劑公司)等均為藥用規(guī)格。甲醇、乙腈為色譜級(jí)，水為純凈水，其它試劑為分析純。

1.2 儀器 美國Waters 2690高效液相色譜系統(tǒng)，包括自動(dòng)進(jìn)樣器，996二極管陣列檢測器，Empower3色譜工作站(美國Waters公司)；沙多利斯BP211型電子天平；Genius3漩渦混合器(德國)；78-1型磁力攪拌器(杭州儀表廠)、CS501型超級(jí)恒溫器(重慶試驗(yàn)設(shè)備廠)，320R型低溫離心機(jī)(德國)。

1.3 供試品的制備 按配方量稱取卡波姆981NF加適量的水分散過夜，另取配方量的聚乙烯吡咯烷酮K30、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯醇加適量的水浸泡，水浴50 ℃加熱溶脹，混合以上兩部分溶液，攪勻備用；再取配方量的聚丙烯酸鈉7S、丙二醇以及Azone適量，攪勻后加入上述溶脹液中；然后依次配方量的黃硝巴布劑浸膏等成分，緩慢滴加適量三乙醇胺，控制pH6.0～7.0，保溫50 ℃充分?jǐn)嚢杈鶆?，即可制成含紅花生藥質(zhì)量為0.5∶1 g，Azone含量分別為 0%、1%、2%及5%的黃硝巴布劑供試品。

1.4 受試動(dòng)物 Balb/c裸鼠，雌性，十周齡，體重(23±2)g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供(川實(shí)動(dòng)管質(zhì)7號(hào))。

1.5 方法

1.5.1 HSYA含量測定 ①色譜條件[5]：色譜柱：DiamonsilC18 (200x4.6 mm，5 μl)，柱溫30 ℃；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26：2：72)，流速1.0 ml/min；檢測波長403 nm；進(jìn)樣量20 μl。②對(duì)照品溶液制備：精密稱取HSYA對(duì)照品適量，加25%甲醇制成100 μg/ml的溶液，搖勻，即得HSYA儲(chǔ)備液。③標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取HSYA儲(chǔ)備液1.0 ml，加25%甲醇定溶至10 ml，搖勻，分別精密吸取該稀釋液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5及2.0 ml，加25%甲醇定溶至10 ml，搖勻，制成含HSYA 0.1、0.2、0.5、1.0及2.0 μg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別取上述溶液20 μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，以濃度C對(duì)其峰面積R進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程。

1.5.2 鼠皮制備 取裸鼠，于實(shí)驗(yàn)前12 h，脫頸處死，取背部皮膚，分離皮下組織及脂肪，選無破損皮膚浸于生理鹽水中，置冰箱中低溫保存，實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水洗凈，濾紙吸干備用。

1.5.3 實(shí)驗(yàn)裝置與方法 用改良的Franze擴(kuò)散池[6，7]，將鼠皮固定在擴(kuò)散池口，有效擴(kuò)散面積為7.0 cm2，角質(zhì)層面向供給室，真皮層面向接受室；稱取供試品1.0 g，置供給室中，在鼠皮上涂勻，使之與皮膚密切接觸，將上下兩室固定，在接受室內(nèi)注滿生理鹽水，驅(qū)除氣泡；開啟電磁攪拌器恒速攪拌，同時(shí)用外循環(huán)水恒溫[(35±1)℃]，于1、2、4、6、8及12 h，從取樣口用注射器抽取接受液5.0 ml，同時(shí)補(bǔ)充等體積生理鹽水。

1.5.4 累積釋放量等參數(shù)的計(jì)算 取接受液1.0 ml加入甲醇1.0 ml，經(jīng)超聲脫氣后用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液20 μl進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，并代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程測定接受液中的濃度。精密量取接受室體積，按如下公式計(jì)算累積釋放量等參數(shù)值[6，7]。累積釋放量：Q=Cn+ (V0/V)ΣCPS；穩(wěn)態(tài)流量：J=V/A·dQ/dt。 N=1 式中，Q為時(shí)間t的累積釋放量；Cn為時(shí)間t的濃度值；V0為每次取樣體積；CPS為時(shí)間t以前的濃度測量值；A為有效皮膚面積； dQ/dt為穩(wěn)態(tài)時(shí)的斜率；J為穩(wěn)態(tài)流量：指單位時(shí)間通過單位面積皮膚的藥物量。

2 結(jié)果

2.1 回歸方程 C=5.449×10-4·R-0.0189，r=0.9992。表明濃度在0.1～2.0 μg/ml，HSYA濃度與其峰面積線性關(guān)系良好(n=5)。保留時(shí)間t=11.0 min。

2.2 累積釋放量與穩(wěn)態(tài)流量 含不同濃度Azone的黃硝巴布劑，在不同時(shí)間HSYA的累積釋放量見表1，穩(wěn)態(tài)流量見表2。分別將HSYA的濃度C對(duì)t1/2進(jìn)行回歸處理，其相關(guān)系數(shù)均在0.98以上，說明HSYA從黃硝巴布劑基質(zhì)向皮膚的滲透過程符合Higuchi方程。

表1 HSYA經(jīng)離體鼠皮的累積釋放量 (μg/ml，n=5)

表2 不同濃度Azone的黃硝巴布劑中HSYA的體外透皮吸收參數(shù)

3 討論

外用貼膏劑在我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中被廣泛使用，其不僅限于皮膚局部疾病的治療，而且可以透過皮膚進(jìn)入血液循環(huán)，達(dá)到內(nèi)病外治的目的。內(nèi)病外治法是是傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的精髓之一[8]，也是中藥透皮制劑發(fā)展的理論基礎(chǔ)。為了提高藥物的透皮速率和透皮量在巴布劑等外敷貼劑的處分組成中常需加入一定量的透皮吸收促進(jìn)劑[9]。Azone是一種新型經(jīng)皮滲透促進(jìn)劑，也是近年來國內(nèi)外研究得較多的透皮吸收促進(jìn)劑，其特點(diǎn)是它能使角質(zhì)中類脂質(zhì)生產(chǎn)不規(guī)則的排列同時(shí)能溶解皮膚的類脂來增加藥物透皮吸收，對(duì)親水性及親油性藥物均有促進(jìn)作用[10]，其用量在1%～10%。

在藥物透皮吸收研究中，實(shí)驗(yàn)用皮膚的性質(zhì)及狀態(tài)對(duì)藥物的滲透影響較大。有文獻(xiàn)報(bào)道[11，12]，藥物透過裸鼠和乳豬皮膚的透皮吸收參數(shù)與透過人體皮膚的透皮吸收參數(shù)較為接近。從實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性來考慮，以使用裸鼠皮較好。對(duì)實(shí)驗(yàn)中HSYA測定方法，本研究參考中國藥典2010年版一部中紅花藥材的HSYA測定方法制備HSYA含量測定的供試品溶液，并選用403 nm作為檢查波長。實(shí)驗(yàn)表明，該方法準(zhǔn)確性、精密性及穩(wěn)定性均能滿足實(shí)驗(yàn)的要求。

實(shí)驗(yàn)表明，Azone對(duì)黃硝巴布劑中HSYA存在明顯的促進(jìn)透皮擴(kuò)散作用，但不同濃度的Azone對(duì)黃硝巴布劑中HSYA的透皮量存在明顯差異，同時(shí)HSYA的累積釋放量及穩(wěn)態(tài)流量并不與Azone濃度成正相關(guān)，即濃度在1%～5%，當(dāng)Azone的濃度達(dá)到一定值后其助滲作用不再隨其濃度增加而增強(qiáng)，這與有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[13]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，含2%Azone的制劑于1 h開始顯示助滲作用，穩(wěn)態(tài)流量達(dá)1.0857，于12 h累積釋放量較0%Azone增加了146.3%；故黃硝巴布劑中Azone的最佳使用量為2%。

HSYA的分子量為612.53，，為水溶性大分子化合物，不易透過皮膚。本研究結(jié)果顯示，在有促進(jìn)劑(2%氮酮)的條件下，其12 h內(nèi)的累積透過率僅約1.7%。如何進(jìn)一步提高其透皮擴(kuò)散性能有待進(jìn)一步研究。由于黃硝巴布劑是中藥復(fù)方制劑，其療效是多成分、多靶點(diǎn)整體作用的結(jié)果，在其處分組分優(yōu)先過程中，若僅采用某單體處分為優(yōu)化指標(biāo)，不能真實(shí)的反映制劑的整體效應(yīng)。筆者擬以其藥理作用與有效成分含量相結(jié)合，進(jìn)行多指標(biāo)綜合考察，優(yōu)化黃硝巴布劑的處分組成。

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The effect of azone on percutaneous absorption of hydroxysafflof yellow A in huangxiao cataplasm

ZENG Ming-hui1，TAN Zheng-huai2，QIU Jian-ping1，HUANG Juan1

(1.Department of Pharmacy，Sichuan Qionglai Medical Center Hospital，Chengdu 611350，China；2.Sichuan Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 610041，China)

Objective To observe the effect of different concentrations of azone on transcutaneous permeation of hydroxysafflof yellow A in huangxiao cataplasm.Methods The improved Franze diffusion cell was used and different concentrations of azone (0%，1%，2% and 5%)were selected as penetration enhancer of huangxiao cataplasm.The accumulative permeation quantity (Q)was determined by HPLC and the steady percutaneous speed (J)were calculated.Results The release of hydroxysaffl of yellow A in vitro in huangxiao cataplasm was matched to Higuchi equation.When azone concentration was 0%，1%，2% and 5%，the Q values for 12 h was 0.533，0.913，1.313 and 0.953μg·mL/ml，and the J values was 0.4829，0.7657，1.0857 and 0.8114μg/cm2·h，respectively.Conclusion Azone can somewhat promote the percutaneous absorption of hydroxysafflof yellow A.Comparing to 0% azone，the promoting penetration effect of 2% azone is the best in the experimental concentration range.It may provide some information for preparation of huangxiao cataplasm.

Azone；Cataplasm；Hydroxysafflof yellow A；Nude mouse；Percutaneous absorption

四川省中醫(yī)藥管理局科研課題(編號(hào)：2010-G-093)

R917

A

1672-6170(2016)02-0066-03

2015-12-09；

2015-12-15)