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    祛腐生肌方促進(jìn)慢性皮膚潰瘍大鼠創(chuàng)面愈合機(jī)制研究*

    2016-06-18 08:00:03于萌蕾黃都平彭吉才羅自通
    陜西中醫(yī) 2016年6期
    關(guān)鍵詞:腐生生肌肉芽

    朱 頡 曹 億 于萌蕾 黃都平 彭吉才 羅自通 曾 兵

    中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院(廣州 510289)

    ?

    ·實(shí)驗(yàn)研究·

    祛腐生肌方促進(jìn)慢性皮膚潰瘍大鼠創(chuàng)面愈合機(jī)制研究*

    朱頡曹億于萌蕾黃都平彭吉才羅自通曾兵△

    中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院(廣州 510289)

    摘要目的:分析祛腐生肌方對(duì)慢性皮膚潰瘍大鼠創(chuàng)面愈合的作用機(jī)制。方法:60只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、祛腐生肌方組,每組30只,依據(jù)文獻(xiàn)復(fù)制慢性皮膚潰瘍模型,造模成功后各組每天換藥1次,共計(jì)15d,觀察各組用藥后5d、10d、15d創(chuàng)面愈合率;采用ELISA法檢測(cè)大鼠血清腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白介素-1(IL-1)水平含量;水解法測(cè)定大鼠皮膚肉芽組織羥脯氨酸(HyP)含量。結(jié)果:祛腐生肌方組第5d創(chuàng)面愈合率與對(duì)照組比較,無(wú)顯著差異;第10、15 d與對(duì)照組相比,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;與對(duì)照組比較,祛腐生肌方組第5、10d血清TNF-a、IL-1水平含量均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;第15d與對(duì)照組相比無(wú)差異;祛腐生肌方組第5、10、15dHyP含量均高于對(duì)照組。結(jié)論:祛腐生肌方能促進(jìn)慢性皮膚潰瘍大鼠創(chuàng)面愈合,其作用機(jī)制可能與改善炎癥狀態(tài)、增加創(chuàng)面膠原蛋白,提高局部微循環(huán)有關(guān)。

    主題詞潰瘍/中醫(yī)藥療法@祛腐生肌方動(dòng)物,實(shí)驗(yàn)大鼠

    慢性皮膚潰瘍是指2周以上創(chuàng)面未愈合的皮膚軟組織缺損,是臨床難治性疾病之一。本病以病程長(zhǎng),反復(fù)發(fā)作,治療費(fèi)用高為特點(diǎn),給患者生活、工作帶來(lái)嚴(yán)重影響[1]。祛腐生肌法是中醫(yī)皮膚科的常用方法,通過(guò)局部用藥,能促進(jìn)創(chuàng)面腐爛壞死組織脫落,在局部創(chuàng)面形成相對(duì)潔凈的微環(huán)境,促進(jìn)創(chuàng)面愈合[2-3],但其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本課題在前期研究基礎(chǔ)上,通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究,觀察祛腐生肌方對(duì)慢性皮膚潰瘍大鼠創(chuàng)面愈合率、炎性因子、羥脯氨酸的影響。

    1資料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)SD大鼠60只,體重190±20g,購(gòu)自中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

    1.2實(shí)驗(yàn)藥物祛腐生肌方(煅爐甘石、白芷、鍛龍骨、當(dāng)歸各20g,血竭、乳香、冰片各10g,黃芪30g),購(gòu)于本院中藥房,并經(jīng)中藥房主管藥師鑒定,將各藥研極細(xì)末,混勻分裝備用。生理鹽水(本院藥劑科提供)。

    1.3實(shí)驗(yàn)試劑大鼠TNF-a、IL-1的ELISA檢測(cè)試劑盒(批號(hào):20130621、20130923)、HyP含量測(cè)定試劑盒(批號(hào):20130319),均購(gòu)于上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

    1.4動(dòng)物造模方法參照相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行[4-5],實(shí)驗(yàn)前用脫毛膏將大鼠背部進(jìn)行脫毛,面積約4.0cm×4.0cm。第二天用4%水合氯醛(0.4mL/100g)對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉,然后在脫毛區(qū)用3cm×3cm 的塑料框架蘸龍膽紫標(biāo)記造模面積,無(wú)菌條件下剪去造模區(qū)皮膚,深達(dá)筋膜,并在筋膜下噴灑金黃色葡萄球菌(4mL/kg),三層醫(yī)用紗布覆蓋創(chuàng)面,用橡皮膏包扎固定,隨后每只大鼠股肌注氫化可的松(0.4mL/100g),連續(xù)3d,造模結(jié)束。造模成功后第二天兩組開(kāi)始換藥,對(duì)照組給予生理鹽水處理創(chuàng)面,祛腐生肌方組在創(chuàng)口處使用祛腐生肌方藥粉,兩組再以生理鹽水濕紗布外敷,外覆蓋干紗布,并以繃帶包扎固定,每日給藥1次,共計(jì)15d。

    1.5觀察指標(biāo)1.5.1觀察各組大鼠第5、10、15d創(chuàng)面愈合率:創(chuàng)面附標(biāo)尺,采用數(shù)碼相機(jī)拍照,記錄大鼠創(chuàng)面情況,運(yùn)用imagepro-plus軟件分析處理。

    1.5.2血清TNF-a、IL-1水平測(cè)定:分別于給藥5、10、15d后,兩組分別麻醉10只動(dòng)物,大鼠腹主動(dòng)脈取血,靜置30min后離心(2000r/min,20min),取上清分裝于EP管,-70°C保存,采用ELISA法進(jìn)行檢測(cè),指標(biāo)嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

    1.5.3皮膚肉芽組織HyP測(cè)定:分別于給藥5、10、15d后,兩組分別麻醉10只動(dòng)物,剪取潰瘍區(qū)約4~6cm皮膚肉芽組織。各組精確稱量肉芽組織,采用水解法測(cè)定,指標(biāo)嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

    2結(jié)果

    2.1各組大鼠創(chuàng)面愈合率比較從表l可以看出,與對(duì)照組比較,祛腐生肌方組第5d無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);第10、15d與對(duì)照組相比,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05或P<0.01)。

    2.2各組血清TNF-α、IL-1水平含量比較從表2可以看出,與對(duì)照組比較,祛腐生肌方組第5、10d相比,各組血清TNF-α、IL-1水平含量均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);第15d與對(duì)照組相比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P>0.05)。

    2.3各組皮膚肉芽組織中HyP含量比較從表3可以看出,與對(duì)照組比較,祛腐生肌方組第5、10、15dHyP含量高于對(duì)照組(P<0.05)。

    3討論中醫(yī)學(xué)治療本病有悠久的歷史,對(duì)慢性皮膚潰瘍優(yōu)勢(shì)明顯,現(xiàn)已得到廣泛運(yùn)用[6]。對(duì)于慢性潰瘍而言,由于創(chuàng)面遷延不愈,臨床表現(xiàn)為皮膚暗黑,創(chuàng)口下陷,腐肉難脫,新肌不生,創(chuàng)面難以愈合為特點(diǎn)[7]。《醫(yī)學(xué)入門》[8]認(rèn)為:“瘡口不斂,由于肌肉不生,肌肉不生,由于腐肉不祛?!薄夺t(yī)宗金鑒》更有“腐不祛則肌不生”之說(shuō)。此外,也有醫(yī)家認(rèn)為影響潰瘍不愈的局部因素還有“瘀”。如陳實(shí)功《外科正宗》[9]中記載“化瘀腐,方可得愈”的論述。因此對(duì)于慢性潰瘍治療,離不開(kāi)祛腐和生肌,祛腐中蘊(yùn)含活血,即祛腐活血是前提,生肌是根本。

    我們?cè)陟罡》街羞\(yùn)用當(dāng)歸、乳香、血竭活血化瘀,其目的在于改善血液循環(huán),擴(kuò)張血管,促進(jìn)被破壞組織的修復(fù)及重建正常生理功能[10],另可加用補(bǔ)氣藥黃芪,以達(dá)氣能生血、氣能行血之效,且黃芪能抑制細(xì)胞增殖作用,改善血供,提高內(nèi)皮細(xì)胞表面整合素活性,加速創(chuàng)面愈合[11]。本研究中,與對(duì)照組比較,祛腐生肌方組第5d雖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但創(chuàng)面愈合率優(yōu)于對(duì)照組,且隨著用藥時(shí)間的延長(zhǎng),第10、15d創(chuàng)面愈合率明顯優(yōu)于對(duì)照組,提示祛腐生肌方能加速潰瘍傷口的愈合。

    對(duì)于慢性潰瘍患者而言,其中醫(yī)辨證多屬陰證、虛證,屬瘡瘍的陰中之陰證[12],患者免疫功能多低下。而瘡面愈合是一發(fā)展過(guò)程,其中炎癥反應(yīng)是瘡面愈合的初始階段。在此期,若傷口能適當(dāng)分泌炎癥因子,可加強(qiáng)創(chuàng)面的炎癥反應(yīng),有助于壞死組織的清理,為新生肉芽組織的生長(zhǎng)提供支持,即體現(xiàn)既祛腐又生肌的作用[13]。此次研究結(jié)果顯示,祛腐生肌方組早期就可發(fā)揮對(duì)創(chuàng)面的促炎作用,提高IL-1和TNF-α水平,增強(qiáng)免疫應(yīng)答,刺激瘡面四周上皮的生長(zhǎng),發(fā)揮生肌作用。其原因可能與方中黃芪、當(dāng)歸所含的多糖能通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞因子基因表達(dá),發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)有關(guān)[14]。祛腐生肌方組在后期IL-1和TNF-α表達(dá)與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,這可能與瘡面愈合后期主要和基質(zhì)形成和重塑期有關(guān)。

    膠原在創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程中起重要作用。HyP是膠原合成的重要原料,它能間接反映膠原的含量,是較好的創(chuàng)面評(píng)價(jià)指標(biāo)。從本次中祛腐生肌方組在5、10、15d能明顯提高傷口肉芽組織中HyP含量,從而促進(jìn)創(chuàng)面愈合,其作用可能與方中冰片增加肉芽組織結(jié)構(gòu)和表皮細(xì)胞再生,修復(fù)皮膚附屬器官,黃芪多糖膠原可提高組織中Hyp含量,促進(jìn)膠原合成及肉芽生長(zhǎng),血竭能改善創(chuàng)面肉芽結(jié)構(gòu)和膠原排列方式有關(guān)[15]。

    綜上,祛腐生肌方能促進(jìn)慢性皮膚潰瘍大鼠創(chuàng)面愈合,其作用機(jī)制可能與改善炎癥狀態(tài)、增加創(chuàng)面膠原蛋白,提高局部微循環(huán)有關(guān),然其作用途徑仍有待后續(xù)進(jìn)一步研究。

    參考文獻(xiàn)

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    (收稿2016-01-08;修回2016-02-25)

    通訊作者:△廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第六醫(yī)院(清遠(yuǎn) 511518)

    【中圖分類號(hào)】R364.1

    【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

    doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.06.047

    *國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81401996)

    廣東省自然科學(xué)基金(2015A030310099)

    吳階平醫(yī)學(xué)基金(320.6750.14139)

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