Fascin-1蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其臨床意義

孔凡良,胡麗霞,李成發(fā),黃孟芹,蔣英俊,繆華緯,吳　燕,王鳳云

(安徽省合肥市第二人民醫(yī)院血液腫瘤科　230011)

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Fascin-1蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其臨床意義

孔凡良,胡麗霞,李成發(fā),黃孟芹,蔣英俊,繆華緯,吳燕,王鳳云

(安徽省合肥市第二人民醫(yī)院血液腫瘤科230011)

[摘要]目的探討Fascin-1蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其臨床意義。方法采用免疫組化MaxVision 兩步法檢測(cè)87例結(jié)直腸癌和28例癌旁正常組織中Fascin-1 蛋白的表達(dá)情況，分析Fascin-1蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系。Kaplan-Meier和Cox回歸模型分析Fascin-1蛋白表達(dá)與結(jié)直腸患者生存的相關(guān)性。結(jié)果Fascin-1 在結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為43.7%(38/87)和7.1%(2/28)，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Fascin-1 蛋白表達(dá)在不同年齡、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但是在不同性別、病理類型、腫瘤位置、分化程度間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Kaplan-Meier分析顯示Fascin-1蛋白高表達(dá)組患者的總生存率明顯低于低表達(dá)組(P=0.009)。多因素Cox回歸分析表明Fascin-1蛋白高表達(dá)是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(相對(duì)危險(xiǎn)度[HR]=2.087，95%CI：1.196～3.642，P=0.010)。結(jié)論Fascin-1蛋白在結(jié)直腸癌組織中呈高表達(dá)，其與患者的遠(yuǎn)期生存率相關(guān)。Fascin-1蛋白可能是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

[關(guān)鍵詞]Fascin-1；結(jié)直腸腫瘤；免疫組織化學(xué)；遠(yuǎn)期生存率

Fascin-1蛋白的主要功能是與肌動(dòng)蛋白結(jié)合，其在人類諸多腫瘤中表達(dá)上調(diào)，包括結(jié)直腸癌[1]。但目前對(duì)于Fascin-1蛋白的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者的遠(yuǎn)期生存率之間的確切關(guān)聯(lián)鮮有研究。本研究采用免疫組化法檢測(cè)結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中Fascin-1的表達(dá)差異，并通過(guò)對(duì)患者的長(zhǎng)期隨訪，對(duì)Fascin-1與患者的遠(yuǎn)期生存率之間的關(guān)聯(lián)進(jìn)行研究，進(jìn)一步探討Fascin-1蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其臨床意義，以期對(duì)該病的治療及預(yù)后判斷提供科學(xué)依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2009年6月至2014年7月本院病理科診斷為結(jié)直腸癌的臨床與病理資料齊全的石蠟組織標(biāo)本87份，患者術(shù)前均未接受過(guò)任何抗腫瘤治療。其中男46例，女41例；年齡36～77歲,中位年齡63歲。同時(shí)從距腫瘤至少3 cm處取相應(yīng)癌旁組織28份，并經(jīng)病理檢查確認(rèn)無(wú)癌細(xì)胞浸潤(rùn)，作為對(duì)照組。所有標(biāo)本均用10%中性緩沖福爾馬林溶液固定，經(jīng)石蠟包埋，4 μm 連續(xù)切片采用免疫組化染色。

1.2主要試劑免疫組化試劑使用免疫組化濃縮型兔抗人Fascin-1單克隆抗體(cp-6848)購(gòu)自德國(guó)Celplor公司，免疫組化檢測(cè)試劑盒為即用型快捷免疫組化MaxVision 試劑盒和DAB 顯色試劑盒均購(gòu)自福州邁新公司。

1.3方法免疫組化染色方法參照使用說(shuō)明書(shū)操作，采用MaxVision兩步法進(jìn)行免疫組化染色，簡(jiǎn)要步驟按如下操作：檸檬酸鈉緩沖液高壓抗原修復(fù)，切片中滴加Fascin-1一抗，4 ℃過(guò)夜，去除一抗后滴加二抗，然后試劑盒室溫下孵育20 min，用DAB顯色，蘇木精對(duì)比染色。Fascin-1在間質(zhì)的表達(dá)為自身切片的陽(yáng)性對(duì)照，PBS液取代一抗作陰性對(duì)照。

1.4結(jié)果判斷免疫組化以癌及癌旁細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性染色。免疫組化評(píng)定方法參考文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)[2-3]。按染色強(qiáng)度記分：無(wú)色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；按染色程度記分：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為0分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)1%～25%為1分，>25%～50% 為2分，>50%～75%為3分，>75%～100%為4分。兩項(xiàng)相加得分(0～7分)，≥3分為高表達(dá)。

1.5隨訪截至最后隨訪時(shí)間2015年2月，全部患者中位隨訪時(shí)間為43.1個(gè)月(7～68個(gè)月)。患者總的生存時(shí)間定義為從手術(shù)之日起至末次隨訪或死亡之日。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。Fascin-1表達(dá)與各個(gè)臨床病理因素的分析采用χ2檢驗(yàn)，生存分析采用Kaplan-Meier方法和Log-rank檢驗(yàn)。Fascin-1表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系采用單因素和多因素Cox回歸模型進(jìn)行分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1Fascin-1蛋白在結(jié)直腸癌及癌旁組織中的表達(dá)和分布Fascin-1免疫組化染色在結(jié)直腸癌中主要定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜上，呈局灶性或彌漫性黃色顆粒狀，在結(jié)直腸正常組織中僅少量表達(dá)于細(xì)胞。87份結(jié)直腸癌組織中，38份(43.7%)Fascin-1 蛋白高表達(dá)，見(jiàn)圖1；28份癌旁組織中，2份(7.1%)Fascin-1 蛋白高表達(dá)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.465，P<0.05)。

A：癌旁正常組織；B：結(jié)直腸癌組織。

圖1結(jié)直腸癌組織及癌旁正常組織中Fascin-1蛋白的表達(dá)(×100)

2.2Fascin-1蛋白的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床特征的關(guān)系Fascin-1蛋白表達(dá)在不同年齡、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但是在不同性別、病理類型、腫瘤位置、分化程度間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　結(jié)直腸癌中Fascin-1蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

續(xù)表1　結(jié)直腸癌中Fascin-1蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.3Fascin-1蛋白的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系對(duì)87例獲得隨訪結(jié)果的結(jié)直腸癌患者進(jìn)行Kaplan-Meier生存分析，結(jié)果顯示Fascin-1蛋白低表達(dá)組患者的總生存率明顯高于高表達(dá)組，用Log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行組間生存率檢驗(yàn)結(jié)果顯示χ2=6.833，P=0.009，即Fascin-1蛋白高表達(dá)與結(jié)直腸癌預(yù)后不良有關(guān)(圖2)。經(jīng)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析，單因素分析顯示，F(xiàn)ascin-1蛋白表達(dá)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與患者預(yù)后相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表2。多因素Cox回歸分析，F(xiàn)ascin-1蛋白高表達(dá)是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[相對(duì)危險(xiǎn)度(HR)=2.087，95%CI：1.196～3.642,P=0.01]。

low：Fascin-1蛋白低表達(dá)；high：Fascin-1蛋白高表達(dá)。

圖2結(jié)直腸癌中Fascin-1蛋白表達(dá)與患者生存狀況的關(guān)系

表2　結(jié)直腸癌預(yù)后Cox模型分析

續(xù)表2　結(jié)直腸癌預(yù)后Cox模型分析

3討論

結(jié)直腸癌是全球第三大最常見(jiàn)惡性腫瘤，其死亡率在西方國(guó)家中位居第二[4]。結(jié)直腸癌在我國(guó)大城市其發(fā)病率也逐年升高，已躍居癌癥死亡率的第三位[5]。近十年來(lái)隨著手術(shù)技術(shù)的改進(jìn)，以及化療方案的不斷更新，對(duì)于結(jié)直腸癌的治療雖取得了重要的進(jìn)展，但由于多數(shù)結(jié)直腸癌患者在行根治性手術(shù)時(shí)已發(fā)生微轉(zhuǎn)移，以及患者對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥等的出現(xiàn)，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌往往難以治療，使得患者的總生存率并沒(méi)有顯著改善[6]。因此，尋找更有效的生物標(biāo)志物預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌患者預(yù)后仍是目前治療的重點(diǎn)[7]。在這些標(biāo)志物分子中，F(xiàn)ascin參與形成以肌動(dòng)蛋白為基礎(chǔ)的細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)，包括皮質(zhì)細(xì)胞突起(如絲狀偽足、樹(shù)突和微絨毛等)和胞質(zhì)微絲束[8]。腫瘤細(xì)胞侵襲表型的一個(gè)重要標(biāo)志是絲狀偽足這一感覺(jué)細(xì)胞器的豐富性表達(dá)。體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)同時(shí)表明絲狀偽足的形成的關(guān)鍵因素之一是肌動(dòng)蛋白纖維的有效聚合[9]。Fascin-1是目前惟一已知的定位在整個(gè)絲狀偽足上的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，通過(guò)siRNA干擾其缺失后則導(dǎo)致絲狀偽足的持續(xù)性減少[9]。此外一些研究表明Fascin-1能夠顯著增加細(xì)胞遷移[10-11]。因此，F(xiàn)ascin-1可能促進(jìn)細(xì)胞遷移參與絲狀偽足的形成。人類Fascin-1 基因在1994 年被克隆，其染色體位于7q22，該基因編碼分子量為5.5×104ku 的細(xì)胞骨架蛋白，其主要作用就是與F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合。Fascin-1蛋白的第39位的絲氨酸是蛋白激酶C(PKC)的磷酸化位點(diǎn)，磷酸化后的該位點(diǎn)可調(diào)節(jié)Fascin-1蛋白與F-肌動(dòng)蛋白的結(jié)合活性，抑制Fascin-1肌鈣蛋白的組裝功能并影響到細(xì)胞膜表面?zhèn)巫愫臀⒓男纬蒣12]。

既往的研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ascin-1蛋白在成人的上皮組織中低表達(dá)或不表達(dá)，在許多上皮來(lái)源的(如肺癌、卵巢癌、胃癌及食管癌等)腫瘤細(xì)胞系及腫瘤組織中表達(dá)明顯上調(diào)[13]，并可能與腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究中在28份正常結(jié)直腸黏膜標(biāo)本中有2份(7.1%)Fascin-1 蛋白呈高表達(dá)，在87份結(jié)直腸癌標(biāo)本共38份(43.7%)Fascin-1蛋白呈現(xiàn)高表達(dá)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌患者腫瘤組織中的Fascin-1蛋白表達(dá)明顯高于癌旁組織，提示組織中Fascin-1蛋白的高水平表達(dá)可能在結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，這與文獻(xiàn)[1]的研究一致。進(jìn)一步分析Fascin-1蛋白的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ascin-1蛋白表達(dá)在不同性別、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明Fascin-1蛋白的表達(dá)與結(jié)直腸癌生長(zhǎng)、TNM分期和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。

近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ascin-1蛋白表達(dá)與一些非結(jié)直腸癌患者的預(yù)后不良和(或)低的生存率呈正相關(guān)[14-15]，這與本研究結(jié)果一致。本研究通過(guò)長(zhǎng)期隨訪，進(jìn)一步探討了Fascin-1蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌患者的遠(yuǎn)期生存率之間的關(guān)聯(lián)。隨訪資料的Kaplan-Meier分析、單因素Cox回歸分析及多因素Cox回歸分析顯示Fascin-1蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌的預(yù)后有關(guān)，F(xiàn)ascin-1蛋白高表達(dá)提示患者預(yù)后差，因此Fasin-1蛋白表達(dá)可作為結(jié)直腸癌預(yù)后的指標(biāo)之一。另外，單因素及多因素Cox分析顯示遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與預(yù)后相關(guān)，說(shuō)明遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移狀態(tài)是影響結(jié)直腸癌預(yù)后的重要因素，提示早期診斷、早期干預(yù)能夠提高患者的生存率。

本研究證實(shí)Fascin-1蛋白在結(jié)直腸癌組織中呈高表達(dá)，與結(jié)直腸癌的遠(yuǎn)期生存率相關(guān)，其可能成為結(jié)直腸癌的預(yù)防及治療提供新的靶點(diǎn)。

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The expression of Fascin-1 in colorectal cancer and its clinical significance

Kong Fanliang,Hu Lixia,Li Chengfa,Huang Mengqin,Jiang Yingjun,Miao Huawei,Wu Yan,Wang Fengyun

(Department of Hematology and Oncology,the Second People′s Hospital of Hefei,Hefei,Anhui 230011,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression of Fascin-1 in colorectal cancer (CRC) and its clinical significance.MethodsImmunohistochemistry MaxVision method was adopted to detect the protein expression of Fascin-1 in 87 CRC tissues and 28 para-cancer tissues,and analyzed the expressions of them and the relations to clinicopathologic characteristics.Kaplan-Meier plots and Cox proportional hazards regression model were used to analyze the prognostic value of Fascin-1 expression.ResultsThe positive rates of Fascin-1 expression in CRC tissues and para-cancer tissues were 43.7%(38/87) and 7.1%(2/28) respectively,with significant difference (P<0.05).Fascin-1 expression was correlated with age,TNM staging,regional lymph node metastasis and distant metastasis,with significant difference (P<0.05),whereas it was not correlated with gender,tumor location,pathologic differentiation and pathology type,with no statistical difference(P>0.05).In the Kaplan-Meier analysis,patients with Fascin-1 over-expression had significantly shorter overall survival than those patients with negative Fascin-1 expression (P=0.009).Multivariable analysis by Cox regression model further showed that Fascin-1 over-expression was a significantly independent predictor of poorer overall survival (HR=2.087;95%CI:1.196-3.642,P=0.010).ConclusionThe expression of Fascin-1 is high and its related to the long-term survival time of patients with CRC.It is an independent prognostic factor for CRC.

[Key words]Fascin-1;colorectal neoplasms;immunohistochemistry;long-term survival time

doi:論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.11.023

作者簡(jiǎn)介：孔凡良(1963-)，副主任醫(yī)師，本科，主要從事血液腫瘤方向研究。

[中圖分類號(hào)]R73-31

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1671-8348(2016)11-1519-03

(收稿日期：2015-10-26修回日期：2016-01-10)