通心絡(luò)對(duì)急性心肌梗死患者PCI術(shù)后血清EMPs及MMP-9的影響*

李紅昆，陸永光，嚴(yán)　華，黃軍章，何東明，仇昌智

(廣西壯族自治區(qū)欽州市第二人民醫(yī)院心血管內(nèi)科　535000)

?

通心絡(luò)對(duì)急性心肌梗死患者PCI術(shù)后血清EMPs及MMP-9的影響*

李紅昆，陸永光△，嚴(yán)華，黃軍章，何東明，仇昌智

(廣西壯族自治區(qū)欽州市第二人民醫(yī)院心血管內(nèi)科535000)

[摘要]目的探討通心絡(luò)膠囊對(duì)急性心肌梗死(AMI)患者接受急診冠狀動(dòng)脈介入性治療(PCI)治療后血清內(nèi)皮細(xì)胞微粒(EMPs)及基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的影響。方法選取該院2012年1月至2014年12月AMI并接受急診PCI患者共128例，按數(shù)字隨機(jī)法分為通心絡(luò)組(A組，n=65)和常規(guī)治療組(B組，n=63)，A組在B組基礎(chǔ)上加用通心絡(luò)膠囊2粒，每日3次。分別于急診PCI術(shù)前及術(shù)后7 d抽血檢測(cè)患者血清EMPs及MMP-9。結(jié)果與B組相比，A組在治療7 d后，血清EMPs 和MMP-9差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。AMI患者血清EMPs 和MMP-9呈正相關(guān)(P<0.01)。結(jié)論對(duì)于AMI PCI術(shù)后，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上，通心絡(luò)可以進(jìn)一步抑制炎性反應(yīng)，穩(wěn)定斑塊，改善內(nèi)皮細(xì)胞功能的。

[關(guān)鍵詞]心肌梗死；冠狀動(dòng)脈疾?。换|(zhì)金屬蛋白酶9；內(nèi)皮細(xì)胞微粒；通心絡(luò)

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)多為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化基礎(chǔ)上出現(xiàn)的斑塊破裂及血栓形成所造成的。動(dòng)脈粥樣硬化病變的形成是動(dòng)脈內(nèi)膜內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)損傷作出的炎癥-增生反映的結(jié)果。內(nèi)皮細(xì)胞微粒(endothelial microparticles，EMPs)是內(nèi)皮細(xì)胞受到各種刺激后從其表面釋放的小囊泡，在冠心病中，EMPs在一定程度上可反映血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能狀態(tài)，且與冠心病的發(fā)展密切相關(guān)[1]。基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metallo proteinase-9，MMP-9)在體內(nèi)主要參與細(xì)胞外基質(zhì)的降解、重構(gòu)及炎性反應(yīng)，在冠心病中主要可影響斑塊的穩(wěn)定性[2]。本研究主要通過(guò)觀察AMI患者冠狀動(dòng)脈介入性治療(PCI)術(shù)前、術(shù)后患者血清EMPs及MMP-9的變化，以探討通心絡(luò)對(duì)AMI PCI術(shù)后患者內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。

1資料與方法

1.1一般資料選取本院2012年1月至2014年12月患有AMI并接受急診PCI患者共128例，按隨機(jī)數(shù)字法分為通心絡(luò)組(A組，n=65)和常規(guī)治療組(B組，n=63)。兩組患者年齡，性別，吸煙，合并高血壓、糖尿病等差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。A組和B組在發(fā)病至再灌注時(shí)間、Killp分級(jí)、支架植入數(shù)量、藥物治療[(包括β受體阻滯劑、他汀類(lèi)藥物、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)或血管緊張素受體抑制劑(ARB)]等方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重感染；自身免疫疾?。皇褂妹庖咭种苿?；惡性腫瘤；甲狀腺疾病和嚴(yán)重肝腎功能異常。

1.2方法

1.2.1治療方法A、B組入選患者均在入院后接受急診PCI，術(shù)前給予300 mg阿司匹林，300 mg氯吡格雷，80 mg阿托伐他汀鈣片，術(shù)后給予低分子肝素、ACEI或ARB、β-受體阻滯劑、阿司匹林腸溶片、氯吡格雷片(波立維)、阿托伐他汀鈣片等藥物。A組在此治療基礎(chǔ)上加用通心絡(luò)膠囊2粒(每粒0.26 g)，每日3次。

1.2.2血樣采集及檢測(cè)MMP-9檢測(cè)：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)試，試劑盒由武漢華美生物有限公司提供。取外周靜脈血5 mL，室溫靜置30 min，3 000 r/min 離心15 min分離血清，留取上層血清在-80 ℃冰箱中，3個(gè)月內(nèi)同批檢測(cè)，操作按照說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格進(jìn)行。EMPs檢測(cè)：治療前后采集靜脈血3 mL于真空枸杞酸鹽抗凝管中，160 g離心10 min獲取富含血小板血漿后，1 500 g離心6 min獲取血小板貧瘠血漿。取50 μL血小板貧瘠血漿，加抗體CD42-異硫氰酸熒光素(FITC)、抗CD31-藻紅蛋白(PE)0.5 μg或等量同型對(duì)照抗體(PE標(biāo)記小鼠IgG，F(xiàn)ITC標(biāo)記小鼠IgG，美國(guó)BD公司)，室溫下孵育20 min后加1 mL磷酸鹽緩沖液(PBS)，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)EMPs水平。檢測(cè)過(guò)程在血樣收集后4 h內(nèi)完成。EMPs定義為直徑小于1.0 μm且CD31+/42-陽(yáng)性的微粒。

表1　兩組發(fā)病及治療資料比較

2結(jié)果

2.1兩組血清中EMPs及MMP-9水平比較PCI術(shù)后7 d，A組及B組血清中EMPs及MMP-9水平均明顯低于PCI術(shù)前(P<0.01)，其中，A組血清EMPs及MMP-9水平低于B組(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2　兩組血清中EMPs及MMP-9水平比較

a：P<0.01，與PCI術(shù)前比較；b：P<0.05，與B組比較。

2.2EMPs及MMP-9相關(guān)性分析分別對(duì)AMI患者PCI術(shù)前及PCI術(shù)后7 d，血清MMP-9與EMPs進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果顯示，PCI術(shù)前血清MMP-9與EMPs呈正相關(guān)(r=0.738，P<0.01)，PCI術(shù)后7 d血清MMP-9與EMPs呈正相關(guān)(r=0.588，P<0.01)。

3討論

EMPs是內(nèi)皮細(xì)胞被激活或者凋亡的產(chǎn)物，內(nèi)皮細(xì)胞受到缺氧及多種炎性介質(zhì)的刺激后便開(kāi)始在刺激部位出現(xiàn)鈣離子聚集，并激活鈣蛋白酶使踝蛋白降解導(dǎo)致細(xì)胞骨架裂解并重組，使內(nèi)皮細(xì)胞出芽形成EMPs[1]。在冠心病及其他伴有內(nèi)皮功能障礙的心血管疾病中，EMPs均有明顯的增高[2]。EMPs不僅可反應(yīng)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥和功能障礙，而且可反過(guò)來(lái)作用于內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)一步加重內(nèi)皮功能失調(diào)，內(nèi)皮細(xì)胞被激活后表達(dá)大量黏附分子，使得外周的單核細(xì)胞易于附著并遷移入血管內(nèi)膜，促使各種炎性介質(zhì)及細(xì)胞因子分泌，進(jìn)一步加重血管內(nèi)膜炎性反應(yīng)，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展[3-4]。

MMP-9是一種由可由多種細(xì)胞如中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞分泌的明膠酶，在細(xì)胞外基質(zhì)的降解及重構(gòu)過(guò)程中起重要作用。研究證實(shí)，在冠心病中，尤其是不穩(wěn)定斑塊內(nèi)易發(fā)生破裂斑塊肩部區(qū)域MMP-9活性明顯增加，MMP-9可使斑塊膠原纖維降解，纖維帽變薄，從而影響斑塊的穩(wěn)定性[5-6]。

本研究中，AMI后患者PCI術(shù)后7 d較術(shù)前，血清MMP-9和EMPs水平可明顯降低(P<0.01)，且MMP-9和EMPs存在明顯的直線相關(guān)?？赡転殡S著動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)炎癥細(xì)胞及炎性因子逐漸加重，不斷分泌大量的MMP-9，在冠心病中主要由巨噬細(xì)胞分泌[7]。MMP-9的分泌增多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的降解和纖維帽的變薄，增加斑塊的不穩(wěn)定性，不穩(wěn)定斑塊破裂后導(dǎo)致AMI，AMI進(jìn)一步加重內(nèi)皮細(xì)胞缺血缺氧，釋放大量的EMPs，EMPs又反作用于內(nèi)皮細(xì)胞，加重內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，促使各種炎性介質(zhì)及細(xì)胞因子大量分泌[8-9]。因此，EMPs和MMP-9與冠心病患者內(nèi)皮細(xì)胞功能狀態(tài)和炎性反應(yīng)密切相關(guān)。

通心絡(luò)是依據(jù)傳統(tǒng)中藥的絡(luò)病理論而制成的用于治療缺血性心腦血管疾病的中藥復(fù)方制劑，具有增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞功能、抑制炎癥、阻止動(dòng)脈粥樣硬化和促進(jìn)血管新生的作用。體外研究證實(shí)，通心絡(luò)可以通過(guò)PI-3K/Akt/HIF依賴(lài)的信號(hào)通路，作用于內(nèi)皮細(xì)胞上調(diào)內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)，以及抑制內(nèi)皮骨架蛋白損傷，保持內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的完整性，進(jìn)而改善內(nèi)皮細(xì)胞功能[10-11]。還可以通過(guò)腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)途徑修復(fù)了內(nèi)皮細(xì)胞中被軟脂酸抑制的抗氧化系統(tǒng)，使硫氧還原蛋白表達(dá)增加，增加內(nèi)皮細(xì)胞的抗氧化能力，抑制氧化低密度脂蛋白促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞的分化和成熟，使其吞噬能力及分泌細(xì)胞因子的活性減弱，減少系統(tǒng)性炎癥及局部炎癥因子的表達(dá)，增加斑塊穩(wěn)定性[12-13]。本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，PCI術(shù)后7 d血清MMP-9和EMPs水平均較術(shù)前明顯降低(P<0.01)，且A組中EMPs和MMP-9水平較B組下降更加顯著(P<0.05)，可能與通心絡(luò)通過(guò)AMPK途徑修復(fù)細(xì)胞的抗氧化系統(tǒng)，減少炎癥細(xì)胞及炎性因子的釋放，從而減少了MMP-9的分泌。另外，通心絡(luò)也可上調(diào)細(xì)胞中eNOS，而EMPs正是通過(guò)影響內(nèi)皮細(xì)胞eNOS的生成，損傷內(nèi)皮骨架蛋白，通心絡(luò)可以起到有效抑制和修復(fù)作用，減少對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的損害[14-15]。因此通心絡(luò)可以在常規(guī)藥物治療基礎(chǔ)上進(jìn)一步抑制內(nèi)皮細(xì)胞炎性反應(yīng)，改善內(nèi)皮細(xì)胞功能，增強(qiáng)斑塊穩(wěn)定性。

綜上所述，EMPs和MMP-9與冠心病的發(fā)展有著密切的關(guān)系，及時(shí)檢測(cè)血清EMPs和MMP-9水平不僅可反應(yīng)冠心病患者血管內(nèi)細(xì)胞的功能狀態(tài)，而且可評(píng)估藥物治療過(guò)程中療效。

參考文獻(xiàn)

[1]Smadja DM,Gaussem P,Mauge L,et al.Comparison of endothelial biomarkers according to reversibility of pulmonary hypertension secondary to congenital heart disease[J].Pediatr Cardiol,2010,31(5):657-662.

[2]Cui Y,Zheng L,Jiang M,et al.Circulating microparticles in patients with coronary heart disease and its correlation with interleukin-6 and C-reactive protein[J].Mol Biol Rep,2013,40(11):6437-6442.

[3]陸永光，符春暉，嚴(yán)華，等．阿托伐他汀對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞微粒誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞VCAM-1和ICAM-1表達(dá)的影響[J]．中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32(4)：286-289．

[4]St?pień E,Stankiewicz E,Zalewski J,et al.Number of microparticles generated during acute myocardial infarction and stable angina correlates with platelet activation[J].Arch Med Res,2012,43(1):31-35.

[5]Tanner RM,Lynch AI,Brophy VH,et al.Pharmacogenetic associations of MMP9 and MMP12 variants with cardiovascular disease in patients with hypertension[J].PLoS One,2011,6(8):e23609.

[6]Deleon-Pennell KY,De Castro Brás LE,Iyer RP,et al.P.gingivalis lipopolysaccharide intensifies inflammation post-myocardial infarction through matrix metalloproteinase-9[J].J Mol Cell Cardiol,2014,76(18):218-226.

[7]Springall R,Amezcua-Guerra LM,Gonzalez-Pacheco H,et al.Interferon-gamma increases the ratio of matrix metalloproteinase-9/tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in peripheral monocytes from patients with coronary artery disease[J].PLoS One,2013,8(8):e72291.

[8]Kuliczkowski W,Urbaniak J,Hallén J,et al.Matrix metalloproteinases and the activity of their tissue inhibitors in patients with ST-elevation myocardial infarction treated with primary an-gioplasty[J].Kardiol Pol,2013,71(5):453-463.

[9]Guo JL,Yang YN,Ma YT,et al.Values of matrix metalloproteinase-9 in early diagnosis and short-term prognosis of ST-segment elevation myocardial infarction[J].Zhonghua Yi Xue Za Zhi,2012,92(38):2681-2684.

[10]梁俊清，徐海波，陳小娟，等．通心絡(luò)通過(guò)PI-3K/Akt/HIF信號(hào)通路改善血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧損傷[J]．中國(guó)病理生理雜志，2012，32(5)：846-851．

[11]段煉，楊躍進(jìn)，張海濤，等．豬急性心肌梗死再灌注后氧化應(yīng)激損傷及通心絡(luò)的保護(hù)作用[J]．中國(guó)病理生理雜志，2010，13(3)：430-434．

[12]Wang B,Yang Q,Bai WW,et al.Tongxinluo protects against pressure overload-induced heart failure in mice involving VEGF/Akt/eNOS pathway activation[J].PLoS One,2014,9(6):e98047.

[13]Su W,Sun A,Xu D,et al.Tongxinluo inhibits oxidized low-density lipoprotein-induced maturation of human dendritic cells via activating peroxisome proliferator-activated receptor gamma pathway[J].J Cardiovasc Pharmacol,2010,56(2):177-183.

[14]Zhang L,Wu Y,Jia Z,et al.Protective effects of a compound herbal extract (Tong Xin Luo) on free fatty acid induced endothelial injury:implications of antioxidant system[J].BMC Com-plement Altern Med,2008,8(8):39.

[15]Bai WW,Xing YF,Wang B,et al.Tongxinluo improves cardiac function and ameliorates ven-tricular remodeling in mice model of myocardial infarction through enhancing angiogenesis[J].Evid Based Complement Alternat Med,2013(2):813247.

Influence of tongxinluo on blood endothelial microparticles and MMP-9 in patients with acute myocardial infarction after percutaneous coronary intervention*

LiHongkun，LuYongguang△，YanHua，HuangJunzhang，HeDongming，QiuChangzhi

(DepartmentofCardiology，theSecondPeople′sHospitalofQinzhouCity，Qinzhou,theGuangxiZhuangAutonomousRegion535000，China)

[Abstract]ObjectiveTo study influence of tongxinluo on blood endothelial microparticles(EMPs) and matrix metalloproteinase-9(MMP-9) in patients with acute myocardial infarction after percutaneous coronary intervention(PCI).MethodsOne hundred and twenty-eight hospitalized patients with acute myocardial infarction after per-cutaneous coronary intervention were recruited from January 2012 to December 2014，All patients were randomly divided into tongxinluo group (n=65) and control group (conventional treatment，n=63).Tongxinluo group was on the basis of conventional treatment group with tongxinluo capsules 2 plus，3 times a day.We detected the EMPs and MMP-9 of two groups preoperatively and on the 7th postoperatively day.ResultsCompared with the conventional treatment group，blood EMPs and MMP-9 in tongxinluo group were lower after 7 days treatment，the difference was statistically significant (P<0.05).There was a positive correlation between the EMPs and MMP-9(P<0.05).ConclusionFor patients with acute myocardial infarction after percu-taneous coronary intervention，tongxinluo could further inhibit inflammatory reaction,make the plaque stability and improve the function of endothelial cells on the basis of conventional treatment groups.

[Key words]myocardial infarction；coronary artery disease；matrix metalloproteinase-9；endothelial microparticles；tongxinluo

doi:論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.03.021

*基金項(xiàng)目：廣西自然科學(xué)資助基金(2012GXNSFBA053113)；廣西衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費(fèi)科研課題(Z2011103)。

作者簡(jiǎn)介：李紅昆(1981-)，主治醫(yī)師，碩士，主要從事冠心病防治研究?！魍ㄓ嵶髡?，E-mail:evershine_lu@hotmail.com。

[中圖分類(lèi)號(hào)]R542.22

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1671-8348(2016)03-0354-02

(收稿日期：2015-08-08修回日期：2015-10-26)