C-FOS、STAT 3在PCOS患者著床窗口期子宮內膜的表達及意義

楊雪峰 劉麗偉 李愛杰

C-FOS、STAT 3在PCOS患者著床窗口期子宮內膜的表達及意義

楊雪峰 劉麗偉 李愛杰

目的 探討C-FOS，STAT 3對多囊卵巢綜合征（PCOS）患者窗口期子宮內膜容受性的影響。方法 選取15例已婚PCOS患者（PCOS組），14例其他原因導致不孕的婦女（對照組），在窗口期收集其子宮內膜組織，經HE染色判斷組織學分期，用免疫組織化學SP法檢測C-FOS，STAT 3在窗口期子宮內膜的表達。結果 PCOS組窗口期C-FOS表達高于對照組，STAT 3表達低于對照組，二者呈顯著負相關，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。結論C-FOS高表達、STAT 3低表達可能影響PCOS組窗口期子宮內膜容受性的建立，是造成PCOS患者妊娠率低、流產率高的原因之一。

多囊卵巢綜合征；子宮內膜容受性；C-FOS因子；STAT 3因子

多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是常見的內分泌、代謝紊亂性疾病，主要以月經不規(guī)則，不孕，雄激素過高，高胰島素血癥為臨床特征。PCOS在生育年齡女性的發(fā)病率為6%～8%，占無排卵性不孕的50%～70%，約50%PCOS患者有復發(fā)性流產史。具有妊娠率低、流產率高的特點。本研究用免疫組織化學方法，檢測C-FOS，STAT 3在促排卵后PCOS患者和其他原因不孕患者著床窗口期子宮內膜的表達，探討PCOS患者經過糾正內分泌紊亂后，妊娠率低、流產率高的可能原因，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機抽取2014年3月～2015年2月在鄭州大學第三附屬醫(yī)院門診就診的15例已婚PCOS患者為實驗組。符合條件：診斷標準符合2003年鹿特丹標準，年齡25～35歲，平均年齡（28.8±3.3）歲。經藥物治療后，月經規(guī)律，內分泌恢復正常，自然排卵或促排卵治療后正常排卵，丈夫精液檢查正常，無其他內科合并病癥等。隨機抽取同期在鄭州大學第三附屬醫(yī)院門診就診的14例因輸卵管或男方因素導致不孕患者為對照組。符合條件：年齡25～35歲，平均年齡（27.7±2.5）歲。月經規(guī)律、內分泌正常，正常排卵，近3個月未用過激素類藥物，陰道B超檢查未發(fā)現子宮、卵巢器質性病變，無其他內科合并癥及并發(fā)癥等。2組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 實驗方法

1.2.1 標本采集 PCOS組采用自然周期排卵或者用促排卵治療方案[克羅米芬（CC）50 mg/d，月經周期第5～9天連續(xù)服用]，月經第12天開始，經陰道B超監(jiān)測卵泡發(fā)育及子宮內膜厚度。當卵泡直徑為18～23 mm，子宮內膜厚度大于8 mm時肌肉注射人絨毛膜促性腺激素HCG 10000 U，指導患者同房。于注射HCG后第3天，經陰道B超檢查確認優(yōu)勢卵泡已破。對照組于月經周期第12天開始經陰道B超監(jiān)測卵泡發(fā)育及子宮內膜厚度，于排卵日指導患者同房。PCOS組和對照組均于著床窗口期，即排卵后第8～10天，晨空腹抽取肘靜脈血3 mL，檢測血E2、P、HCG水平。當血THCG＜30 IU/L時（本院檢驗科標準），認為患者本月無妊娠可能。并于抽血當日下午，在無菌操作下，用一次性子宮內膜取樣管吸取少許子宮內膜組織。將所取新鮮子宮內膜組織立即放入10%甲醛溶液中固定，常規(guī)梯度酒精脫水后石蠟包埋，切片，HE染色，經同一個經驗豐富的病理科醫(yī)生觀察子宮內膜病理組織學情況。本研究所有實驗對象均于取樣前簽署知情同意書。

1.2.2 子宮內膜C-FOS，STAT 3的測定 C-FOS，STAT 3一抗均用鼠抗人單克隆抗體工作液，二抗均用羊抗鼠工作液，按照標準免疫組化SP法進行操作。

1.2.3 結果判定 免疫組化SP法染色切片呈棕黃色（低表達）或棕褐色（高表達）。每張切片分別選取5個不重疊的陽性區(qū)域（高倍鏡視野下，40×10倍），用病理圖像分析系統(tǒng)檢測其表達情況。每個因子的平均光密度值（OD）表示該因子在相應組子宮內膜的表達情況。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件，計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗，定性資料比較采用Fishers確切概率法，相關性分析用pearson相關性分析法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 2組著床窗口期血雌激素（E2）、孕激素（P）水平比較 著床窗口期PCOS組血清E2值為（267.3±19.7），對照組為（225.5±18.6），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。著床窗口期PCOS組血清P值為（11.2±2.6），對照組P值為（13.5±2.5），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 2組子宮內膜病理組織學結果 對照組子宮內膜分泌早期4例，分泌晚期10例，分泌反應欠佳3例（占21.4%）。PCOS組分泌早期3例，分泌晚期12例，分泌反應欠佳10例（占66.7%），2組比較差異具有統(tǒng)計意義（P＜0.05）。見表2。

表1 2組著床窗口期血清E2、P水平比較（±s）

表1 2組著床窗口期血清E2、P水平比較（±s）

組別例數E2(ng/L)P(μg/L) PCOS組15267.3±19.711.2±2.6對照組14225.5±18.613.5±2.5 t值5.880-2.359 P值＜0.01＜0.05

表2 2組子宮內膜病理組織學結果(n)

2.3 子宮內膜組織中C-FOS，STAT 3的表達 2組子宮內膜組織中，C-FOS主要表達于子宮內膜腺上皮細胞、基質細胞的細胞核，STAT 3表達于子宮內膜腺上皮細胞的細胞漿和細胞核，均呈棕黃色或棕褐色。PCOS組C-FOS表達高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；STAT 3表達低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表3。二者表達呈顯著負相關（r=-0.985，P＜0.01）。

表3 PCOS組和對照組窗口期子宮內膜C-FOS和STAT 3的表達（±s）

表3 PCOS組和對照組窗口期子宮內膜C-FOS和STAT 3的表達（±s）

組別例數C-FOS（OD）STAT 3(OD) PCOS組150.473±0.0360.048±0.005對照組140.114±0.0080.233±0.016 t值37.381-43.969 P值＜0.01＜0.01

3 討論

3.1 PCOS組和對照組子宮內膜病理結果分析 本研究中，PCOS組子宮內膜分泌反應欠佳發(fā)生率高于對照組，提示PCOS患者經過糾正內分泌及代謝紊亂和促排卵治療后，雖然可以正常排卵，但由于PCOS患者窗口期雌、孕激素分泌不足，不僅造成PCOS患者子宮內膜組織形態(tài)發(fā)生改變，分泌反應欠佳，而且引起PCOS患者子宮內膜容受性降低，造成其妊娠率低流產率高的臨床特點。Roemer KL等[1]認為，PCOS患者子宮內膜孕激素抵抗和長期雌激素作用，導致PCOS患者子宮內膜容受性降低。本研究與國外報道基本一致。

3.2 C-FOS在PCOS組和對照組子宮內膜表達情況C-FOS由即刻早期基因（IEGS）C-FOS表達產生。C-FOS在絕大多數細胞中呈低表達狀態(tài)，參與細胞生長、增殖、分化、信號傳遞等生理過程。孫雪艷[2]等研究發(fā)現EM患者窗口期在位子宮內膜C-FOS蛋白表達明顯升高，推測EM患者窗口期在位子宮內膜C-FOS蛋白的高表達可能會降低子宮內膜容受性而影響胚胎著床。Fujimoto J[3]等通過對子宮內膜癌細胞和來源于子宮內膜的纖維母細胞研究發(fā)現，雌激素促進C-FOS表達，孕激素抑制C-FOS表達，認為C-FOS在人子宮內膜周期性表達，且增生期表達高于分泌期。Maldonado Vicente[4]研究表明，性激素通過C-FOS等因子發(fā)揮對子宮內膜的周期性調節(jié)作用。本研究中，PCOS組窗口期C-FOS表達高于對照組，說明PCOS患者雖然內分泌紊亂糾正后，可以正常排卵，由于孕激素分泌不足，不能抑制子宮內膜C-FOS表達，導致窗口期子宮內膜C-FOS高表達。異常表達的C-FOS可能使性激素不能發(fā)揮對子宮內膜周期性作用，影響子宮內膜蛻膜化，降低PCOS患者窗口期子宮內膜容受性。對照組窗口期PCOS表達低于對照組，推測低表達的C-FOS在維持窗口期子宮內膜形態(tài)和功能方面起重要作用。

3.3 STAT 3在2組子宮內膜的表達情況 信號轉導和轉錄活化因子(STATS)家族是一種存在于胞漿并在激活后能夠轉入核內與DNA結合的蛋白家族，具有信號轉導和轉錄調控雙重功能。目前在哺乳動物中已鑒定出STAT家族成員有STATl(a/ B)、STAT 2、STAT 3(a／13／'y)等。STAT 3是STATS家族中與腫瘤關系最為密切的一員，參與腫瘤細胞多種重要的生理活動。Sun X[5]等通過控制性地刪除小鼠STAT 3基因的表達，發(fā)現這些小鼠雌激素反應性基因上調，孕激素反應性基因下調，這些變化導致子宮腔上皮細胞分化失敗，阻止容受態(tài)子宮內膜的建立，從而導致胚胎種植失敗，認為STAT 3對子宮內膜容受性和胚胎種植至關重要。本研究中，PCOS組窗口期STAT 3表達低于對照組，可能通過下調孕激素反應性基因，降低孕激素對子宮內膜的蛻膜化作用，不利于子宮腔上皮分化。TSLP通過STAT 3通路抑制蛻膜細胞凋亡[6]，低表達的STAT 3可能使TSLP抑制蛻膜細胞凋亡的作用減弱，加速蛻膜細胞凋亡，削弱PCOS患者窗口期子宮內膜容受性，不易于妊娠的建立和維持，可能是PCOS患者妊娠率低流產率高的原因之一。對照組窗口期STAT 3表達較高，說明高表達的STAT 3利于子宮內膜容受性建立。與國外報道[7]基本一致。

本研究中，PCOS患者窗口期C-FOS高表達，STAT 3低表達，這些變化，可能通過一定環(huán)節(jié)影響PCOS患者子宮內膜容受性的建立。C-FOS，STAT 3作為PCOS患者內膜容受性的新的影響因子，仍需要進一步的研究與證實，但是期待通過干預窗口期二者的表達，為改善多囊患者妊娠率低、流產率高的臨床狀態(tài)提供理論依據。

[1] Roemer KL,Young SL,Savaris RF.Characterization of GAB1 expression over the menstrual cycle in women with and without polycystic ovarian syndrome provides a new insight into its pathophysiology[J].J Clin Endocrinol Metab,2014,99(11):162-168.

[2] 孫雪艷,李艷萍.C-fos和整合素β3在子宮內膜異位癥窗口期在位子宮內膜的表達[J].中國婦幼保健雜志,2009,24（7）:985-988.

[3] Fujimoto J, Hori M;,Ichigo S,et al.Estrogen induces expression of c-fos and c-jun via activation of protein kinase C in an endometrial cancer cell line and fibroblasts derived from human uterin eendometrium[J]. Gynecological Endocrinology,1996,10(2):109-118.

[4] Maldonado Vicente，Castilla,Jose Antonio，et al.Expression of transcription factors in endometrium during natural cycles[J].Journal of Assisted Reproduction and Genetics,2003,20(11)：474-481.

[5] Sun Xiaofei,Bartos Amanda,Whitsett,et al.Uterine deletion of gp130 or stat3 shows implantation failure with increased estrogenic responses[J].J MolEndocrinol,2013,27(9):1492-1501.

[6] Duan J,Jiang XP,Li MQ,et al.Thymic Stromal Lymphopoietin Suppresses the Apoptosis of Decidual Gamma-delta T Cells via Regulation of the Signal Transduction and Activation of Transcription 3/Caspase-3 Signaling Pathway[J].Am J Reprod Immunol,2013,70(6):464-471. [7] Tanaka T, Bai T,Utsunomiya H,et al.STAT3 enhances intracellular Fasmediated apoptotic signals in HHUA human endometrial epithelial cells[J]. Mol Med Report,2011,4(2):301-312.

Objective To explore the effect of C-FOS and STAT 3 on endometrial receptivity of polycystic ovarian syndrome (PCOS). Methods The endometrial samples were obtained from 15 marride cases with PCOS (PCOS group) and 14 infertile women cause of other factors (Control guoup) at the window of implatation, hematoxylin-eosin staining to determin the samples' histologic staging,immunohitochemical method to test the expression of C-FOS and STAT 3. Results At the window of implantation, the expression levels of C-FOS in PCOS group were higher than those in Control group, while the expression levels of STAT 3 were on the contrary, the differences was statistically signif i cant (P<0.01). Conclusion The high expression of C-FOS and the low expression of STAT 3 may affect the establishment of endometrial receptivity in PCOS, which may be one of the reasons of the low pregnancy rate and high rate of abortion in them.

Polycystic ovarian syndrome；Endometrial receptivity；C-FOS；STAT 3

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.1.001

河南 450052 河南省鄭州市鄭州大學第三附屬醫(yī)院婦產科 （楊雪峰 劉麗偉 李愛杰）