p53、C-myc和CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及臨床意義

王　璐，楊文秀

(1.貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，貴陽 550004；2.貴州省安順市人民醫(yī)院CT室　561000)

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論著·臨床研究

p53、C-myc和CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及臨床意義

王璐1，2，楊文秀1△

(1.貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，貴陽 550004；2.貴州省安順市人民醫(yī)院CT室561000)

[摘要]目的探討p53、C-myc和CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌患者中的表達情況及臨床意義。方法免疫組織化學(xué)法檢測45例甲狀腺乳頭狀癌和45例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織標本p53、C-myc和CerbB-2表達情況，分析其與患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果p53、C-myc和CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率均明顯高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫(P<0.01)。p53和C-myc在甲狀腺乳頭狀癌的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌的表達與腫瘤大小、局部浸潤、TNM分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(均P<0.05)。p53、C-myc和CerbB-2陽性表達均是甲狀腺乳頭狀癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨立危險因素。結(jié)論p53、C-myc和CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌中呈高表達，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，對三者進行檢測可成為甲狀腺乳頭狀癌早期診斷的評價指標。

[關(guān)鍵詞]甲狀腺腫瘤；腺癌,乳頭狀；p53；C-myc；CerbB-2；臨床病理特征；診斷,鑒別

甲狀腺乳頭狀癌是一種常見的甲狀腺惡性腫瘤，近年來在我國發(fā)病率呈逐年上升趨勢。雖然甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后較好，但是依舊有10%的患者直接死于甲狀腺癌和22%～30%的患者死于復(fù)發(fā)性甲狀腺癌[1]。已有報道年齡、性別、腫瘤大小、包膜侵犯、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后的重要因素[1]。但是甲狀腺癌的診斷和預(yù)后分子標記物依舊存在較大爭議，因此準確診斷甲狀腺乳頭癌和預(yù)測甲狀腺乳頭癌預(yù)后對指導(dǎo)患者的治療有重要作用。p53基因是一種常見的腫瘤抑制基因，其編碼的p53蛋白在細胞生長、調(diào)控中起到重要作用；C-myc蛋白可以促進甲狀腺癌細胞分裂和增生；CerbB-2蛋白也在多種腫瘤發(fā)病中起重要作用[2-3]。目前有報道顯示p53、C-myc和CerbB-2在胃癌及癌前病變同時存在高表達[4]，但是在甲狀腺乳頭狀癌中尚未見報道。因此，本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測p53、C-myc和CerbB-2在甲狀腺乳頭癌中的表達情況，探討p53、C-myc和CerbB-2能否成為甲狀腺乳頭癌發(fā)生發(fā)展的分子標記物，為指導(dǎo)甲狀腺乳頭狀癌診斷提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1組織標本采集選取2006年10月至2014年10月安順市人民醫(yī)院病理科手術(shù)切除的甲狀腺乳頭狀癌組織45例和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織45例。甲狀腺乳頭狀癌患者中男21例，女24例；年齡21～68歲，平均(42.6±13.6)歲；腫瘤直徑大于或等于1.0 cm 12例、<1.0 cm 33例；依據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(UICC)TNM分期標準Ⅰ+Ⅱ期31例，Ⅲ+Ⅳ期14例；組織學(xué)分型典型31例、濾泡型10例、高細胞型4例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例。結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中男23例，女22例；年齡19～71歲，平均(43.1±15.2)歲。術(shù)前患者均未接受過放射治療、化學(xué)治療等治療，所有標本行蘇木素-伊紅(HE)染色重新確診。

1.2方法將石蠟標本包埋并制作4 μm連續(xù)病理切片，按照免疫組織化學(xué)染色說明書中的方法進行染色。DAB試劑盒和SP染色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，鼠抗人p53單克隆抗體、鼠抗人C-myc單克隆抗體和鼠抗人CerbB-2單克隆抗體購自Abcam公司。由兩位病理醫(yī)生進行雙盲閱片，結(jié)果取平均值。免疫組織化學(xué)結(jié)果判定標準：采用半定量對p53、C-myc和CerbB-2進行分析，按陽性細胞的染色強度記分等級為0、1、2、3分；按染色陽性細胞百分比記分等級為0分(<10%細胞陽性)、1分(10%～25%細胞陽性)、2分(26%～50%細胞陽性)、3分(51%～75%細胞陽性)、4分(>75%細胞陽性)；將染色強度和染色百分比相乘得到的分數(shù)即為最后染色水平分級：0～3分定義為陰性，4～12分定義為陽性。

1.3檢測指標分析甲狀腺乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織中p53、C-myc和CerbB-2表達情況；甲狀腺乳頭狀癌患者臨床病理特征年齡、性別、腫瘤大小、局部浸潤、TNM分期、組織學(xué)分型、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與p53、C-myc和CerbB-2表達的關(guān)系；將年齡、性別、腫瘤大小、局部浸潤、組織學(xué)分型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、p53陽性表達、C-myc陽性表達和CerbB-2陽性表達納入甲狀腺乳頭狀癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移多因素Logistic回歸分析；分別計算p53、C-myc和CerbB-2的敏感度、特異度和準確度。敏感度=真陽性/(真陽性+假陰性)，特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)，準確度=(真陽性+真陰性)/(所有陽性+所有陰性)。

2結(jié)果

2.1p53、C-myc和CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中的表達p53、C-myc和CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為75.6%、80.0%、53.3%，明顯高于在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中的陽性表達率22.2%、44.4%、17.8%(P<0.01)，見表1。

2.2p53、C-myc和CerbB-2表達與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征的關(guān)系在45例甲狀腺乳頭狀癌中，p53、C-myc的表達只與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P=0.019,P=0.044)，與年齡、性別、腫瘤大小、局部浸潤、TNM分期、組織學(xué)分型和分化程度無關(guān)(均P>0.05)；CerbB-2的表達與腫瘤大小、局部浸潤、TNM分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P=0.016,P=0.008,P=0.024,P=0.090,P=0.002)，與年齡、性別和組織學(xué)分型無關(guān)(均P>0.05)。見表2。

表1　　p53、C-myc和CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中的表達[n(%)]

表2　　p53、C-myc和CerbB-2表達與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征的關(guān)系(n)

2.3甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與臨床病理特征的關(guān)系在甲狀腺乳頭狀癌患者中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與年齡、性別、局部浸潤、組織學(xué)分型和分化程度無關(guān)(均P>0.05)；與腫瘤大小、p53陽性表達、C-myc陽性表達和CerbB-2陽性表達有關(guān)(P=0.003,P=0.003,P=0.002,P=0.000)。多因素Logistic回歸分析顯示，影響甲狀腺乳頭狀癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相對危險度(OR)由大到小依次為CerbB-2陽性表達、C-myc陽性表達、p53陽性表達、腫瘤大小、分化程度、局部浸潤、性別、組織學(xué)分型和年齡。見表3。

表3　　甲狀腺乳頭癌 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與臨床病理特征的多因素

2.4p53、C-myc和CerbB-2診斷甲狀腺乳頭狀癌的敏感度、特異度、準確度p53,C-myc和CerbB-2診斷甲狀腺乳頭狀癌的敏感度分別是85.0%、87.8%、82.8%，特異度分別是73.3%、69.2%、77.8%，準確度分別是81.8%、83.3%、80.4%。三者在敏感度、特異度和準確度的數(shù)值上比較接近。見表4。

表4　　p53、C-myc和CerbB-2敏感度、特異度、

3討論

目前，大多數(shù)甲狀腺腫瘤采用組織病理學(xué)或細胞學(xué)檢查能做出診斷，但是由于乳頭狀增生的結(jié)節(jié)難以區(qū)分良惡性，導(dǎo)致在甲狀腺乳頭癌的診斷上依舊比較困難。同時，在甲狀腺乳頭狀癌的預(yù)后指標中，尚缺乏有效的特異分子標志物。因此本研究采用免疫組織化學(xué)法分析p53、C-myc和CerbB-2表達情況和及其臨床意義。

p53基因是編碼于17號染色體的重要抑癌基因，其編碼的p53蛋白在參與細胞周期轉(zhuǎn)換、DNA修復(fù)、細胞分化和凋亡中有著重要作用。在人類大多數(shù)腫瘤中可見p53基因突變，是惡性腫瘤中最常突變的基因之一。在甲狀腺癌中，40%～62%的未分化癌和0～25%的高分化癌中存在p53基因突變[5]，突變后會使p53蛋白更易被檢查。國內(nèi)報道中，趙麗華等[6]研究顯示p53在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為88.4%，診斷的敏感度、特異度和準確度分別為88.4%、85.1%和86.2%；王亞奇等[7]研究顯示p53在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為46.9%，并與患者的年齡、性別無關(guān)；祁燕云等[8]研究顯示p53在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為86.1%。國外報道中，多數(shù)研究報道顯示p53在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率在11%～59%[9-10]；Morita等[11]研究顯示p53在甲狀腺乳頭狀癌的陽性表達率為47.3%，并與腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；也有研究顯示p53甲狀腺乳頭狀癌的表達和臨床病理特征無明顯關(guān)系[9]。國內(nèi)外對于將p53作為甲狀腺乳頭狀癌診斷和預(yù)后分子標記物尚存在爭議，同時國內(nèi)研究中p53在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率普遍高于國外，其中原因還有待進一步研究。本研究顯示p53在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為75.6%，并與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，診斷的敏感度、特異度和準確度分別為85.0%、73.3%、81.8%。這一結(jié)果和國內(nèi)多項研究結(jié)果接近。

C-myc是一種常見的原癌基因，它可促進細胞增殖或誘導(dǎo)細胞凋亡，在調(diào)節(jié)細胞生長、分化或者惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用。C-myc在淋巴瘤、膠質(zhì)細胞瘤、肝癌、肺癌、乳腺癌、甲狀腺癌等都存在高表達，并參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，是腫瘤治療的一個重要潛在靶點[12]。國內(nèi)報道中，萬婕等[13]研究顯示C-myc在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為78.8%，并與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；胡耀杰等[14]研究顯示C-myc在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為81.0%，并與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。國外研究顯示，C-myc在甲狀腺乳頭狀癌中存在高表達，有關(guān)C-myc和甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征的關(guān)系尚未見報道[15]。本研究顯示C-myc在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為80.0%，并與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，診斷的敏感度、特異度和準確度分別為87.8%、69.2%、83.3%。

CerbB-2基因又稱neu或HER-2，是一種位于染色體17q21上的原癌基因，其基因表達產(chǎn)物是一種具有酪氨酸激酶活性的糖蛋白，在細胞信號傳導(dǎo)中具有重要作用，主要參與細胞生長分化的調(diào)節(jié)，促進細胞分裂和增殖。目前CerbB-2在乳腺癌領(lǐng)域的研究已為學(xué)者熟知，其生物靶向治療已廣泛應(yīng)用于臨床。同時，也有研究顯示CerbB-2在胃癌、骨肉瘤、甲狀腺癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展中有重要作用[16]。對于CerbB-2作為甲狀腺乳頭狀癌診斷和預(yù)后分子標記物尚存在爭議。在國內(nèi)報道中，王麗娟等[17]研究顯示CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為46.6%，并與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度及臨床分期有關(guān)；靳英等[18]研究顯示CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為24.7%，與患者的性別、年齡及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān)。Wu等[19]研究顯示CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為79.5%，診斷靈敏感度和特異度分別是79.5%和 88.0%。在國外報道中，F(xiàn)reudenberg等[20]研究顯示CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為34.4%，并與腫瘤復(fù)發(fā)有關(guān)；本研究顯示CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率為53.3%，并與腫瘤大小、局部浸潤、TNM分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，診斷的敏感度、特異度和準確度分別為82.8%、77.8%、80.4%。

在本研究中，同時將p53、 C-myc和CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌中進行研究，結(jié)果顯示均呈高表達，并都與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，同時CerbB-2陽性表達還與腫瘤大小、局部浸潤、TNM分期、分化程度有關(guān)。提示三者與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)。在多因素Logistic回歸分析中，顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤大小、p53陽性表達、C-myc陽性表達和CerbB-2陽性表達有關(guān)，并且p53、C-myc和CerbB-2陽性表達在多種危險因素中有更高的OR值，這進一步顯示p53、C-myc和CerbB-2陽性表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的密切關(guān)系，提示p53、C-myc和CerbB-2對判斷甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后有重要價值。同時，p53,C-myc和CerbB-2在診斷甲狀腺乳頭狀癌中表現(xiàn)出較高的敏感度、特異度、準確度，提示其也可以作為鑒別診斷甲狀腺乳頭狀癌的重要標志物。為了進一步提高診斷準確性，可以考慮聯(lián)合檢測3種分子標志物。

綜上所述， p53、C-myc和CerbB-2在甲狀腺乳頭狀癌中均呈高表達，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，三者可成為甲狀腺乳頭狀癌診斷分子標志物，并進一步指導(dǎo)甲狀腺乳頭狀癌臨床治療。

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The expression and clinical significance of p53,C-myc and CerbB-2 in thyroid papillary carcinoma

WangLu1，2,YangWenxiu1△

(1.DepartmentofCT,People′sHospitalofAnshuncity,Anshun,Guizhou561000,China;2.DepartmentofPathology,theAffiliatedHospitalofGuiyangMedicalUniversity,Guiyang,Guizhou550004,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression level and clinical significance of p53,C-myc and CerbB-2 in papillary thyroid carcinoma patients.MethodsThe expression level of p53,C-myc and CerbB-2 were detected in 45 cases of papillary thyroid carcinoma tissue specimens and 45 cases of nodular goiter tissue specimens by using immunohistochemical staining.Their correlations with clinic pathological features in papillary thyroid carcinoma were analyzed further.ResultsThe positive expression rates of p53,C-myc and CerbB-2 in the papillary thyroid carcinoma tissue specimens were significantly higher than that of the nodular goiter tissue specimens(all P<0.01).The expression of C-myc and CerbB-2 significantly correlated with lymph node metastasis(P<0.05).The expression of CerbB-2 significantly correlated with tumor size,local infiltration,TNM stage,differentiated degree and lymph node metastasis (all P<0.05).p53 positive expression,C-myc positive expression and CerbB-2 positive expression were the independent factors of cervical lymph node metastasis.Conclusionp53,C-myc and CerbB-2 were highly expressed in papillary thyroid carcinoma and correlated with cervical lymph nody metastasis.The detection of p53,C-myc and CerbB-2 might be helpful for diagnosis of papillary thyroid carcinomas.

[Key words]thyroid neoplasms;adenocarcinoma,papillary;p53;C-myc;CerbB-2;clinic pathological parameters;diagnosis,differential

作者簡介：王璐(1985-)，住院醫(yī)師，在讀碩士，主要從事病理學(xué)診斷及影像學(xué)診斷?！魍ㄓ嵶髡撸珽-mail：ypq1964@163.com。

doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.01.026

[中圖分類號]R736.1

[文獻標識碼]A

[文章編號]1671-8348(2016)01-0077-04

(收稿日期：2015-08-08修回日期：2015-09-10)