斜脈暗羅葉甾體類(lèi)成分研究*

劉冰晶，熊　躍，曾　靖

(1.贛南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院；2.江西省腦血管藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西　贛州　341000；3.南昌市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥劑科，江西　南昌　330003)

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斜脈暗羅葉甾體類(lèi)成分研究*

劉冰晶1,2，熊躍3，曾靖1,2

(1.贛南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院；2.江西省腦血管藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西贛州341000；3.南昌市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥劑科，江西南昌330003)

摘要：目的：研究斜脈暗羅葉的化學(xué)成分。方法：95%乙醇提取斜脈暗羅葉，制備總浸膏，硅膠柱色譜分離其成分，理化性質(zhì)和波譜法鑒定其結(jié)構(gòu)。結(jié)果：分離得到3種甾體化合物，分別為β-谷甾醇(1)、β-胡蘿卜甙(2)、豆甾-4-烯-3-酮(3)。結(jié)論：所有化合物均首次從斜脈暗羅葉中分離得到。

關(guān)鍵詞：斜脈暗羅；化學(xué)成分；甾體

斜脈暗羅(P.plagioneura)是我國(guó)特有藥用植物，分布于廣東、廣西、海南[1]。暗羅屬植物全球約有200多種，我國(guó)有17種[2]。斜脈暗羅在民間廣泛用作治療。本課題組在篩選海南一系列藥用植物抗腫瘤活性中發(fā)現(xiàn)，斜脈暗羅的乙醇提取物在200 μg·mL-1時(shí)對(duì)人類(lèi)肺腺癌細(xì)胞(SPCA-1)有較好的抑制作用。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)暗羅屬植物進(jìn)行過(guò)化學(xué)成分研究，得到倍半萜類(lèi)[3]、二萜類(lèi)[4-5]、生物堿類(lèi)[6-10]等化合物。本文為了進(jìn)一步研究斜脈暗羅葉部活性成分，我們對(duì)斜脈暗羅葉化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究。通過(guò)部位分離、反復(fù)柱色譜(硅膠、C18反相硅膠、Sephadex LH-20)等手段,從斜脈暗羅葉二氯甲烷部位分離得到3種單體化合物，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)，鑒定這些化合物為：β-谷甾醇(1)、β-胡蘿卜甙(2)、豆甾-4-烯-3-酮(3)，所有化合物均首次從該植物葉中分離得到。

1儀器與試劑

核磁共振儀(Brucker AV400 MHz)，高效液相色譜儀(安捷倫)，XT5-100型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(溫度未校正)，4001型電子天平，紫外線(xiàn)分析暗箱(YOZO-KX)，柱色譜硅膠(200～300目，青島海洋化工廠)，硅膠H 硅膠、GF254(青島海洋化工廠)，C18反相硅膠(日本YMC公司)，葡聚糖LH-20凝膠(Amersham Blosclences公司)，其余試劑均為分析純及色譜純。

2藥材

斜脈暗羅于2008年7月采自海南省昌江縣霸王嶺自然保護(hù)區(qū)，原植物由海南師范大學(xué)生物系鐘瓊芯教授鑒定為PolyalthiaplagioneuraDiels，標(biāo)本現(xiàn)藏于海南師范大學(xué)熱帶藥用植物化學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

3提取分離

斜脈暗羅葉4.2 kg(干重)用15 L質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%的酒精回流三次，合并提取液減壓回收溶劑得乙醇浸膏約2 L，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取至回收溶劑后蒸餾瓶壁幾乎無(wú)物質(zhì)為止，分別得石油醚部位63 g、二氯甲烷部位135 g，乙酸乙酯部位72 g、正丁醇部位44 g。

取二氯甲烷部位與150 g硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析,以石油醚-乙酸乙酯(100%，90%，80%～80%，90%，100%)梯度脫洗，每500 mL為一餾分，根據(jù)薄層層析色譜追蹤，合并相同組分，得A-O十五個(gè)餾分。A流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯(15∶1)洗脫，得化合物1(30 mg)；B流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，石油醚-氯仿(4∶1)洗脫，得化合物 2(20 mg)和3(15 mg)。

4結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針狀晶體，難溶于乙醇，不溶于甲醇、水，易溶于氯仿、乙酸乙酯，用薄層色譜分析，在紫外燈254 nm和365 nm均不顯熒光，I2熏顯色呈黃棕色，5%硫酸乙醇溶液顯色為紫紅色，該化合物性質(zhì)與已知化合物β-谷甾醇二者的物化性質(zhì)相近，故可初步判斷該化合物為β-谷甾醇，取該化合物與β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行薄層色譜展開(kāi)對(duì)照，二者的比移值相同。取該化合物與β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品混合后測(cè)熔點(diǎn)，混合熔點(diǎn)不下降，故確定為β-谷甾醇(β-Sitosterol)。

化合物2：白色粉末，m.p. 268～270 ℃。難溶于氯仿、甲醇等溶劑，易溶于吡啶。Molish反應(yīng)為陽(yáng)性，與蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品薄層層析Rf值一致，二者混合熔點(diǎn)不下降，故確定為β-胡蘿卜苷(β-Daucosterol)。

化合物3：白色長(zhǎng)針狀結(jié)晶(丙酮)；溶于石油醚、氯仿、丙酮，不溶于甲醇；254 nm紫外燈下有紫紅色熒光。與濃硫酸顯紫色。推測(cè)為甾體或三萜類(lèi)的化合物；從整個(gè)1H-NMR譜的峰形以及δ：5.74(1H,s)的烯氫質(zhì)子信號(hào)峰，說(shuō)明該物質(zhì)為甾體類(lèi)化合物，且僅含有一組雙鍵；13C-NMR譜的δ：199.5的羰基碳信號(hào)、171.5和123.6的雙鍵碳信號(hào)進(jìn)一步證明此甾體含有α, β不飽和酮結(jié)構(gòu)；13C-NMR譜顯示共有29個(gè)碳，表明該化合物為含29個(gè)碳原子的酮羰基甾烯類(lèi)化合物；1H-NMR譜的高場(chǎng)處還給出了6個(gè)CH3，分別為：δ：1.20(3H,s),0.93(3H,d,J=6.5 Hz),0.86(3H,t,J=7.5 Hz),0.84(3H,d,J=8.0 Hz),0.82(3H,d,J=7.0 Hz)，0.73(3H,s)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11-12]報(bào)道數(shù)據(jù)一致，故確定該化合物為豆甾-4-烯-3-酮。

5結(jié)論

本文首次對(duì)斜脈(PolyalthiaplagioneuraDiels)葉化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，從斜脈暗羅葉的乙醇提取物的二氯甲烷部位分離得到3種甾體化合物，這3種甾體化合物均是首次從斜脈暗羅葉中分離出來(lái)。

致謝：本實(shí)驗(yàn)核磁共振均由上海鑫飾化工科技有限公司劉鑫劍代為測(cè)試，在此列出，以表謝意。

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Steroidal Composition Research on Leaves ofPolyalthiaPlagioneura

LIUBing-Jing1,2,XIONGYue3,ZENGJing1,2

(1.SchoolofPharmacy,GannanMedicalUniversity;2.JiangxiProvincicalKeyLabofCerebrovascularpharmacology,Ganzhou,Jiangxi341000；3.Dept.ofPharmacy,NanchangIntegratedHospitalofChineseandWesternMedicine,Nanchang,Jiangxi330003)

Abstract:Objective：To isolate and identify the components from the leaves of P. plagioneura.Methods：The compounds were isolated and purified by silica gel column, Sephadex LH-20,and C18chromatography. Their chemical structures were elucidated on the basis of physicochemical properties and spectral data.Results:Three steroidal compounds were isolated and identified as: β-sitosterol (1), β-daucosterol (2), Stigmast-4-en-3-one(3). Conclusion:All compounds are isolated from the leaves of P. plagioneura for the first time.

Key words:P. plagioneura;chemical constituents; steroidal

*基金項(xiàng)目：江西省科技廳項(xiàng)目(20142BBG70113);江西省衛(wèi)生廳項(xiàng)目(GJJ13678)

通訊作者：曾靖，男，教授，主要從事中藥藥理學(xué)研究。E-mail:zengjing61@hotmail.com

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-5779(2016)02-0187-03

DOI:10.3969/j.issn.1001-5779.2016.02.006

(收稿日期：2015-11-30)(責(zé)任編輯：敖慧斌)