蘋果皮總黃酮的提取及含量測定

李玉紅，趙　維，郭乃妮，柴紅葉，喬丹丹

(咸陽師范學(xué)院化學(xué)與化工學(xué)院,陜西 咸陽 712000)

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蘋果皮總黃酮的提取及含量測定

李玉紅，趙維，郭乃妮，柴紅葉，喬丹丹

(咸陽師范學(xué)院化學(xué)與化工學(xué)院,陜西 咸陽 712000)

摘要：采用索氏提取法提取蘋果皮總黃酮，研究了蘋果皮總黃酮的最佳提取工藝及含量測定方法。正交實(shí)驗(yàn)確定了蘋果皮總黃酮在300 W超聲波輔助下的最佳提取工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù) 60%、料液比1∶20 (g∶mL)、提取時(shí)間 50 min、提取溫度50 ℃。以AlCl3為顯色劑、蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，采用紫外可見分光光度法在423 nm波長處測定所生成絡(luò)合物的吸光度，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合線性回歸方程為：A=27.78c+0.0004，相關(guān)系數(shù)R2=0.9980。按此方法分析蘋果皮樣品，測得蘋果皮總黃酮含量為26.94 mg·g-1(n=6，RSD=0.92%)。該方法簡單易操作，可為水果蔬菜中總黃酮含量的測定提供理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：蘋果皮；總黃酮；紫外可見分光光度法

蘋果(Malus pumila)，屬薔薇科，其營養(yǎng)成分可溶性大，易被人體吸收，故有“活水”之稱，是世界四大水果之冠。蘋果富含鋅、維生素和黃酮類化合物，具有降低膽固醇、保持血糖穩(wěn)定、抗氧化及增強(qiáng)免疫等功能[1-2]。研究表明，蘋果皮較果肉含有更多的黃酮類物質(zhì)[3-4]。對(duì)蘋果皮中黃酮類物質(zhì)的提取和功能研究已成為國內(nèi)外的熱點(diǎn)[5-7]。作者運(yùn)用索氏提取法提取蘋果皮總黃酮、紫外可見分光光度法測定總黃酮含量，旨在為蘋果皮的充分利用提供基礎(chǔ)科學(xué)依據(jù)。

1實(shí)驗(yàn)

1.1材料、試劑與儀器

蘋果(咸陽市場購買)洗凈，削皮，取皮在55 ℃真空干燥箱中干燥48h，然后用粉碎機(jī)處理成粉末。

三氯化鋁，天津耀華化學(xué)試劑有限責(zé)任公司；亞硝酸鈉、硝酸鋁，天津風(fēng)船化學(xué)試劑有限公司；氫氧化鈉，天津河?xùn)|區(qū)紅巖試劑廠；無水乙醇，天津天力化學(xué)試劑有限公司；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品。

DZF-6020型真空干燥箱，上?，槴\實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；HB-YP202型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；KQ-300DB型數(shù)控超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司；HHS-1S型電子恒溫不銹鋼水浴鍋，上海光地儀器設(shè)備有限公司；SPECORD50型紫外可見分光光度計(jì)，德國JENA公司；ZF-2型三用紫外儀，上海安亭電子儀器廠。

1.2總黃酮的提取

準(zhǔn)確稱取5.0g干燥的蘋果皮粉末，用濾紙包好后置于索氏提取器中，加入體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇，置于溫度50 ℃、功率300W超聲波水浴加熱回流50min，即得到蘋果皮提取液；經(jīng)蒸餾除去提取劑，加95%乙醇配制成總黃酮提取液，定容至100mL，待用。

在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化提取工藝，正交實(shí)驗(yàn)的因素與水平見表1。

表1蘋果皮總黃酮提取工藝正交實(shí)驗(yàn)的因素與水平

Tab.1　Factors and levels of orthogonal

1.3定性測試[8]

用玻璃棒蘸取少量提取液點(diǎn)在濾紙上，可見光下觀察為淺黃色，紫外光下呈灰黃色；滴加0.01 kg·L-1AlCl3乙醇溶液，吹干，可見光下觀察為淺黃色，紫外光下呈灰黃色。取提取液1 mL于試管中，加入鎂粉，再一次性加入數(shù)滴濃鹽酸，觀察發(fā)現(xiàn)在泡沫處呈紫紅色。以上現(xiàn)象表明，提取液中確實(shí)含有黃酮類物質(zhì)。

1.4總黃酮含量的測定

1.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱取經(jīng)過120 ℃干燥的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品14.2 mg，用少量95%乙醇溶解后轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，定容，搖勻，即得到0.142 mg·mL-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，待用。

準(zhǔn)確移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL、6.00 mL、8.00 mL分別置于25 mL比色管中，加入1% AlCl3溶液1 mL，用95%乙醇定容，搖勻，放置15 min，以空白溶液作參比，測定423 nm處吸光度。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)，擬合線性方程為：A=27.78c+0.0004，相關(guān)系數(shù)R2=0.9980。

圖1　蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.4.2樣品溶液總黃酮含量的測定

按1.4.1方法測定樣品溶液的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮含量。

2結(jié)果與討論

2.1最佳提取工藝條件

正交實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與分析見表2。

表2蘋果皮總黃酮提取工藝正交實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與分析

Tab.2Results and analysis of orthogonal experiment for

optimizing extraction process of total flavonoids from apple peels

由表2可知，各因素對(duì)總黃酮提取的影響大小順序?yàn)椋阂掖俭w積分?jǐn)?shù)>料液比>提取溫度>提取時(shí)間。確定最佳提取工藝為：A2B2C1D1，即乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、料液比1∶20(g∶mL)、提取時(shí)間50 min、提取溫度50 ℃。

2.2蘋果皮總黃酮含量的測定結(jié)果(表3)

表3蘋果皮總黃酮含量的測定結(jié)果

Tab.3　The determination results of

由表3可知，蘋果皮總黃酮平均含量為26.94 mg·g-1，RSD為0.92%(n=6)。

2.3回收率實(shí)驗(yàn)

精密量取已知含量樣液0.1 mL，加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL，按1.4.1方法測定吸光度，計(jì)算蘋果皮總黃酮含量及回收率，結(jié)果見表4。

表4回收率實(shí)驗(yàn)

Tab.4　The recovery of the method

2.4精密度實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確移取2.00 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液置于25 mL比色管中，按1.4.1方法測定吸光度，結(jié)果見表5。

表5精密度實(shí)驗(yàn)

Tab.5　The precision of the method

由表5可知，方法的RSD=1.09%，精密度良好。

2.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確移取提取液置于10 mL比色管中，按1.4.1方法測定吸光度，每隔5 min測一次，共測定6次，結(jié)果見表6。

表6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

Tab.6　The stability of the method

由表6可知，方法的RSD=1.93%，提取液在30 min內(nèi)可穩(wěn)定存在。

3結(jié)論

采用索氏提取法提取蘋果皮總黃酮，以AlCl3為顯色劑，運(yùn)用紫外可見分光光度法測定蘋果皮總黃酮含量。正交實(shí)驗(yàn)確定了蘋果皮總黃酮在300 W超聲波輔助下的最佳提取工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù) 60%、料液比1∶20 (g∶mL)、提取時(shí)間 50 min，提取溫度50 ℃。紫外可見分光光度法可用于蘋果皮總黃酮的測定，測得蘋果皮樣品的總黃酮含量為26.94 mg·g-1(n=6，RSD=0.92%)。該蘋果皮總黃酮提取工藝簡單可行，含量測定穩(wěn)定性和線性關(guān)系較好。

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Extraction and Content Determination of Total Flavonoids from Apple Peels

LI Yu-hong，ZHAO Wei，GUO Nai-ni，CHAI Hong-ye，QIAO Dan-dan

(SchoolofChemisitryandChemicalEngineering,XianyangNormalUniversity,Xianyang712000，China)

Abstract：Total flavonoids from apple peels were extracted with a Soxhlet extraction method.The extraction conditions were optimized by orthogonal experiment,and determination method of content of total flavonoids was studied.The optimal extraction conditions were as follows:60% ethanol,solid-liquid ratio 1∶20 (g∶mL),treating with ultrasonic power of 300 W for 50 min,and extraction temperature of 50 ℃.Using AlCl3 as a chormogenic reagent,rutin as standard,absorbance of the complex was measured at 423 nm by UV-Vis spectrophotometry.Calibration curve of rutin was drawed,and linear regression equation of A=27.78c+0.0004(R2=0.9980) was obtained.Applying the proposed method,the content of total flavonoids from apple peels was 26.94 mg·g-1(n=6,RSD=0.92%).The method is easy to operate,which provides a theoretical basis for the determination of total flavonoids from fruits and vegetables.

Keywords：apple peels;total flavonoids;UV-Vis spectrophotometry

基金項(xiàng)目：陜西省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2013JM2016)，陜西省教育廳專項(xiàng)科研項(xiàng)目(2013JKK0642)，國家大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201410722004)，咸陽師范學(xué)院科研基金項(xiàng)目(15XSYK042)

收稿日期：2016-01-19

作者簡介：李玉紅(1980-)，女，陜西咸陽人，高級(jí)工程師，主要從事分析方面研究，E-mail：309943006@qq.com。

doi：10.3969/j.issn.1672-5425.2016.05.018

中圖分類號(hào)：O 657.32

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-5425(2016)05-0068-03