鳳尾雞冠花葉片快繁體系的建立

王霞 劉曉丹 王歡

摘要：為建立鳳尾雞冠花葉片快繁體系，以鳳尾雞冠花葉片為外植體，研究6-BA、NAA對愈傷組織和不定芽誘導(dǎo)以及NAA對不定根分化的影響。結(jié)果表明：鳳尾雞冠花葉片愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.00毫克/升+NAA 0.50毫克/升，不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA1.50 毫克/升+NAA0.20 毫克/升，不定根分化的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.10毫克/升。

關(guān)鍵詞：鳳尾雞冠花；葉片；6-BA；NAA；快繁

基金項(xiàng)目：吉林省教育廳“十二五”科學(xué)技術(shù)研究（吉農(nóng)院合字[2013]第471號）

中圖分類號： S685 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A DOI編號： 10.14025/j.cnki.jlny.2016.19.032

鳳尾雞冠花又名雞頭、手花、蘆花雞冠等，為莧科青葙屬一年生草本植物。作為常見的食藥兩用花卉，其富含蛋白質(zhì)、膳食纖維、維生素、食用色素、黃酮類化合物等多種營養(yǎng)物質(zhì)，具有止血、止痢、清熱解毒和提高機(jī)體免疫力等功能[1-3]。鳳尾雞冠花花穗頂生，花色艷麗，分紅色、黃色和白色不等，花期較長，是最常見的園林觀賞花卉之一[4]。鳳尾雞冠花為異花授粉植物，因此很容易出現(xiàn)品種間的混雜，導(dǎo)致品種退化，加上傳統(tǒng)的種子栽培方式繁殖系數(shù)低，周期長，進(jìn)而影響了其觀賞價值，增加了繁育成本[1]。建立鳳尾雞冠花的組培快繁體系不僅可以避免品種退化，而且可以不受季節(jié)、環(huán)境的影響在短時間內(nèi)培育出大量的雞冠花新個體，因此具有重要意義。目前關(guān)于鳳尾雞冠花組織培養(yǎng)研究的報(bào)道只有倪德祥對其莖段進(jìn)行培養(yǎng)和快繁1例[5]，實(shí)驗(yàn)首次以鳳尾雞冠花葉片為外植體，研究植物激素（6-BA和NAA）對其愈傷組織誘導(dǎo)以及不定芽、不定根分化的影響，確定葉片快繁體系的最佳激素組合，為鳳尾雞冠花的快速繁育提供新的途徑。

1 材料與方法

1.1 材料及處理

鳳尾雞冠花種子，購自長春農(nóng)博會。

將種子用70%乙醇消毒30秒，0.1%升汞消毒9分鐘，無菌水沖洗干凈后，接種于MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20天左右即可獲得3葉期組培苗。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)方法 將鳳尾雞冠花組培苗葉片切成0.5×0.5厘米大小，按照葉面朝上的方向?qū)⑵浣臃N到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中見表1，30天后統(tǒng)計(jì)愈傷組織的誘導(dǎo)率；將生長良好的愈傷組織切成小塊接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中見表2，30天后統(tǒng)計(jì)出芽率；將生長健壯的組培苗接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)見表3，21天后統(tǒng)計(jì)生根情況。

所有培養(yǎng)階段每個處理接種30瓶，每瓶接種2個外植體。相關(guān)計(jì)算公式：

愈傷組織誘導(dǎo)率=長出愈傷組織的葉片數(shù)/接種葉片數(shù)×100%；

出芽率=長出不定芽的愈傷組織數(shù)/接種愈傷組織數(shù)×100%。

1.2.2 培養(yǎng)條件 愈傷組織和不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基采用含有不同6-BA和NAA濃度配比的MS培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)基采用含不同濃度NAA的1/2MS培養(yǎng)基，所用培養(yǎng)基中蔗糖濃度40克/升，瓊脂7克/升，pH值5.8；培養(yǎng)溫度為25℃，光照強(qiáng)度2500 lx、光照時間12小時/天，相對濕度80%。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同6-BA和NAA濃度配比對葉片愈傷組織誘導(dǎo)的影響

鳳尾雞冠花葉片在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)5～7天左右，在多數(shù)葉緣出現(xiàn)肉眼可見的愈傷組織，隨培養(yǎng)時間延長，愈傷組織塊逐漸增大，30天左右覆蓋所有外植體。由表1可知，9個處理均可誘導(dǎo)出愈傷組織，但愈傷組織誘導(dǎo)率差異顯著，其中處理5愈傷組織誘導(dǎo)率最高（93.33%），該處理愈傷組織生長旺盛，呈米白色，無褐變現(xiàn)象；而處理7、8、9則出現(xiàn)了不同程度地褐變現(xiàn)象，說明高濃度6-BA容易導(dǎo)致雞冠花葉片愈傷組織褐變，綜上，鳳尾雞冠花葉片愈傷組織誘導(dǎo)的適宜6-BA和NAA濃度依次為1.00 毫克/升和0.50毫克/升。

2.2 不同6-BA和NAA濃度配比對葉片不定芽誘導(dǎo)的影響

將生長旺盛的愈傷組織切成小塊接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中見表2，培養(yǎng)17～20天左右，可在多數(shù)愈傷組織表面看到芽點(diǎn)，30天左右芽點(diǎn)可分化出芽。由表2可知，不同6-BA和NAA濃度配比可顯著影響不定芽的分化，隨6-BA濃度增加出芽率也逐漸增加，其中處理8出芽率最高（86.67%），該處理不定芽長勢最好，質(zhì)量最高，處理1、2、3、4盡管也能誘導(dǎo)出不定芽，但在愈傷組織邊緣以及靠近培養(yǎng)基面存在褐變現(xiàn)象，綜上可知，鳳尾雞冠花不定芽誘導(dǎo)的適宜6-BA和NAA濃度依次為1.5 毫克/升和0.2 毫克/升。

2.3 不同濃度NAA對葉片不定根誘導(dǎo)的影響

將長約3～4厘米的試管苗切下來接種到含有不同濃度NAA的1/2MS培養(yǎng)基中，21天后試管苗生根狀況如表3所示，可知在不添加NAA的培養(yǎng)基中不能誘導(dǎo)不定根的分化，同時隨NAA濃度的增加，生根率呈先增后降趨勢，說明NAA具有促進(jìn)鳳尾雞冠花試管苗生根的作用，NAA的濃度能夠顯著影響生根率，處理3生根率最高（100%），此時單株生根數(shù)最多，長勢最旺，因此，鳳尾雞冠花不定根誘導(dǎo)的適宜NAA濃度為0.10毫克/升。

3 討論與結(jié)論

植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的組成、比例是影響植物形態(tài)建成的關(guān)鍵因素[6]，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同6-BA和NAA濃度配比對鳳尾雞冠花葉片愈傷組織和不定芽的誘導(dǎo)均具有顯著影響，愈傷組織誘導(dǎo)的適宜組合為6-BA 1.00 毫克/升+NAA 0.50毫克/升，不定芽誘導(dǎo)的適宜組合為6-BA 1.50毫克/升+NAA 0.20 毫克/升，可以看出，在一定范圍內(nèi)，較高濃度的NAA利于愈傷組織的誘導(dǎo)，較高濃度的6-BA利于不定芽的分化。由于不定根誘導(dǎo)對無機(jī)元素需求量少，同時細(xì)胞分裂素在一定程度上會抑制根的分化，因此實(shí)驗(yàn)以1/2MS為基本培養(yǎng)基，研究NAA濃度對不定根分化的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)最佳NAA濃度為0.10毫克/升，低于湖北麥冬和維納斯捕蠅草不定根誘導(dǎo)的最佳NAA濃度[7-8]。

參考文獻(xiàn)

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[3]鄧日烈，王惠珍，吳文花，等.植物生長調(diào)節(jié)劑對雞冠花愈傷組織生長季花色素苷積累的影響[J].生物技術(shù)通報(bào)，2008，（03）：170-173.

[4]王軍玲.雞冠花離體快繁及八倍體新種質(zhì)的選育[D].西南大學(xué)，重慶，2008.

[5]倪德祥，易瑩，張丕方.鳳尾雞冠花莖段培養(yǎng)和快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，1987，（01）：29-30.

[6]孫愛花，華玉偉，黃天帶，等.不同激素配比對橡膠樹葉片愈傷組織誘導(dǎo)的影響[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012，28（04）：24-27.

[7]何家濤，劉傳會.湖北麥冬葉片快繁體系的建立[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（02）：769-771.

[8]林青萍， 陳雄庭.菊花離體葉片快繁體系的建立[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，26（03）： 25-28.

作者簡介：王霞，碩士，吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，講師，研究方向：植物分子生物學(xué)及天然產(chǎn)物分離。