DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合化療治療非小細(xì)胞肺癌的近期療效觀察

吳梅 魏思亮 王效靜

DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合化療治療非小細(xì)胞肺癌的近期療效觀察

吳梅 魏思亮 王效靜

目的 探討DC-CIK細(xì)胞治療聯(lián)合化療在治療非小細(xì)胞肺癌中的臨床意義。方法 隨機(jī)選取70例非小細(xì)胞肺癌患者，分為實(shí)驗(yàn)組（35例，行DC-CIK細(xì)胞治療聯(lián)合TP方案化療）和對(duì)照組（35例，單純行TP方案化療）。觀察2組患者治療前后的影像學(xué)判定有效率(response rate，RR)及臨床獲益率(clinical benefit rate，CBR)、卡式評(píng)分及主要并發(fā)癥改善情況、外周血T細(xì)胞亞群結(jié)果。DC、CIK細(xì)胞由自體外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血T細(xì)胞亞群。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組影像學(xué)判定有效率與臨床獲益率高于對(duì)照組（P﹤0.01）。實(shí)驗(yàn)組生活質(zhì)量及主要并發(fā)癥改善情況高于對(duì)照組（P﹤0.01）。實(shí)驗(yàn)組T細(xì)胞亞群：CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+、CD3-CD16+CD56+、CD3+CD16+CD56+高于對(duì)照組（P﹤0.01）；CD4+CD25+低于對(duì)照組（P﹤0.01）。較治療之前，治療組治療15天后CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+、CD3+CD16+CD56+升高，到60天時(shí)，維持在較高水平;CD4+CD25+在治療15天時(shí)降低，到60天時(shí)維持在較低水平。結(jié)論 DC-CIK細(xì)胞治療聯(lián)合化療對(duì)于改善非小細(xì)胞肺癌患者免疫功能狀況、提高生活質(zhì)量，增加臨床療效方面具有積極意義。

肺癌；生物治療；樹突狀細(xì)胞；細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞

目前，肺癌的發(fā)病率和死亡率在世界各國(guó)均呈明顯的上升趨勢(shì)，是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一。手術(shù)治療、放療、化療及分子靶向治療等已使腫瘤緩解率有所提高，但肺癌患者的總體生存率并無(wú)明顯改善，五年生存率仍不足15%[1]。有研究發(fā)現(xiàn)肺癌的發(fā)生與患者機(jī)體免疫功能下降有密切關(guān)系[2]。因此細(xì)胞免疫生物治療已成為當(dāng)今肺癌綜合治療的重要組成部分。本研究通過(guò)DC-CIK（dendritic cells-cytokine induced killer cells）細(xì)胞免疫生物治療聯(lián)合化療治療中晚期非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer）患者，觀察治療前后患者免疫功能指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化，原發(fā)病灶和轉(zhuǎn)移灶的改變，患者生存質(zhì)量的改善等。 探討細(xì)胞免疫生物治療聯(lián)合化療在治療非小細(xì)胞肺癌中，改善患者生活質(zhì)量、增強(qiáng)免疫功能、延長(zhǎng)生存期和提高腫瘤綜合治療療效中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 按在本科入院順序選取經(jīng)病理證實(shí)、卡氏評(píng)分＞60分、預(yù)計(jì)生存期大于3個(gè)月的中晚期NSLC患者70例，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組對(duì)和照組，每組35例。實(shí)驗(yàn)組為生物治療加TP方案化療，對(duì)照組單純行TP方案化療。2組患者資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 入組患者基本臨床資料（n）

1.2 主要儀器及試劑 COBE-Spectra血細(xì)胞分離機(jī)，美國(guó)Terumo公司產(chǎn)品；Guava easycyte流式細(xì)胞儀，美國(guó)默克密理博公司產(chǎn)品；流式檢測(cè)試劑盒，CD3、CD4、CD8、CD56、CD25單抗，美國(guó)BD公司。

1.3 DC－CIK制備 由本院生物中心制備并提供，方法同參考文獻(xiàn)[3]。

1.4 治療方法 2組患者入院后完成常規(guī)檢查的同時(shí)，先作T細(xì)胞亞群檢測(cè)，以備對(duì)照。實(shí)驗(yàn)組于檢查完成后先行靜脈采血，開始DC-CIK細(xì)胞培養(yǎng)，次日行化療；第11天皮下注射DC細(xì)胞1×107，第12～16天每天靜脈輸注CIK細(xì)胞4×109，21天為1個(gè)周期，4周期后開始療效評(píng)估。對(duì)照組常規(guī)靜脈化療4個(gè)周期后開始進(jìn)行療效評(píng)估。伴胸水的患者實(shí)驗(yàn)組在抽胸水后以

CIK細(xì)胞4×109胸腔內(nèi)灌注，對(duì)照組于抽胸水后以80 mg順鉑加50 mL生理鹽水胸腔內(nèi)灌注。

1.5 影像學(xué)判定客觀緩解率 參照WHO對(duì)實(shí)體瘤近期療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、無(wú)變化（SD）和進(jìn)展（PD），以CR+PR統(tǒng)計(jì)客觀緩解率（OR）。

1.6 生活質(zhì)量及主要并發(fā)癥的評(píng)估：生活質(zhì)量按國(guó)際通用的Karnofsky評(píng)分評(píng)價(jià)，主要并發(fā)癥按治療前后臨床表現(xiàn)資料判定。

1.7 免疫功能評(píng)估 患者分別于治療結(jié)束后第15 d、30 d和60 d抽血行T細(xì)胞亞群檢測(cè)，觀察CD3+(總T細(xì)胞)、CD3+CD8+（細(xì)胞毒T細(xì)胞）、CD3+CD4+（輔助性T細(xì)胞）、CD4+/CD8+（Th/Ts比值）、CD4+CD25+（調(diào)節(jié)T細(xì)胞）、CD3-CD16+CD56+(自然殺傷細(xì)胞NK)、CD3+CD16+CD56+(NK-T細(xì)胞)值，并與治療前指標(biāo)進(jìn)行對(duì)照。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組患者影像學(xué)判定近期客觀緩解率 經(jīng)影像學(xué)檢查,實(shí)驗(yàn)組35例患者中,完全緩解9例,部分緩解17例,穩(wěn)定6例,惡化3例。有效率(response rate，RR)為74.2%,臨床獲益率(clinical benefit rate，CBR)為91.4%;而對(duì)照組35例患者中完全緩解6例,部分緩解12例,穩(wěn)定9例,惡化8例,有效率為

51.4 %,臨床獲益率為77.1%。實(shí)驗(yàn)組有效率和臨床獲益率顯著高于對(duì)照組（P﹤0.01）。見表2。

表2 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組近期客觀緩解率（n）

2.2 患者生活質(zhì)量及主要并發(fā)癥改善情況 實(shí)驗(yàn)組35例患者治療后Karnofsky評(píng)分增加10分以上的27例（77.1%），對(duì)照組為24例（68.5%），實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NSLC伴腦轉(zhuǎn)移患者實(shí)驗(yàn)組7例，對(duì)照組8例經(jīng)上述治療加頭部放療后病變都得到控制，顱內(nèi)高壓表現(xiàn)消退，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NSLC伴胸水實(shí)驗(yàn)組13例，經(jīng)治療后胸水全部消退，有效率

100%;對(duì)照組12例，經(jīng)治療后8例胸水消退，有效率為66.6%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01)。NSLC伴肝轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)組6例經(jīng)治療后2例轉(zhuǎn)移灶完全消失，3例轉(zhuǎn)移灶縮小，大的轉(zhuǎn)移灶縮小超過(guò)50%，1例轉(zhuǎn)移灶進(jìn)展，有效率為83.3%；對(duì)照組4例肝轉(zhuǎn)移治療后1例轉(zhuǎn)移灶消失，2例穩(wěn)定，1例進(jìn)展，有效率為25%，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01)。

2.3 免疫學(xué)評(píng)價(jià) 實(shí)驗(yàn)組治療后外周血T細(xì)胞亞群改變情況見圖1。35例患者CD3+：治療后15、30、60天分別是（43.7±2.14）、（52.1±6.95）、（53.6±6.06），與治療前（38.5±2.8）比較有所升高并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01)。CD3+CD8+：治療后15、30、60天分別是（25.5±3.09）、（31.1±4.56）、（33.3±5.75），與治療前（14.8±2.7）比較有所升高并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01)。CD3+CD4+：治療后15、30、60天分別是：（18.2±3.86）、20.8±6.82）、（20.3±4.7）與治療前（19.4±2.7）比較有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CD4+CD25+：治療后15、30、60天分別是：（8.4±1.3）、（7.2±1.4）、（6.7±1.5）與治療前（6.7±1.5）比較有所升高并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01)。CD3-CD16+CD56+：治療后15、30、60天分別是：（15.9±2.07）、（16.8±2.6）、（18.9±2.07）與治療前（12.2±2.3）比較有所升高并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01)。CD3+CD16+CD56+：治療后15、30、60天分別是：（2.8±1.46）、（4.0±1.7）、（4.2±1.69）與治療前（2.0±1.06）比較有所升高并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01)。對(duì)照組治療后外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果與治療前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組各亞群檢測(cè)結(jié)果對(duì)照見表3。

圖1 實(shí)驗(yàn)組治療前后T細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果

3 討論

非小細(xì)胞肺癌是常見的肺部惡性腫瘤，全身化療帶來(lái)的毒副作用是治療不易延續(xù)的重要原因之一。尋求新的綜合抗腫瘤途徑，以延長(zhǎng)進(jìn)展期肺癌患者的生成期、改善生存質(zhì)量，具有非常積極的意義。近年隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，免疫治療已成為腫瘤治療的新方法。腫瘤生物免疫治療具有符合生理、低毒和有效的特點(diǎn)，有著巨大的臨床研究和應(yīng)用價(jià)值，是未來(lái)腫瘤治療的發(fā)展方向。樹突狀細(xì)胞（dentritic cell,DC）和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（cytokine induced killers,CIK）是腫瘤細(xì)胞免疫治療的兩種重要細(xì)胞，前者識(shí)別抗原，激活獲得性免疫應(yīng)答，后者通過(guò)細(xì)胞毒作用和分泌細(xì)胞因子殺傷腫瘤細(xì)胞，兩者聯(lián)合可高效殺傷腫瘤細(xì)胞[4]。

DC是體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞（antigen precenting cells,APC）。成熟的DC是唯一能激活幼稚T淋巴細(xì)胞的專職抗原提呈細(xì)胞，在誘導(dǎo)高效而特異的抗腫瘤免疫中起關(guān)鍵作用[5]。DC是啟動(dòng)、調(diào)控并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)，有研究表明，包括肺癌在內(nèi)的惡性腫瘤患者體內(nèi)往往存在DC功能缺陷，無(wú)法有效地提呈腫瘤抗原給T細(xì)胞，造成了免疫忽視或免疫逃逸[6]，是腫瘤發(fā)生發(fā)展和惡化的重要免疫學(xué)基礎(chǔ)。CIK是一類非主要組織相容性復(fù)合物（MHC）和非T細(xì)胞受體（T cell receptor,YCR）限制性的免疫活性細(xì)胞[7]。CIK細(xì)胞含有大量的分泌顆粒，當(dāng)與靶細(xì)胞結(jié)合后，CIK細(xì)胞脫顆粒，釋放其中的穿孔素和顆粒酶，前者在靶細(xì)胞膜上形成穿膜樣結(jié)構(gòu)，從而改變細(xì)胞的滲透壓和通透性；后者具有胰蛋白酶等絲氨酸蛋白酶的特性，同時(shí)表達(dá)酶活性破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，以上兩者的共同作用可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞壞死[8]。因此，目前DC、CIK細(xì)胞是腫瘤過(guò)繼免疫治療的首選方案，它可以在不損傷機(jī)體免疫系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的前提下，直接殺傷腫瘤細(xì)胞，調(diào)節(jié)和增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，產(chǎn)生持久的抗腫瘤作用，清除微小殘留灶，成為腫瘤手術(shù)、放化療后的重要輔助治療用段。而化療可以最大限度地減少腫瘤細(xì)胞，達(dá)到腫瘤負(fù)荷與T細(xì)胞應(yīng)答之間的平衡，使之有利于T細(xì)胞作用?；熆梢杂脕?lái)改變腫瘤微環(huán)境，以利于維持有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答。化療可以用來(lái)選擇全身性免疫調(diào)節(jié)通路，以使免疫最大化和/或效應(yīng)T細(xì)胞擴(kuò)增。

研究顯示:DC、CIK細(xì)胞免疫生物治療聯(lián)合化療組四療程后，影像學(xué)客觀評(píng)價(jià)其有效率和臨床獲益率顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。生活質(zhì)量及主要并發(fā)癥改善情況高于對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組35例患者CD3+、CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+、CD3+CD16+CD56+分別于治療后15天開始上升，1個(gè)月后維持在較高水平，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CD3+CD4+：治療后與治療前比較有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CD4+CD25+：治療后15天回調(diào)到正常水平，60天時(shí)仍保持穩(wěn)定狀態(tài)，顯著優(yōu)于對(duì)照組。結(jié)果表明：接受DC、CIK治療的實(shí)驗(yàn)組患者特異性和非特異性免疫功能均增強(qiáng)，臨床有效率提高，且無(wú)毒副作用。提示DC-CIK細(xì)胞治療聯(lián)合化療對(duì)于改善非小細(xì)胞肺癌患者免疫功能狀況、提高生活質(zhì)量，增加臨床療效方面有積極意義,具有很好的臨床應(yīng)用前景。

表3 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組T細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果（x±s）

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Objective Discussing the Clinical effects of dendritic cells (DC) and cytokine induced killer (CIK) cells combined with chemotherapy in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods Randomly selected 70 cases of non-small cell lung cancer patients, divided into experimental group (35 Cases, take dendritic cells and cytokine induced killer cells combined with TP chemotherapy regimens) and control group (35 Cases, take chemotherapy alone). Compare the effectiveness of the experimental group and control group about response rate (RR) and clinical benef i t rate (CBR), Karnofsky performance score(KPS), improvement of complications, T lymphocyte subtypes in peripheral blood. dendritic cells (DC) and cytokine induced killer (CIK) induced by peripheral blood mononuclear cells (PBMC). Application Flow Cytometry(FCM) to detect T lymphocyte subtypes from peripheral blood. Results The level of response rate (RR) and clinical benef i t rate (CBR), Karnofsky performance score (KPS), improvement of complications from experimental group better than control group (P<0.01). The level of CD3+, CD3+CD8+, CD3+CD4+, CD3-CD16+CD56+, CD3+CD16+CD56+from experimental group are higher than control group (P<0.01), CD4+CD25+is lower than control group (P<0.01). Compared with before treatment, in experimental treatment after 15 days, the level of CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3-CD16+CD56+, CD3+CD16+CD56+are increase, when to 60 days,the level maintain at a high line; the level of CD4+CD25+is decreases after 15 days, when to 60 days, the level maintain at a low line. Conclusion DC and CIK cells combined with chemotherapy is of an positive signif i cance in improving immune status and quality of life ,increasing the clinical curative effect.

Lung carcinoma; Biotherapy; Dendritic cells; Cytokine induced killer cells

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.36.005

安徽 233030 蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院呼吸科 （吳梅 魏思亮王效靜）