豬口蹄疫、豬瘟與高致病性豬藍(lán)耳病疫苗不同免疫方案對(duì)其免疫效果的影響

朱 剛王 林王恒昌王立蘭陳士九唐志中樸聰雁

（1.灌南縣畜牧獸醫(yī)站，江蘇連云港 222500；2.灌南縣海洋與漁業(yè)局，江蘇連云港 222500；3.灌南縣田樓動(dòng)物防疫檢疫所，江蘇連云港 222500；4.灌南縣李集動(dòng)物防疫檢疫所，江蘇連云港 222500）

豬口蹄疫、豬瘟與高致病性豬藍(lán)耳病疫苗不同免疫方案對(duì)其免疫效果的影響

朱 剛1王 林2王恒昌1王立蘭1陳士九3唐志中4樸聰雁1

（1.灌南縣畜牧獸醫(yī)站，江蘇連云港 222500；2.灌南縣海洋與漁業(yè)局，江蘇連云港 222500；3.灌南縣田樓動(dòng)物防疫檢疫所，江蘇連云港 222500；4.灌南縣李集動(dòng)物防疫檢疫所，江蘇連云港 222500）

為確定合理有效的免疫程序來減少生豬的疫苗接種次數(shù)和應(yīng)激反應(yīng)，我們?cè)O(shè)計(jì)了相關(guān)試驗(yàn)，以驗(yàn)證多重免疫同時(shí)進(jìn)行的可行性。本研究采用這3種疫苗的不同組合進(jìn)行免疫，觀察各組免疫后的副反應(yīng)以及測(cè)定不同時(shí)期抗體水平。根據(jù)各組的綜合分析，在免疫效果和免疫副反應(yīng)的情況看，可選用D組免疫程序作為實(shí)際工作中的首選免疫程序。

疫苗；不同組合；免疫效果

豬口蹄疫、豬瘟與豬高致病性藍(lán)耳是一類動(dòng)物疫病，給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來不可估計(jì)的損失，也只有通過疫苗注射是防控這三種重大動(dòng)物疫病的首選方法，每年的春防、秋防等，農(nóng)業(yè)部及省市農(nóng)委給出的重大動(dòng)物疫病的免疫實(shí)施方案是防控重大動(dòng)物疫病的重要免疫依據(jù)，但對(duì)各個(gè)重大動(dòng)物疫病的免疫方案是分別給出，而不是多種重大動(dòng)物疫病聯(lián)合分階段給出的免疫方案（程序），雖然分別免疫產(chǎn)生的抗體效價(jià)高，但不省工，增加動(dòng)物的保定次數(shù)，同時(shí)也加大了動(dòng)物的應(yīng)激，并且個(gè)別的重大動(dòng)物疫病的免疫方案在時(shí)間上有沖突。為此，我市基層防疫員除按省市農(nóng)委給予的免疫方案進(jìn)行免疫外，有的各自為政，免疫后產(chǎn)生的抗體或高或低，紛繁雜亂，為此我們灌南縣畜牧獸醫(yī)站展開了對(duì)高致病性豬高致病性藍(lán)耳病、豬瘟、豬O型口蹄疫疫苗聯(lián)合免疫的效果進(jìn)行評(píng)價(jià)的研究，通過多種免疫方案（程序）分別對(duì)豬群進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，一個(gè)豬群只能選擇一個(gè)免疫方案（程序），并嚴(yán)格按該免疫方案（程序）實(shí)施免疫，后通過抗體檢測(cè)，從而對(duì)所產(chǎn)生免疫抗體進(jìn)行分析，找出最佳的免疫方案（程序），利用這個(gè)免疫方案（程序）才能達(dá)到最佳的免疫效果，有效的免疫組合既可減少豬只的保定與應(yīng)激，又省功省時(shí)，這樣的科學(xué)免疫方案（程序）才是生豬防疫工作要遴選應(yīng)用的方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

我們灌南縣李集鄉(xiāng)大楊村王中才家養(yǎng)豬場(chǎng)，從中選出5窩剛出生的豬只，在日齡上相近、母豬免疫用同一程序與用量、母源抗體相近，并且用同一品種的仔豬。每窩頭數(shù)分別為14頭、12頭、10頭、9頭、11頭。確保每次采樣7～10頭（中途可能有死亡的）。之后對(duì)每窩豬按規(guī)定的免疫方案（程序）進(jìn)行免疫注射，在所選用的疫苗都作了事先的規(guī)定，如疫苗的生產(chǎn)廠家，批號(hào)乃至批次，用法，用量等都作統(tǒng)一安排，每窩豬選定一個(gè)免疫方案（程序）后，不作任何改動(dòng)，直到各種疫苗按免疫方案（程序）注射完畢，并做好檔案，登記好豬只耳標(biāo)號(hào)。

1.1.2 試驗(yàn)疫苗

（1）口蹄疫為上海申聯(lián)生產(chǎn)的合成肽疫苗，批號(hào)：20140611，有效期：20150627。

（2）高致病性藍(lán)耳病疫苗為吉林和元生物工程有限公司生產(chǎn)的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗，批號(hào)：20140605，有效期：20151223。

（3）豬瘟疫苗為北京華都詩華生物制藥有限公司的豬瘟耐熱保護(hù)劑活疫苗（細(xì)胞源），批號(hào)：135542，有效期至201512。

1.1.3 診斷試劑

豬瘟抗體ELISA試驗(yàn)盒（BIONOTE韓國安捷公司，批號(hào)4413PO003）；藍(lán)耳抗體檢測(cè)試劑盒（BIONOTE韓國安捷公司，批號(hào)4404081）；豬口蹄疫病毒VPI結(jié)構(gòu)蛋白ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（上海申聯(lián)生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20141101）。

1.2 方法

1.2.1 免疫方案（程序）

A、試驗(yàn)動(dòng)物選14頭仔豬的一窩

35日齡用口蹄疫、高致病性藍(lán)耳病疫苗、豬瘟疫苗耳后分點(diǎn)注射三種疫苗，劑量：口蹄疫1.2ml，高致病性藍(lán)耳病1.2頭份，豬瘟1.2頭份。

B、試驗(yàn)動(dòng)物選12頭仔豬的一窩

（1）高致病性藍(lán)耳病疫苗28日齡1.2頭份免疫一次

（2）豬瘟疫苗35日齡1.2頭份免疫一次

（3）口蹄疫疫苗42日齡1.2ml免疫一次

C、試驗(yàn)動(dòng)物選10頭仔豬的一窩

（1）高致病性藍(lán)耳病疫苗28日齡1.2頭份免疫一次

（2）口蹄疫疫苗、豬瘟疫苗35日齡分別用1.2ml與1.2頭份免疫一次

D、試驗(yàn)動(dòng)物選9頭仔豬的一窩

（1）高致病性藍(lán)耳病疫苗、豬瘟疫苗28日齡1.2頭份免疫一次

（2）口蹄疫疫苗35日齡用1.2ml與1.2頭份免疫一次

E、試驗(yàn)動(dòng)物選11頭仔豬的一窩

（1）口蹄疫疫苗、高致病性藍(lán)耳病疫苗28日齡用1.2ml與1.2頭份免疫一次

（2）豬瘟疫苗35日齡用1.2頭份免疫一次

五個(gè)免疫方案（程序）都實(shí)行耳后肌肉注射。豬瘟和高致病性藍(lán)耳病都用專門稀釋液。三種疫苗均為政府統(tǒng)一采購的疫苗。

1.2.2 免疫副反應(yīng)觀察與分析

每次免疫后72h內(nèi)，對(duì)各組試驗(yàn)豬逐個(gè)觀察并記錄精神狀況、采食、發(fā)病、死亡等情況，統(tǒng)計(jì)免疫副反應(yīng)。

1.2.3 采樣

對(duì)參加試驗(yàn)的動(dòng)物實(shí)行抽血采樣，分為三次，第一次采樣在最后一次免疫后14d抽血，第二次采樣在最后一次免疫后28d抽血，第三次采樣在最后一次免疫后42d抽血。

1.2.4 抗體監(jiān)測(cè)

豬瘟免疫抗體采用阻斷ELISA試驗(yàn)檢測(cè)（BIONOTE），判定標(biāo)準(zhǔn)：豬瘟抗體ELISA試驗(yàn)成立條件是：陰性對(duì)照的平均OD450值＞0.5，陽性對(duì)照的平均OD450值＜0.2。判斷標(biāo)準(zhǔn)：阻斷率＜40%為陰性；阻斷率≥40%判定為陽性。藍(lán)耳抗體檢測(cè)（BIONOTE）

ELISA 的S/P比例：S/P ＜ 0.4 陰性；S/P≥0.4判定為陽性。豬口蹄疫免疫抗體采用ELISA方法檢測(cè)。合成肽苗血清樣品用VPI結(jié)構(gòu)蛋白ELISA抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)（上海申聯(lián)）陰性對(duì)照的平均OD450值≤0.2，陽性對(duì)照的阻斷率≥0.5，且≤2.0試驗(yàn)成立；判斷標(biāo)準(zhǔn)S/ P ＜ 0.3陰性；S/P≥0.3判定為陽性。

表1 A組試驗(yàn)結(jié)果

表2 B組試驗(yàn)結(jié)果

表3 C組試驗(yàn)結(jié)果

表4 D組試驗(yàn)結(jié)果

表5 E組試驗(yàn)結(jié)果

2 結(jié)果

2.1 免疫副反應(yīng)觀察結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)中共有56頭豬，分為5組，僅A組中有3頭出現(xiàn)不同程度精神不振、食欲下降的免疫副反應(yīng)。

2.2 抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

由表1可見，A組中高致病性豬藍(lán)耳病與口蹄疫的免疫抗體合格率都為100%，超過國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)80%，豬瘟第一次檢測(cè)合格，后兩次檢測(cè)僅為33.33%，沒有達(dá)到國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，且變異系數(shù)大。

由表2可見，B組三種病的免疫合格率都超過了80%國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，但僅高致病性藍(lán)耳病的變異系數(shù)大。

由表3可見，C組豬瘟的免疫合格率有兩次沒有超過80%國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，且變異系數(shù)大。高致病性豬藍(lán)耳病與口蹄疫的合格率為100%，變異系數(shù)比較平穩(wěn)。

由表4可見，D組中高致病性豬藍(lán)耳病與口蹄疫的免疫抗體合格率都為100%，超過國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)80%，豬瘟開始合格，后一次檢測(cè)為40.00%，沒有達(dá)到國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。

由表5可見，E組由于豬生病少采樣一次，但從另外兩次采樣的檢測(cè)結(jié)果看，豬瘟的抗體合格率都沒達(dá)標(biāo)，藍(lán)耳病與口蹄疫雖達(dá)到80%的國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，但存在免疫率下降的趨勢(shì)，且變異系數(shù)大。

3 小結(jié)與討論

（1）根據(jù)對(duì)A、B、C、D、E組的綜合分析，在免疫合格率，變異系數(shù)及免疫副反應(yīng)的情況看，可選用D組免疫程序，可作為實(shí)際工作中的首選免疫程序。

（2）試驗(yàn)結(jié)果可以看出，A組省功省時(shí)，但3頭有免疫副反應(yīng)，豬瘟免疫效果差。B組各項(xiàng)指標(biāo)都合格，也是省市免疫實(shí)施方案的使用方法，但費(fèi)時(shí)費(fèi)力，保定次數(shù)多，應(yīng)激反應(yīng)重。當(dāng)然小型的規(guī)模場(chǎng)可以使用。C組減少了保定次數(shù)，但在豬瘟免疫上效果不佳，如果加強(qiáng)豬瘟的二免，C組可用作養(yǎng)殖戶的免疫程序。E組總體免疫效果較差，不作為免疫程序使用。

（3）從A、B、C、D、E組總體免疫效果的情況分析，無論哪組試驗(yàn)，高致病性豬藍(lán)耳病都有很高的合格率，可以不需要二次免疫。豬瘟的免疫效果總體保護(hù)率差，且變異系數(shù)大，需要二次免疫?？谔阋呖傮w抗體水平較好，結(jié)合口蹄疫的使用說明書，口蹄疫也應(yīng)加強(qiáng)二免工作。

[1]董保豫，猶銀俊，周啟澤，等.豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗不同組合免疫效果觀察[J].貴州畜牧獸醫(yī)，2011，35（5）：16-18.

[2]黃文忠，徐志斌，呂粵，等.豬瘟、豬O型口蹄疫、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗聯(lián)合免疫效果評(píng)價(jià)[J].云南畜牧獸醫(yī)，2011，（2）：5-7.