老年糖尿病腎病患者血清內(nèi)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1和過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體-γ表達(dá)水平

陳　薔　俞　娉　于　冰

(杭州市第三人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，浙江　杭州　310009)

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老年糖尿病腎病患者血清內(nèi)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1和過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體-γ表達(dá)水平

陳薔俞娉于冰

(杭州市第三人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，浙江杭州310009)

〔摘要〕目的通過(guò)檢測(cè)糖尿病腎病(DN)患者血清轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1和過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體(PPAR)-γ的蛋白含量及mRNA變化水平，探討二者是否參與DN的發(fā)病進(jìn)程。方法DN患者50例作為DN組，同期體檢健康老年人50例作為對(duì)照組。兩組均清晨空腹取血，采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實(shí)驗(yàn)和實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)血清中TGF-β1和PPAR-γ的蛋白及mRNA水平。結(jié)果與對(duì)照組比較，DN組血清中TGF-β1的蛋白含量及mRNA水平明顯升高(P<0.01)、PPAR-γ的蛋白含量及mRNA水平明顯降低(P<0.01)，且TGF-β1和PPAR-γ具有負(fù)相關(guān)性(r=-0.689，P=0.042；r=-0.711，P=0.036)。結(jié)論TGF-β1水平的上調(diào)和PPAR-γ水平的下調(diào)及二者具有明顯負(fù)相關(guān)性，說(shuō)明可能參與了DN的發(fā)病進(jìn)程。

〔關(guān)鍵詞〕糖尿病腎?。晦D(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1；過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體-γ

糖尿病腎病(DN)是糖尿病繼發(fā)微血管病變最為嚴(yán)重的并發(fā)癥，常導(dǎo)致患者生活質(zhì)量明顯下降甚至死亡〔1〕。本研究探討DN患者血清中的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1和過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體(PPAR)-γ的蛋白含量及mRNA變化水平及機(jī)制。

1資料與方法

1.1一般資料隨機(jī)選取我院2015年2～10月入院且同意受試的DN患者50例作為DN組，其中男28例，平均年齡(54.3±2.6)歲，女22例，平均年齡(55.9±3.7)歲；同期我院接受健康體檢正常老年人50例作為對(duì)照組，其中男25例，平均年齡(57.9±3.5)歲，女25例，平均年齡(55.7±2.9)歲。DN患者均經(jīng)WHO糖尿病及DN的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔2〕篩選，排除臟器官良性或惡性腫瘤，無(wú)心肝肺功能不全，無(wú)合并其他系統(tǒng)感染，具有可比性(P>0.05)。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑及主要儀器抗人酶聯(lián)免疫試劑盒TGF-β1和PPAR-γ(碧云天生物有限公司)；Trizol、RT-PCR試劑盒(塔克拉生物有限公司)。Epoch酶標(biāo)儀(美國(guó))、Biometra PCR擴(kuò)增儀(美國(guó))。

1.3檢測(cè)血清中TGF-β1和PPAR-γ的蛋白含量及mRNA水平清晨空腹取靜脈血5 ml，離心1 000 r/min，分離血清液氮中凍存待測(cè)。一部分血清通過(guò)酶聯(lián)免疫法嚴(yán)格按照試劑盒操作檢測(cè)TGF-β1和PPAR-γ蛋白含量；另一部分用Trizol提取血清內(nèi)總RNA，通過(guò)RT-PCR試劑盒實(shí)現(xiàn)引物擴(kuò)增，采用凝膠成像圖像分析系統(tǒng)分析TGF-β1和PPAR-γ的mRNA水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1兩組血清中TGF-β1和PPAR-γ的蛋白和mRNA含量水平與對(duì)照組比較，DN組血清中TGF-β1的蛋白和mRNA含量水平明顯升高(P<0.01)、PPAR-γ的蛋白和mRNA含量水平明顯降低(P<0.01)。見(jiàn)表1。

2.2TGF-β1和PPAR-γ的相關(guān)性DN組血清中TGF-β1、PPAR-γ均具有負(fù)相關(guān)性(r=-0.689，P=0.042；r=-0.711，P=0.036)。

表1　各組血清TGF-β1和 PPAR-γ的蛋白含量及

與對(duì)照組比較：1)P<0.01

3討論

DN是糖尿病微血管重要并發(fā)癥之一，其發(fā)病率達(dá)20%～40%，主要病變累及部位是腎小球系膜、毛細(xì)血管基膜及細(xì)胞外基質(zhì)，系膜的增生、基膜的增厚外加細(xì)胞外基質(zhì)的大量積聚都將導(dǎo)致腎小球硬化，而糖尿病患者血液的高血糖、高凝、髙聚及高黏狀態(tài)都是DN的繼發(fā)因素〔3〕。研究證實(shí)，多種細(xì)胞因子與炎性因子參與細(xì)胞外基質(zhì)成分的合成及代謝〔4〕。

TGF-β1水平升高能促進(jìn)腎小球系膜細(xì)胞、腎小球毛細(xì)血管增生肥大，從而促進(jìn)腎小管間質(zhì)纖維化，增加細(xì)胞外基質(zhì)在腎小球及腎小管間質(zhì)內(nèi)的異常堆積，導(dǎo)致腎臟受損及有效腎小球的減少〔4，5〕；PPAR-γ是一種核受體，它存在于人類(lèi)染色體上，對(duì)脂肪細(xì)胞和胰島素有重要的作用，當(dāng)PPAR-γ被激活時(shí)能通過(guò)降低DM血糖、血脂、改善胰島素抵抗，從而對(duì)腎臟組織起到保護(hù)作用〔6〕。TGF-β1和PPAR-γ在DN發(fā)生發(fā)展中扮演著尤為重要的角色，二者可能通過(guò)直接誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞凋亡及抑制其增殖參與了DN的發(fā)病進(jìn)程，下調(diào)TGF-β1水平和上調(diào)PPAR-γ水平可能成為臨床治療DN的新靶點(diǎn)。

4參考文獻(xiàn)

1徐鵬杰,李航,徐亞蘭,等.2型糖尿病并發(fā)慢性腎臟病臨床病理特點(diǎn)分析〔J〕.中華腎臟病雜志,2010;26(10):731-5.

2葉任高,陸再英,謝毅,等.內(nèi)科學(xué)〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社,2004：798-80.

3Lee WC,Chen HC,Wang CY,etal.Cilostazolameliorates nephropathy in type 1 diabetic rats involvingimprovement in oxidative stress and regulation of TGF-Beta and NF-kappaB〔J〕.Biosci Biotechnol Biochem,2010;74(7):1355-61．

4鄭亞萍,劉春杰.赤芍對(duì)早期糖尿病腎病大鼠腎臟AngⅡ、ET-1、PKC及TGF-β1的影響〔J〕.當(dāng)代醫(yī)學(xué),2012;18(23):20-3.

5劉圣,陳象青,唐麗琴,等.復(fù)方黃連膠囊對(duì)早期糖尿病腎病大鼠腎組織TGF-β1/BMP-7表達(dá)失衡及其Smad信號(hào)通路的調(diào)控作用〔J〕.中國(guó)中藥雜志,2015;40(5):938-45.

6田雪,于倩,張捷,等.糖尿病大鼠腎組織中PPAR-γ對(duì)TGF-β1、c-Ski調(diào)控作用的研究〔J〕.天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013;19(1):31-5.

〔2014-11-25修回〕

(編輯苑云杰)

基金項(xiàng)目：浙江省中醫(yī)藥管理局(2013ZB106)

通訊作者：俞娉(1967-)，女，主任醫(yī)師，主要從事糖尿病研究。

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R589

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)09-2110-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.09.026

第一作者：陳薔(1965-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事糖尿病并發(fā)癥發(fā)病機(jī)制的研究。