XE-2100光學(xué)法測(cè)血小板在大血小板測(cè)定中的應(yīng)用

解學(xué)龍，張利仁

(1.宜賓市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川宜賓 644000；2.瀘州醫(yī)學(xué)院，四川瀘州 646000)

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·臨床研究·

XE-2100光學(xué)法測(cè)血小板在大血小板測(cè)定中的應(yīng)用

解學(xué)龍1，張利仁2

(1.宜賓市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川宜賓 644000；2.瀘州醫(yī)學(xué)院，四川瀘州 646000)

摘要:目的探討SYEMEX XE-2100光學(xué)法檢測(cè)含大血小板比例高的標(biāo)本血小板計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。方法用手工計(jì)數(shù)法、電阻抗法、光學(xué)法同時(shí)測(cè)定同一標(biāo)本中血小板數(shù)，以手工計(jì)數(shù)法為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)收集數(shù)據(jù)進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)和相關(guān)分析。結(jié)果SYEMEX XE-2100光學(xué)法對(duì)含大血小板比例高的標(biāo)本血小板計(jì)數(shù)測(cè)定重復(fù)性好，在對(duì)380例標(biāo)本相關(guān)分析結(jié)果顯示光學(xué)法測(cè)定結(jié)果比電阻抗法更接近參考方法。結(jié)論在血小板計(jì)數(shù)結(jié)果疑似有大血小板時(shí)使用SYEMEX XE-2100光學(xué)法測(cè)定血小板結(jié)果更準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞:電阻抗法；光學(xué)法；大血小板

血小板計(jì)數(shù)對(duì)血液系統(tǒng)疾病的診斷與治療有重要的參考價(jià)值。準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血小板(PLT)在PLT減少性疾病的診斷和治療過程中非常重要。血小板計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性是臨床醫(yī)生和檢驗(yàn)人員共同關(guān)注的問題，尤其是大血小板的準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，孕婦、心血管疾病、血液病等患者血液中含大血小板較多，大多數(shù)血細(xì)胞分析儀測(cè)定血小板因采用電阻抗法受限于其功能，多無法準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，從而使血小板假性降低[1-2]。因此，準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血小板尤為重要。日本希森美康公司Sysmex XE-2100型全自動(dòng)血液分析儀采用電阻抗和流式細(xì)胞激光技術(shù)．其計(jì)數(shù)血小板采用了電阻法及二維激光散兩種方法來測(cè)定血小板[3-5]。為了探討光學(xué)法檢測(cè)大血小板的應(yīng)用價(jià)值．分別用XE-2100血液分析儀的電阻抗法和光學(xué)法以及手工鏡檢計(jì)數(shù)法對(duì)380例涂片鏡檢有大血小板且血小板計(jì)數(shù)小于100×109/L標(biāo)本和80例無大血小板的對(duì)照標(biāo)本進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源380例樣本均為本院患者血小板數(shù)量小于100×109/L(大血小板組)，均經(jīng)涂片、染色、鏡檢證實(shí)，其血標(biāo)本含較多大血小板且無血小板聚集，電阻抗法測(cè)定結(jié)果均顯示直方圖異常，建議復(fù)查。80例樣本均為本院患者血小板數(shù)量小于100×109/L(對(duì)照組)，均經(jīng)涂片、染色、鏡檢證實(shí)，其血標(biāo)本無大血小板和血小板聚集，電阻抗法測(cè)定結(jié)果均顯示直方圖正常。本院住院患者靜脈血標(biāo)本用EDTA-K2抗凝，抗凝抽靜脈血2 mL。

1.2儀器與試劑日本希森美康公司Sysmex XE-2100全自動(dòng)血液分析儀，用配套校正品校正，原裝配套試劑。

1.3方法分別用Sysmex XE-2100的電阻抗法(PLT-I)和光學(xué)法(PLT-0)及手工鏡檢法(PLT-M)，3種方法分別對(duì)上述380例含有大血小板的標(biāo)本和80例無大血小板的對(duì)照標(biāo)本進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)。電阻抗法(PLT-I)檢測(cè)采用儀器第3檢測(cè)模式(CBC+DIFF)進(jìn)行檢測(cè)；光學(xué)法(PLT-0)檢測(cè)用儀器第4檢測(cè)模式(CBC+DIFF+RET)進(jìn)行檢測(cè)；以手工鏡檢法為標(biāo)準(zhǔn)，判斷Sysmex XE-2100計(jì)數(shù)血小板結(jié)果的準(zhǔn)確性，手工計(jì)數(shù)采用顯微鏡法:草酸銨稀釋液0.38 mL 加20 μL 血液，混勻，充分溶血后吸取PLT懸液注入牛鮑計(jì)數(shù)池，由兩名中級(jí)職稱技術(shù)人員鏡檢計(jì)數(shù)PLT，每份標(biāo)本計(jì)數(shù)2 次，取平均值。實(shí)驗(yàn)在采血后4 h內(nèi)完成。鏡檢法PLT稀釋液，按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3版)》配制[6]，OLYMPUS顯微鏡。方法為世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的草酸銨稀釋液法。

2結(jié)果

2.1電阻抗法與手工法檢測(cè)結(jié)果比較大血小板組電阻抗法與手工鏡檢法兩種方法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，對(duì)照組電阻抗法與手工鏡檢法兩種方法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),檢測(cè)結(jié)果及數(shù)據(jù)見表1。

表1　電阻抗法和手工鏡檢PLT檢測(cè)結(jié)果

2.2光學(xué)法與手工鏡檢法檢測(cè)結(jié)果比較大血小板組光學(xué)法與手工鏡檢法兩種方法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，對(duì)照組電阻抗法與手工鏡檢法兩種方法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),檢測(cè)結(jié)果及數(shù)據(jù)見表2。

2.3電阻抗法與光學(xué)法檢測(cè)結(jié)果比較大血小板組電阻抗法與光學(xué)法兩種方法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，對(duì)照組電阻抗法與光學(xué)法兩種方法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),檢測(cè)結(jié)果及數(shù)據(jù)見表3。

表2　光學(xué)法和手工鏡檢PLT檢測(cè)結(jié)果

表3　電阻抗法與光學(xué)法PLT檢測(cè)結(jié)果

3討論

準(zhǔn)確計(jì)數(shù)外周血的血小板一直都是醫(yī)學(xué)界關(guān)注的重要話題[7-9]。血細(xì)胞分析儀測(cè)定紅細(xì)胞血小板在同一通道中使用電阻抗法，根據(jù)顆粒大小來區(qū)分紅細(xì)胞血小板[10]，小紅細(xì)胞的存在便會(huì)干擾PLT計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，從而導(dǎo)致PLT結(jié)果假性增高；而當(dāng)血液標(biāo)本中PLT顆粒大于30 fL時(shí)，儀器便會(huì)把PLT當(dāng)成紅細(xì)胞計(jì)數(shù)從而導(dǎo)致PLT結(jié)果假性減少[11]。WHO推薦的血小板計(jì)數(shù)參考方法，也存在血小板在計(jì)數(shù)板上的分布誤差，充池是否均勻等眾多因素的影響。而最大的缺點(diǎn)是計(jì)數(shù)的血小板太少，檢測(cè)速度慢，重復(fù)性較差[7]。而衛(wèi)生部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的PLT計(jì)數(shù)參考方法為熒光標(biāo)記PLT特異抗體流式細(xì)胞術(shù)[12]。此法煩瑣且價(jià)格昂貴，難以推廣應(yīng)用，僅適用于特殊病例和用于建立參考方法和校準(zhǔn)儀器[13-14]。

本研究380例涂片鏡檢有大血小板且血小板計(jì)數(shù)小于100×109/L標(biāo)本的電阻抗法血小板計(jì)數(shù)結(jié)果低于光學(xué)法和人工鏡檢法，電阻抗法測(cè)定結(jié)果與光學(xué)法和人工鏡檢法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而光學(xué)法與WHO推薦的人工鏡檢法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在80例無大血小板的對(duì)照組中電阻抗法血小板計(jì)數(shù)結(jié)果與光學(xué)法和人工鏡檢法較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。分析其主要原因是SYEMEX XE-2100測(cè)定血小板光學(xué)原理為半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞檢測(cè)，在血小板進(jìn)行熒光染色后，對(duì)每個(gè)血小板從高低角度二維激光掃描，即用前向散射光檢測(cè)血小板體積，側(cè)向熒光對(duì)血小板內(nèi)部RNA和DNA成分進(jìn)行鑒別計(jì)數(shù)。在流式細(xì)胞儀通道被熒光物質(zhì)標(biāo)記后用熒光識(shí)別，由于紅細(xì)胞(包括小紅細(xì)胞和紅細(xì)胞碎片不會(huì)對(duì)熒光著色，根據(jù)細(xì)胞大小和熒光強(qiáng)度可以把小紅細(xì)胞及其他雜質(zhì)與血小板區(qū)分開，從而排除干擾，得到更可靠的血小板結(jié)果。該法可對(duì)大血小板、小紅細(xì)胞、細(xì)胞碎片、脂類與蛋白的聚合體、免疫復(fù)合物等進(jìn)行有效鑒別，提供一個(gè)更為準(zhǔn)確血小板計(jì)數(shù)的結(jié)果[15-17]。

總之,Sysmex XE-2100光學(xué)法血小板測(cè)定可以較為準(zhǔn)確的測(cè)定混有大血小板的異常血液標(biāo)本的血小板數(shù)，為檢測(cè)血小板數(shù)提供一個(gè)準(zhǔn)確而客觀的重要手段。

參考文獻(xiàn)

[1]曾令軍，王保龍，馬筱玲，等．XE-2100血細(xì)胞分析儀對(duì)巨大血小板計(jì)數(shù)的評(píng)價(jià)[J]．罕少疾病雜志，2012，6(3)：22-25．

[2]薛飛平，孫瑞雪，吳禮鋒．三種方法對(duì)巨大血小板的檢測(cè)分析[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，25(5)：398-400．

[3]閉雄杰．Sysmex XE-2100血液分析儀光學(xué)法計(jì)數(shù)血小板在血小板直方圖異常時(shí)的應(yīng)用價(jià)值[J]．臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，23(12)：1949-1950．

[4]元幼紅，徐衛(wèi)益，陳保德．XE-2100血液分析儀光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)的臨床應(yīng)用[J]．中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010(10)：2526-2528．

[5]華江，潘揚(yáng)．不同檢測(cè)方法計(jì)數(shù)血小板的準(zhǔn)確性評(píng)價(jià)[J]．臨床檢驗(yàn)雜志，2015(1)：12-13．

[6]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜．全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)則[M]．3版．南京：東南大學(xué)出版社，2006：136．

[7]曾婷婷，左成華，郭曼英，等．光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)作為低血小板標(biāo)本復(fù)檢方法的可行性研究[J]．現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007(6)：39-41．

[8]李果，高兵，彭政，等．光學(xué)法計(jì)數(shù)在低值血小板檢測(cè)中的研究應(yīng)用[J]．臨床血液學(xué)雜志:輸血與檢驗(yàn)版，2009(2)：189-190．

[9]劉非，高秀蓉，曾蘭蘭，等．大血小板影響光學(xué)法與電阻抗法血小板計(jì)數(shù)差異的比較分析[J]．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35(13)：1766-1767．

[10]劉美玲，曾穎．XT-4000i血液分析儀血小板兩種測(cè)定方法與血涂片復(fù)檢的對(duì)比分析[J]．中國(guó)衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2014，20(11)：156-158．

[11]馮光．電阻抗法和光學(xué)法檢測(cè)血小板數(shù)的比較評(píng)價(jià)[J]．廣州醫(yī)藥，2012，22(3)：47-49．

[12] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn).WS/T 244-2005 PLT計(jì)數(shù)參考方法[S]．北京：中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，2005.

[13]朱忠勇．準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血小板方法學(xué)研究進(jìn)展[J]．國(guó)外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè)，2002，23(3)：131-132．

[14]王建中，屈晨雪．三種流式細(xì)胞術(shù)計(jì)數(shù)血小板方法的比較研究[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2003，26(1)：7-11．

[15]羅麗貞，葉金鋒，劉偉陽(yáng)．XE-5000血細(xì)胞分析儀血小板計(jì)數(shù)性能評(píng)價(jià)[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8(4)：400-402．

[16]劉非，楊紅玲，梁綺華，等．紅細(xì)胞體積分布寬度引起光學(xué)法和電阻抗法血小板計(jì)數(shù)的差異分析[J]．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33(14)：1750-1752．

[17]范小斌，羅燕飛．兩種血小板計(jì)數(shù)方法的比較及評(píng)價(jià)[J]．廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，40(5)：59-61．

(收稿日期：2016-01-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.063

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)09-1288-03