前列腺癌患者血清人腺激肽釋放酶2水平檢測的臨床價值

蕭結(jié)容，閔　玲，楊素冰，張其超

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州510000)

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·論著·

前列腺癌患者血清人腺激肽釋放酶2水平檢測的臨床價值

蕭結(jié)容，閔玲，楊素冰，張其超

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州510000)

摘要:目的探討血清人腺激肽釋放酶2(hK2)的檢測對于前列腺癌(PCa)患者早期診斷、預(yù)后判斷和治療手段的臨床價值。方法選取2015年1～12月期間于廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院就診的25例PCa患者和25例前列腺增生(BPH)患者及25例健康男性作為研究對象，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)對hK2和前列腺特異性抗原(PSA)水平進(jìn)行檢測。另隨機(jī)選取進(jìn)行過根治性前列腺全切術(shù)的PCa組患者12例，檢測并分析其手術(shù)前后hK2水平。 該文所得數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS21.0建模處理。結(jié)果PCa組、BPH組和健康組的hK2水平分別為(75.5±24.5)ng/L、(23.3±5.8)ng/L和(22.2±3.56)ng/L，PCa組明顯高于BPH組和健康組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；hK2檢測PCa的特異度、準(zhǔn)確度分別為89%和78%，25例PCa患者術(shù)后的hK2水平[(34.4±10.5)ng/L]與術(shù)前[(80.2±24.5)ng/L]相比較顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論hK2診斷PCa患者能有效提高其檢測特異度，減少患者不必要的活檢率，為患者的早期臨床檢測、預(yù)后判斷和治療提供了新的方向，前景值得進(jìn)一步挖掘。

關(guān)鍵詞:前列腺癌；人腺激肽釋放酶2；前列腺特異性抗原；臨床價值

前列腺癌(PCa)是男性生殖系統(tǒng)較常見的惡性腫瘤，隨著年齡的增長患病的概率越大，早期癥狀不明顯，使得早期診斷工作困難重重。目前，臨床上進(jìn)行PCa早期診斷尚未有萬全之策，因此懷疑患有PCa的患者在沒有病理診斷的情況下，必須承受前列腺活體組織檢查之苦。近年來，隨著醫(yī)療手段的不斷進(jìn)步，研究人員為發(fā)現(xiàn)準(zhǔn)確度高、特異度強(qiáng)與PCa相關(guān)的分子生物學(xué)指標(biāo)而不斷做出努力，成為相關(guān)學(xué)者聚焦的重點(diǎn)。相關(guān)研究顯示，與前列腺特異性抗原(PSA)一樣，由前列腺上皮細(xì)胞產(chǎn)生的存在于血循環(huán)或組織中的人組織激肽釋放酶(KLKs)出現(xiàn)異常及其與惡性腫瘤的形成和發(fā)展之間的關(guān)系這一課題，越來越引發(fā)相關(guān)學(xué)者的激烈討論[1]。KLKs分泌至循環(huán)系統(tǒng)中的血清人腺激肽釋放酶2(hK2)，極大可能促進(jìn)PCa增長[2]，因此，對于PCa的篩選、分期和研究的準(zhǔn)確度、特異度而言，正確檢測hK2變得尤為重要。然而，現(xiàn)階段對于此診斷方法爭議較大，尚未成熟[3]。本研究通過hK2聯(lián)免疫定量分析法來檢測PCa、前列腺增生(BPH)患者和健康人的血清hK2水平，對血清hK2水平和PCa的相關(guān)性進(jìn)行探討，為PCa的早期診斷、預(yù)后判斷和治療提供有力依據(jù)。現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取2015年1～12月期間于廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院就診的PCa患者25例(PCa組)、BPH患者25例(BPH組)及健康男性25例(健康組)作為研究對象。PCa組年齡60～82歲，平均年齡(69.3±5.2)歲，且根據(jù)2002年P(guān)Ca AJCC分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期分別為2例、4例、7例和12例；BPH組患者25例，年齡53～80歲，平均年齡為(66.2±2.5)歲，且均符合以下標(biāo)準(zhǔn)：(1)PCa和BPH患者均進(jìn)行病理診斷已證實(shí)；(2)均在直腸指診檢查前或檢查后的1周、活檢后2周進(jìn)行采血；未因前列腺疾病而接受治療；(3)均未接受過前列腺疾病的相關(guān)治療。健康組年齡55～85歲，平均年齡為(70.8±7.6)歲。各組年齡間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法分別抽取各組清晨空腹靜脈血5 mL，3 h內(nèi)分離血清，收集后集中檢測hK2和PSA。另隨機(jī)選取進(jìn)行過根治性前列腺全切術(shù)的Pca組患者12例，檢測并分析其手術(shù)前后的hK2水平。hK2檢測通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、hK2單克隆抗體(hK2mAb)、hK2多克隆抗體(hK2pAb)、放射免疫分析法(RIA)、辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗IgG進(jìn)行。操作步驟如下：組分配制的試劑盒，置于室溫平衡30 min，加入50 μL hK2標(biāo)準(zhǔn)品，準(zhǔn)備好空白對照組(10 g/L BSA/PBS)。稀釋hK2 pAb 100 μL，每孔1∶2 000稀釋量，37 ℃培育1 h；洗滌3次，加入1∶8 000稀釋的HRP標(biāo)記抗IgG每孔100 μL，均通過37 ℃培育1 h并洗滌3次。底物液每孔加入100 μL，避光顯色15 min后每孔加入2.0 mol/L H2SO450 μL并終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀450 nm波長讀取各孔吸光度(A)值，根據(jù)曲線圖繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。PSA檢測方法為RIA，使用試劑盒為PSARIAkit藥盒,廠家為天津九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公司,PSA正常參考值小于4.0 ng/mL，使用儀器為SN-695B型智能放免γ檢測儀,廠家為上海核所日環(huán)光電儀器有限公司。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行建模處理，相關(guān)分析方法采用均數(shù)t檢驗(yàn)、方差分析、χ2檢驗(yàn)和雙變量，計數(shù)資料采用列聯(lián)表計算比值比(OR)及其95%CI描述，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組hK2水平檢測結(jié)果比較PCa組、BPH組和健康組的hK2水平分別為(75.5±24.5)ng/L、(23.3±5.8)ng/L和(22.2±3.56)ng/L，PCa組分別明顯高于BPH組和健康組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.688，P<0.05)。15例進(jìn)行過根治性前列腺全切術(shù)的PCa患者在術(shù)前后需分別檢測血清hK2水平3次，PCa患者術(shù)前和術(shù)后的血清hK2分別為(80.2±24.5)ng/L和(34.4±10.5)ng/L，其中術(shù)后有12例呈明顯下降趨勢，3例無明顯變化，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.258，P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期PCa患者血清hK2水平分別為(76.2±24.6)ng/L、(65.2±33.5)ng/L、(82.2±22.8)ng/L和(83.2±25.5)ng/L，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。BPH組和PCa組的血清PSA水平分別為(8.99±4.87)ng/mL和(43.5±28.3)ng/mL，可知上述兩組的PSA水平均比正常參考值(<4.0 ng/mL)略高，其中PCa組的PSA水平明顯高于PPH組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=7.380，P<0.05)。

表1　PCa患者血清hK2和 PSA 水平檢測的診斷價值[%(n/n)]

通過比值比和95%CI得到hK2水平較高者患PCa的相對危險度，計算后顯示與hK2水平低的患者相比，相對較高的PCa患者的相對危險度為15.45(95%CI：3.82～63.15，P<0.05)。通過血清hK2診斷后，PCa的ROC曲線下面積為0.657(95%CI：0.622～0.881)，標(biāo)準(zhǔn)誤為0.064。由此可得，對于PCa的篩選、分期和研究的準(zhǔn)確度、特異度而言，正確檢測hK2變得尤為重要。

3討論

大量研究顯示，在循環(huán)系統(tǒng)中PSA和hK2可共存，兩者在核苷酸序列上具有80%的同源性，都可由前列腺的上皮細(xì)胞表達(dá)且表達(dá)量最高[2,4-5]，其他組織相對較低，也許著兩者之間存在著某種功能關(guān)系。大膽推測hK2極大可能促進(jìn)PCa增長，成為PCa發(fā)病途徑中不可或缺的因素。本研究PCa組大幅度高于BPH組和健康組，且BPH組hK2與健康組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。hK2的升高可能使PCa的危險性增高，對PCa的診斷有較高的準(zhǔn)確度。研究中顯示只用PSA檢測PCa，優(yōu)點(diǎn)在于靈敏度高，但特異度較低。相比雖然PCa組hK2升高的陽性率較低。PCa預(yù)后關(guān)系著患者到生活質(zhì)量，成為臨床關(guān)注的焦點(diǎn)。hK2對于PCa病理分級和分期評估指標(biāo)存在重要指導(dǎo)作用。本研究顯示，分期后的PCa組中血清hK2水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而且與分期無明顯的相關(guān)性。產(chǎn)生這一結(jié)果與相關(guān)報道不相符[6-10]，研究人員探討后總結(jié)原因主要有以下幾點(diǎn)：(1)hK2檢測存在不同方式，有一定關(guān)聯(lián)；(2)各組人員入組時的不同個體存在一定差異；(3)PCa的分期均為臨床分期，可能導(dǎo)致分期誤差。由于種種因素，使得研究結(jié)果未達(dá)到預(yù)期，也可能產(chǎn)生不同的新理論，都應(yīng)在日后不斷證實(shí)，加強(qiáng)相關(guān)研究的準(zhǔn)確度。

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Clinical value of human kallikrein 2 detection on patients with prostate cancer

XiaoJierong,MinLing,YangSubing,ZhangQichao

(DepartmentofClinicalLaboratory,theAffiliatedCancerHospitalofGuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou,Guangdong510000,China)

Abstract:ObjectiveTo study the clinical value of human kallikrein 2 detection on the early diagnosis,prognosis and therapeutic means of patients with prostate cancer.Methods25 patients with prostate cancer and 25 patients with benign prostatic hyperplasia who were treated in affiliated hospital of Guangzhou Medical University between January 2015 and December 2015 were selected as research objects.Their human kallikrein 2 and prostate specific antigen level were detected by ELISA and RIA.25 cases of prostatic cancer after operation of our hospital in synchronization were randomly selected as research objects and their human kallikrein 2 level was detected and analysed.All the data was modeling processed by SPSS21.0.ResultsHuman kallikrein 2 level of PCa group,BPH group and healthy group was(75.5±24.5)ng/L,(23.3±5.8)ng/L and(22.2±3.56)ng/L respectively,which of PCa group was higher than that of BPH group and healthy group.The difference had statistical significance(P<0.05).The specific and accuracy of hK2 detecting PCa was 89% and 78%.Compared with before operation[(80.2±24.5)ng/L],hK2 level of 25 patients with prostate cancer[(34.4±10.5)ng/L] significantly decreased and the difference had statistical significance(P<0.05).ConclusionOn diagnosing prostate cancer,human kallikrein 2 can improve specific detection,reduce unnecessary detected rate and provide the new direction for early clinical detection,prognosis and therapy.It deserves further promotion.

Key words:prostate cancer;human kallikrein 2;prostate specific antigen;clinical value

(收稿日期：2015-12-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.012

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)09-1186-02

作者簡介：蕭結(jié)容，女，主管技師，主要從事臨床生化與免疫檢驗(yàn)研究。