慢性乙型肝炎抗病毒治療中監(jiān)測乙肝大蛋白的臨床價(jià)值

徐瑞芳，張紅云，田 怡，張志峰，劉 紅，張曹庚，鄧文宗，劉 雨，施燕芬，劉海玲，孫秀娟

上海市閔行區(qū)中心醫(yī)院感染科，上海 201199

慢性乙型肝炎抗病毒治療中監(jiān)測乙肝大蛋白的臨床價(jià)值

徐瑞芳，張紅云，田 怡，張志峰，劉 紅，張曹庚，鄧文宗，劉 雨，施燕芬，劉海玲，孫秀娟

上海市閔行區(qū)中心醫(yī)院感染科，上海 201199

目的 評(píng)估血清乙肝大蛋白(hepatitis B virus large protein,HBV-LP)在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者抗病毒治療中的臨床價(jià)值。方法 經(jīng)恩替卡韋治療120 例CHB 患者，分別于用藥0周、12周、24周、36周、48周、72周、96周檢測HBV-LP、HBV DNA水平。結(jié)果 在CHB患者中，HBV-LP及HBV DNA檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；在抗病毒治療中，HBV-LP與HBV DNA降低呈一致趨勢(shì)，HBV-LP的消減晚于HBV DNA(P<0.05)。結(jié)論 血清HBV-LP檢測是抗病毒療效評(píng)估及治療終點(diǎn)判斷的有效指標(biāo)。

乙肝大蛋白；慢性乙型肝炎；抗病毒治療

乙型肝炎是我國常見的慢性傳染病之一，嚴(yán)重危害人類健康[1-2]。核苷(酸)類似物隨著療程的延長而耐藥率升高[3]。目前臨床上多采用HBV DNA、HBeAg等來檢測乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)在肝臟復(fù)制情況及判斷抗病毒治療的療效，鄧宜楚等[4]研究發(fā)現(xiàn)依據(jù)HBV DNA低于檢測下限的停藥標(biāo)準(zhǔn)，復(fù)發(fā)率達(dá)81.6%。近期對(duì)乙肝病毒大蛋白(hepatitis B virus large protein，HBV-LP)的深入研究，發(fā)現(xiàn)其與HBV復(fù)制關(guān)系密切[5]。本文對(duì)上海市閔行區(qū)中心醫(yī)院120例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者抗病毒治療中檢測不同時(shí)期血清中HBV-LP、HBV DNA水平，并對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以探討HBV-LP 在CHB患者抗病毒療效評(píng)估中的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 根據(jù)《亞太地區(qū)慢性乙型肝炎治療共識(shí)(2012年版)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，選取2012年9月-2014年9月在上海市閔行區(qū)中心醫(yī)院肝炎門診接受恩替卡韋抗病毒治療的120例患者，男78例，女42例，年齡25～65歲，平均年齡(41.23±15.36)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：既往有乙型肝炎病史或HBsAg陽性超過6個(gè)月，現(xiàn)HBsAg、HBV DNA仍為陽性者，ALT≥2×ULN，就診前未接受相關(guān)抗病毒治療，且未合并感染其他嗜肝病毒；排除標(biāo)準(zhǔn):ALT升高因酒精或藥物等其他因素所致者。健康對(duì)照組40名來自我院體檢中心健康體檢者，男20名，女20名，年齡25～65歲，平均年齡(35.16±10.87)歲，均無HAV、HCV、HDV、HEV、HGV合并感染且無肝臟、腎臟功能損害。

1.2 治療方法和觀察指標(biāo) 由正大天晴藥業(yè)有限公司提供恩替卡韋分散片，給藥方式為口服，1次/d，每次0.5 mg。ALT≥2×ULN者給予當(dāng)飛利肝片、肝蘇顆粒等保肝藥物治療，所有受試者均分別于用藥0周、12周、24周、36周、48周、72周、96周抽取清晨空腹(8 h)外周靜脈血4 ml，以3 000 r/min離心10 min，分離血清并檢測HBV-LP、HBV DNA。

1.3 檢測方法 HBV-LP檢測采用ELISA法，依據(jù)試劑說明書進(jìn)行編程測定，使用上海邦景實(shí)業(yè)有限公司的試劑盒；HBV DNA定量檢測采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,HBV DNA>1×103copies/ml時(shí)認(rèn)定為陽性，HBV DNA<1×103copies/ml時(shí)認(rèn)定為陰性，使用上海繼錦化學(xué)科技有限公司的試劑盒。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HBV DNA 拷貝數(shù)和 HBV-LP 吸光度值的相關(guān)性用直線回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 HBV-LP與HBV DNA檢測結(jié)果比較 對(duì)120例接受恩替卡韋抗病毒治療前患者的血清進(jìn)行檢測，其中HBV DNA陽性120例(100%)，HBV-LP陽性116例(96.7%)。經(jīng)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.35，P>0.05)。

2.2 恩替卡韋治療過程中HBV-LP與HBV DNA相關(guān)性分析 在120例CHB患者接受恩替卡韋抗病毒治療的過程中，HBV DNA、HBV-LP陽性率隨治療時(shí)間增加而不斷降低。HBV DNA、HBV-LP陽性率在治療前后具有顯著性差異(P<0.05)，且隨著治療時(shí)間的延長,HBV-LP的陽性率明顯高于HBV DNA的陽性率，兩者比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HBV DNA拷貝數(shù)、HBV-LP檢測結(jié)果的變化趨勢(shì)一致，且HBV-LP消減晚于HBV DNA (P<0.05)，表明HBV-LP含量與HBV DNA拷貝數(shù)之間具有正相關(guān)性(r=0.808,P<0.05,見表1～2、圖1)。

表1 抗病毒治療過程中HBV-LP、HBV DNA陽性率比較[例數(shù)(%)]Tab 1 Comparison of the HBV-LP,HBV DNA positive during the antiviral therapy [n(%)]

表2 HBV DNA拷貝數(shù)與HBV-LP吸光度值之間的關(guān)系Tab 2 The relationship between the HBV DNA copy number and the absorbance of HBV-LP ±s)

圖1 HBV DNA拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值與HBV-LP吸光度值的相關(guān)性
Fig 1 Correlation between the logarithm of HBV DNA copy number and the absorbance of HBV-LP

3 討論

Bruss[7]對(duì)感染HBV的鴨肝研究表明，在HBV感染的肝細(xì)胞中，HBV-LP存在于HBV Dane顆粒和亞管狀顆粒上，對(duì)HBV復(fù)制有重要作用。通過其特有的雙重跨膜拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)與病毒受體結(jié)合后介導(dǎo)HBV顆粒進(jìn)肝細(xì)胞，具有很強(qiáng)的反式調(diào)節(jié)作用，與蛋白激酶C結(jié)合，觸發(fā)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，從而激活轉(zhuǎn)錄子，進(jìn)入分泌途徑，參與病毒顆粒的組裝[8-11]。

本研究結(jié)果顯示，在120例抗病毒治療的CHB患者中，HBV-LP與HBV DNA的陽性檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HBV DNA拷貝數(shù)對(duì)數(shù)值與HBV-LP吸光度值呈正相關(guān)，這與樊燕等[12]研究結(jié)果相符：HBV-LP與HBV DNA均能有效反映乙肝患者體內(nèi)HBV復(fù)制水平，判斷HBV復(fù)制的血清學(xué)指標(biāo)?；颊叻每笻BV藥物后雖然HBV DNA轉(zhuǎn)陰，但肝細(xì)胞內(nèi)仍存在較多的cccDNA，管形顆粒中的HBV-LP能通過反式激活作用使病毒復(fù)制重新激活，引起病情反復(fù)。因此在抗病毒治療后血液中已經(jīng)查不到HBV DNA的情況下，HBV-LP的持續(xù)陽性與停藥后的病情反復(fù)密切相關(guān)，僅根據(jù)HBV DNA轉(zhuǎn)陰停藥，導(dǎo)致多數(shù)CHB患者體內(nèi)的HBV DNA重新復(fù)制，使病情反彈[13]。目前臨床上沒有統(tǒng)一的有效標(biāo)準(zhǔn)來判定抗病毒治療的終點(diǎn)，有的學(xué)者甚至主張終身用藥，不僅增加了患者身體上和經(jīng)濟(jì)上的負(fù)擔(dān)，還造成了醫(yī)療資源浪費(fèi)。當(dāng)CHB患者血清HBV DNA低水平時(shí)，血清HBV-LP的檢測可反映患者肝內(nèi)HBV復(fù)制情況，也可用來判定抗病毒治療患者的治療終點(diǎn)。

綜上所述，檢測HBV-LP可動(dòng)態(tài)監(jiān)測HBV感染者機(jī)體病毒復(fù)制程度，是抗病毒治療中的乙型肝炎患者的疾病進(jìn)程、療效與預(yù)后判斷的重要指標(biāo)，可彌補(bǔ)HBV DNA檢測在HBV患者抗病毒治療終點(diǎn)判斷及療效評(píng)估中的不足。

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(責(zé)任編輯：王全楚)

The value of hepatitis B virus large protein in antiviral treatment of chronic hepatitis B

XU Ruifang,ZHANG Hongyun,TIAN Yi，ZHANG Zhifeng，LIU Hong，ZHANG Caogeng，DENG Wenzong，LIU Yu,SHI Yanfen，LIU Hailing，SUN Xiujuan

Department of Infection Disease,Shanghai Minhang District Central Hospital,Shanghai 201199,China

Objective To study the value of hepatitis B virus large protein (HBV-LP) in antiviral treatment of chronic hepatitis B (CHB). Methods One hundred and twenty cases of CHB patients received ETV for 96 weeks treatment. The serum HBV-LP and HBV DNA were detected at the different time of before treatment and 12 weeks,24 weeks,36 weeks,48 weeks,72 weeks and 96 weeks after accepting antiviral treatment. Results The detection rates of HBV-LP and HBV DNA had no significant difference in patients with CHB (P>0.05). In the antivirus therapy，the decline of HBV-LP was similar to HBV DNA,HBV-LP reduced later than HBV DNA (P<0.05). Conclusion In the antiviral treatment，the HBV-LP is a effictive index for evaluation of HBV．

Hepatitis B virus large protein; Chronic hepatitis B; Antiviral treatment

上海市閔行區(qū)衛(wèi)生局課題(2015MW15)

徐瑞芳，副主任醫(yī)師，研究方向：消化道腫瘤。E-mail: 15221181500@163.com

張紅云，主治醫(yī)師。研究方向：消化道腫瘤。E-mail: 6260031@qq.com

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.02.014

R512.6+2

A

1006-5709(2016)02-0171-03

2015-03-07