瓜類疫霉菌對(duì)烯酰嗎啉的敏感性及其室內(nèi)抗藥突變體研究

吳永官 程亮 康德賢 王益奎 付崗 李文嘉 黎炎 曾燕紅

摘 要 采用菌絲生長(zhǎng)速率法，對(duì)采自廣西6個(gè)冬瓜和黃瓜產(chǎn)區(qū)的116株瓜類疫霉菌進(jìn)行烯酰嗎啉的敏感性檢測(cè)。結(jié)果表明：敏感菌株和中間型菌株分別占測(cè)試菌株的8.6%和91.4%，以中間型菌株為優(yōu)勢(shì)菌群，所有樣區(qū)均未檢測(cè)到抗性菌株；待測(cè)菌株的EC50值范圍為0.081 3～1.340 0 μg/mL，最不敏感菌株是最敏感菌株的16倍，平均EC50值為（0.274 6±0.092 8）μg/mL；116株瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性分布呈單峰曲線，未出現(xiàn)敏感性下降的亞群體，可將其單峰曲線作為瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性基線，將烯酰嗎啉對(duì)該病原群體的平均EC50值作為田間抗藥性檢測(cè)的參考標(biāo)準(zhǔn)。通過室內(nèi)對(duì)敏感菌株進(jìn)行藥劑馴化選育20代，獲得抗性指數(shù)大于2.0的抗藥突變體3株；采用紫外線處理未獲得有明顯抗性的突變體。3株突變體的部分生物學(xué)性狀結(jié)果表明，突變體對(duì)寄主的致病力明顯弱于其親本菌株，突變株DRGL-4和DRYL-154菌株幾乎喪失致病力；在不同pH及不同溫度培養(yǎng)條件下，部分抗藥突變體菌絲生長(zhǎng)率與親本菌株相比均有不同程度的提高。綜合分析表明，在當(dāng)前的管理水平和栽培模式下，瓜類疫霉菌抗藥突變體群體在田間難以形成和發(fā)展，烯酰嗎啉屬于低抗性風(fēng)險(xiǎn)的用于防治瓜類疫病的有效殺菌劑。

關(guān)鍵詞 瓜類疫霉；烯酰嗎啉；敏感性；突變體

中圖分類號(hào) S436.42 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

Abstract The sensitivity of 116 Phytophthora melonis isolates， which were collected from six wax gourd and cucumber growing areas in Guangxi to dimethomorph was determined by the mycelia growth inhibition method. The results showed that the sensitive， moderate and resistant strains was accounted for 8.6%， 91.4% and 0， respectively. The EC50 values of P. melonis populations ranged from 0.081 3 μg/mL to 1.340 0 μg/mL. EC50 of the most insensitive strain was 16 folds of the most sensitive one， with a mean of（0.274 6±0.092 8）μg/mL. The sensitivity frequency of P. melonis to dimethomorph distributed as unimodal curve， which indicated that there was no resistant subpopulation among these strains， so this sensitivity baseline could be used for resistance monitoring of P. melonis to dimethomorph. Three resistant mutants（resistant factor>2.0）were generated after 20 generations subcultured on dimethomorph-amended medium， but failed to generate resistant mutants by UV-irradiation. Some biological characteristics of resistant mutants were studied in this paper. The results showed that there were significantly differences between the mutants and wild type in pathogenicity， e.g. two of these mutants almost lost their pathogenicity on their host. However， the growth rates of most resistant mutants were greater than that of their parental strains on different pH values and different temperatures. Based on these results， the development of field resistance to dimethomorph in populations of P. melonis is unlikely under the currently employed resistance management strategies， which indicated that the dimethomorph belonged to a low risk fungicide in field application.

Key words Phytophthora melonis； Dimethomorph； Sensitivity； Resistant mutant

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2016.10.023

瓜類疫霉（Phytophthora melonis Katsura）由日本學(xué)者桂琦一[1]在1951年首次從罹病的黃瓜上分離得到，并鑒定為新種。之后由該菌引起的植物病害相繼在少數(shù)的幾個(gè)亞洲國家和地區(qū)，如中國大陸、臺(tái)灣地區(qū)、日本、伊朗及印度等地有報(bào)道[2]。由瓜類疫霉（P. melonis）引起的瓜類疫病是華南地區(qū)冬瓜和黃瓜產(chǎn)區(qū)最嚴(yán)重的病害之一[3]，該病在溫濕度適合的情況下能在極短時(shí)間內(nèi)導(dǎo)致大流行，田間植株發(fā)病率可達(dá)90%以上[4]。目前對(duì)該病害的防治主要以化學(xué)防治為主。甲霜靈（metalaxyl）具有優(yōu)良的保護(hù)、治療和鏟除作用而廣泛應(yīng)用于卵菌病害的防治。甲霜靈屬苯基酰胺類殺菌劑，其作用機(jī)制主要是特異地抑制病原核糖體RNA聚合酶，從而抑制RNA的合成[5]，由于作用位點(diǎn)單一，病原菌容易產(chǎn)生抗藥性，目前已在許多國家和地區(qū)普遍發(fā)現(xiàn)疫霉菌（Phytophthora spp.）對(duì)甲霜靈產(chǎn)生抗性的報(bào)道[6-9]。吳永官等[9]曾對(duì)廣西、廣東兩?。▍^(qū)）的9個(gè)樣區(qū)193株瓜類疫霉進(jìn)行甲霜靈的抗藥性檢測(cè)，結(jié)果表明，敏感、中間型菌株及抗性菌株分別占測(cè)試菌株的29.0%、18.1%和52.8%，抗性菌株占據(jù)了優(yōu)勢(shì)類群，表明華南地區(qū)瓜類疫霉對(duì)甲霜靈已產(chǎn)生極高的抗性。

近年來，氟嗎啉、烯酰嗎啉等羧酸氨基類（Carboxylic Acid Amides，CAA）殺菌劑以其抑菌活性高、內(nèi)吸傳導(dǎo)作用強(qiáng)、對(duì)卵菌特效并與苯基酰胺類殺菌劑無交互抗性等特點(diǎn)受到廣泛的重視，是繼甲霜靈之后防治卵菌病害的一種理想殺菌劑。該類殺菌劑自上世紀(jì)90年代進(jìn)入中國市場(chǎng)后，已在多種卵菌病害如辣椒疫病、番茄晚疫病、黃瓜霜霉病和荔枝霜疫霉等的防治中獲得登記許可并廣泛應(yīng)用[10]。但隨著使用量不斷增大，病原的抗藥性問題引起人們極大的關(guān)注。目前，已在辣椒疫霉、寄生疫霉、致病疫霉及霜霉菌等卵菌方面開展了對(duì)CAA類殺菌劑的抗藥性研究[10-13]。廣西作為南菜北運(yùn)最主要的生產(chǎn)基地，每年冬瓜和黃瓜的種植面積超過5萬公頃，因作物生長(zhǎng)期正值雨熱同季，也成為瓜類疫病發(fā)生的重災(zāi)區(qū)和高發(fā)區(qū)。據(jù)作者調(diào)查，作為防治疫病的最主要藥劑，烯酰嗎啉用于冬瓜和黃瓜疫病的防治已超過10年的用藥歷史，目前有關(guān)瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的抗藥性研究國內(nèi)外未見報(bào)道。本研究旨在通過系統(tǒng)檢測(cè)瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性，建立瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性基線，為開展田間抗藥性監(jiān)測(cè)提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)通過室內(nèi)抗藥突變體誘導(dǎo)并研究其生物學(xué)特性，為瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的抗藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和抗性治理提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株 2012～2014年期間自廣西南寧、桂林、玉林、武鳴、柳州及崇左6個(gè)不同地區(qū)的冬瓜和黃瓜上采集具典型疫病癥狀植株樣品150余份，用組織分離法分離、純化和鑒定[14-15]，共獲得瓜類疫霉116株。

1.1.2 供試藥劑和培養(yǎng)基 烯酰嗎啉原藥，由陜西康禾立豐生物科技藥業(yè)公司生產(chǎn)，原藥用少量丙酮溶解，配制成50 mg/mL的母液，于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩９┰嚺囵B(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。

1.2 方法

1.2.1 瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性測(cè)定 敏感性測(cè)定采用菌絲生長(zhǎng)速率法[9]，自PDA平板上培養(yǎng)5 d的菌落邊緣取直徑5 mm的菌餅，將各待測(cè)菌株分別移入含烯酰嗎啉0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 μg/mL的培養(yǎng)基平板中培養(yǎng)5～7 d，當(dāng)對(duì)照（即不含烯酰嗎啉的PDA培養(yǎng)基平板）的菌落直徑至少達(dá)6 cm時(shí)，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。每處理重復(fù)3次。通過菌絲生長(zhǎng)抑制幾率值和烯酰嗎啉的濃度對(duì)數(shù)之間的線性回歸分析，求出各菌株的EC50值，按朱桂寧等[8]的方法將菌株對(duì)烯酰嗎啉的敏感性劃分為抗性（EC50值﹥10 μg/mL）、中間型（0.1 μg/mL≤EC50值≤10 μg/mL）和敏感（EC50值<0.1 μg/mL）3個(gè)級(jí)別。最后根據(jù)敏感群體的EC50分布建立瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性基線。

1.2.2 抗藥突變體的誘導(dǎo) （1）藥劑馴化。將供試敏感菌株在含烯酰嗎啉的PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，選擇壓保持在抑制菌落生長(zhǎng)50%～60%，連續(xù)選擇20代，每代培養(yǎng)時(shí)間為6 d，每隔5代則根據(jù)1.2.1的方法計(jì)算繼代分離物的EC50值，比較不同時(shí)期繼代分離物對(duì)烯酰嗎啉的抗性變化。抗性指數(shù)=抗藥突變體的EC50/親本菌株的EC50，下同。以在無藥培養(yǎng)基上連續(xù)培養(yǎng)的敏感菌株親本為對(duì)照。

（2）紫外線誘導(dǎo)。參照胡燕[16]的方法并加以改進(jìn)，將敏感菌株培養(yǎng)5 d，沿邊緣取直徑5 mm的菌餅，接入PDA培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)24 h后，置于已預(yù)熱10 min的紫外燈（25 W，波長(zhǎng)250 nm）下方25 cm處照射，照射時(shí)間分別設(shè)10、15、20、25、30、35、40 min等7個(gè)處理。照射后置于28 ℃黑暗培養(yǎng)，以不照射為對(duì)照，4 d后調(diào)查不同處理的致死率，找出菌落亞致死的照射時(shí)間用于隨后的突變體誘導(dǎo)。

敏感菌株培養(yǎng)5 d后，制成直徑5 mm的菌餅，接入選擇壓保持在抑制菌絲生長(zhǎng)50%～60%的含藥PDA平板上，培養(yǎng)24 h后，置于已預(yù)熱10 min的紫外燈下照射亞致死時(shí)間，后置于28℃黑暗培養(yǎng)7～10 d。平板上長(zhǎng)出的扇形角變菌落即為突變體，將突變體轉(zhuǎn)移到空白平板上。試驗(yàn)重復(fù)3次，每個(gè)重復(fù)12皿，共36皿。對(duì)誘導(dǎo)獲得的突變體進(jìn)行烯酰嗎啉敏感性測(cè)定，明確其對(duì)烯酰嗎啉的抗性指數(shù)。

1.2.3 抗藥突變體的部分生物學(xué)特性 （1）抗藥突變體的致病力。致病力測(cè)定采用無傷菌餅接種法[3]，將供試突變體及其親本菌株分別在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 d，沿菌落邊緣制成直徑為5 mm的菌餅，貼于溫室栽培的苗齡為18～21葉的冬瓜植株基部4～6節(jié)的莖表面，接種部位用脫脂棉蘸滅菌水覆蓋保濕，每菌株接種寄主植物6株，重復(fù)3次。接種后室溫控制在25～31 ℃。接種72 h后，調(diào)查致病情況，根據(jù)各處理的病斑大小來評(píng)價(jià)各菌株的致病力差異。

（2）抗藥突變體的菌絲生長(zhǎng)速率和生長(zhǎng)量。將供試突變體及其親本菌株制成5 mm菌餅，移入PDA平板上28 ℃培養(yǎng)，分別在培養(yǎng)24、72、120 h時(shí)測(cè)定各菌株菌落直徑。此外，各菌株取4塊菌餅接入100 mL PDB液體培養(yǎng)基中，28 ℃黑暗振蕩培養(yǎng)3 d后，取菌絲凍干稱重，每處理2瓶，重復(fù)3次。

（3）pH值對(duì)抗藥突變體菌絲生長(zhǎng)的影響。用1 mol/L的HCl和NaOH將PDA培養(yǎng)基pH分別調(diào)節(jié)至4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0等9個(gè)梯度值，分別接種直徑5 mm的突變體及其親本菌株的菌餅，于28 ℃恒溫條件下培養(yǎng)，每處理重復(fù)3次，培養(yǎng)4 d后測(cè)量各菌株菌落直徑。

（4）溫度對(duì)抗藥突變體菌絲生長(zhǎng)的影響。將直徑為5 mm的突變體及其親本菌株的菌餅分別接于PDA平板上，后分別置于16、20、24、28、32、36、40 ℃下培養(yǎng)，每處理重復(fù)3次，4 d后測(cè)量各菌株菌落直徑。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 軟件進(jìn)行整理分析，采用T檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性

對(duì)分離自廣西6個(gè)地區(qū)的116株瓜類疫霉進(jìn)行烯酰嗎啉的敏感性測(cè)定，結(jié)果表明（表1），10株屬敏感菌株，占測(cè)試菌株的8.6%，106株屬中間型菌株，占測(cè)試菌株的91.4%，以中間型菌株為優(yōu)勢(shì)類群，所有樣區(qū)均未檢測(cè)到抗性菌株。不同地區(qū)來源的瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性差異較大，南寧樣區(qū)的中間型菌株所占比例最大，達(dá)97.2%（35/36），桂林樣區(qū)的中間型菌株所占比例最小，為85.7%（12/14）。比較不同寄主來源的瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性，分離自冬瓜的瓜類疫霉群體中，均可以檢測(cè)到中間型和敏感菌株，而來自于黃瓜的瓜類疫霉中，全部均為中間型菌株。

2.2 瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性基線

從116株瓜類疫霉的EC50值分布可以看出（圖1），田間瓜類疫霉菌株對(duì)烯酰嗎啉的敏感性呈單峰曲線，接近正態(tài)分布，未出現(xiàn)敏感性下降的亞群體，它們的EC50值在0.081 3～1.340 0 μg/mL之間，最大值是最小值的16倍，絕大部分菌株（98.3%）的EC50值﹤1.000 0 μg/mL，只有2株菌株 EC50超過1.000 0 μg/mL，因此可將116株菌株的平均EC50值（0.274 6±0.092 8）μg/mL作為瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性基線。

2.3 室內(nèi)抗藥突變體的獲得

通過室內(nèi)藥劑馴化，對(duì)8株敏感菌株進(jìn)行抗藥誘導(dǎo)，經(jīng)120 d 20代繼代培養(yǎng)篩選后，部分菌株的抗性指數(shù)隨誘導(dǎo)代數(shù)增多呈現(xiàn)先升后降或先降后升的現(xiàn)象，而部分菌株經(jīng)多代誘導(dǎo)后其抗藥性反而比其親本菌株降低。有3株菌株（DRGL-4，DRNN-14，DRYL-154）的抗性指數(shù)呈現(xiàn)穩(wěn)定上升（圖2）。經(jīng)誘導(dǎo)第20代后，抗藥突變體DRGL-4、DRYL-154和DRNN-14菌株的抗性指數(shù)分別為2.3、4.1和4.2，將這3株抗藥突變體與其親本菌株做進(jìn)一步的生物學(xué)特性比較（以“DR”開頭的菌株均為相應(yīng)親本菌株經(jīng)誘導(dǎo)后獲得的抗藥突變體，如菌株DRYL-154是由親本菌株YL-154經(jīng)誘導(dǎo)后獲得的抗藥突變體，下同）。通過紫外線照射誘導(dǎo)篩選，未獲得抗性指數(shù)大于2.0的突變體菌株。

2.4 抗藥突變體的生物學(xué)特性

2.4.1 抗藥突變體的致病力 接種72 h后致病力測(cè)定結(jié)果顯示（圖3），3株親本菌株（GL-4，NN-14，YL-154）及1株突變體（DRNN-14）對(duì)冬瓜莖表現(xiàn)出很強(qiáng)的致病力，均在接種部位產(chǎn)生超過40 mm病斑，其中突變株（DRNN-14）與其親本（NN-14）的致病力差異不明顯，但其致病力弱于其親本，另2株突變菌株（DRGL-4和DRYL-154）已對(duì)寄主冬瓜幾乎喪失了致病力，僅在接種的莖蔓表面產(chǎn)生微小的病斑。致病力試驗(yàn)表明，抗藥性的產(chǎn)生已在很大程度上降低了病原菌的致病力。

2.4.2 抗藥突變體的菌落生長(zhǎng)速率和菌絲干重

分別在培養(yǎng)的第24、72、120 h測(cè)量各突變體及其親本的菌落直徑，結(jié)果顯示（表2），突變體菌株DRYL-154的菌落直徑在不同時(shí)間段均比其親本菌株YL-154的大，差異達(dá)顯著水平，其余突變體菌株和對(duì)應(yīng)的親本菌株菌落直徑均沒有顯著差異。3株抗藥突變體菌株與其對(duì)應(yīng)親本菌株的菌絲干重不存在明顯差異。

2.4.3 不同pH值對(duì)抗藥突變體生長(zhǎng)的影響 各突變體及其親本在pH4.0～12.0的PDA上于28 ℃培養(yǎng)4 d，菌落直徑測(cè)定結(jié)果表明（表3），突變體DRYL-154除在pH9-11時(shí)與其親本的菌落直徑?jīng)]有差異外，其余pH培養(yǎng)條件下菌落直徑均比其親本大；突變體DRNN-14在pH為4和12兩個(gè)較極端的pH條件下，其菌落直徑明顯大于其親本菌落直徑；而突變體DRGL-4在強(qiáng)堿性（pH11和12）環(huán)境下其菌落直徑也顯著大于其親本菌落直徑。試驗(yàn)結(jié)果說明部分敏感菌株經(jīng)誘導(dǎo)后獲得的抗藥突變體比其親本菌株較耐強(qiáng)酸或強(qiáng)堿環(huán)境。

2.4.4 不同溫度對(duì)抗藥突變體生長(zhǎng)的影響 結(jié)果顯示（表4），各突變體及其親本菌株在16～36 ℃均能生長(zhǎng)，以24～32 ℃范圍內(nèi)生長(zhǎng)最快，最適宜生長(zhǎng)溫度為28 ℃。在16、20、24、28 ℃等4個(gè)溫度培養(yǎng)條件下，突變體DRYL-154的菌落直徑明顯大于其親本菌株；突變體DRNN-14在16 ℃和40 ℃兩個(gè)較極端溫度下菌落直徑明顯大于其親本菌株，其余溫度條件下菌落直徑?jīng)]有明顯的差異；而另1株突變體DRGL-4在不同溫度條件下與其親本菌株的菌落直徑相當(dāng)。試驗(yàn)研究表明，部分敏感菌株經(jīng)誘導(dǎo)后獲得的抗藥突變體在一定程度上比其親本較耐高溫或低溫環(huán)境。

3 討論與結(jié)論

研究發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)來源和不同分離寄主的瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性差異較大，如分離自黃瓜的瓜類疫霉中，沒有分離到敏感菌株，全部為中間型菌株，原因可能為黃瓜的生長(zhǎng)期較短，一年之中可以多茬種植，相應(yīng)接觸到殺菌劑的次數(shù)就會(huì)增加，相反，冬瓜的生育期較長(zhǎng)，如桂北地區(qū)一年只能種植一茬，因此接觸到殺菌劑的次數(shù)就會(huì)減少，從冬瓜上分離到的瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性就會(huì)比分離自黃瓜的敏感。因此，作者認(rèn)為瓜類疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性與廣西主要瓜類產(chǎn)區(qū)長(zhǎng)期頻繁施用烯酰嗎啉殺菌劑有密切關(guān)系，這與瓜類疫霉對(duì)甲霜靈抗藥性的研究結(jié)果[9]相一致。

評(píng)價(jià)病原對(duì)CAA類殺菌劑的抗藥性風(fēng)險(xiǎn)，目前常采用藥劑馴化、紫外線誘導(dǎo)及化學(xué)試劑誘變等方式獲得抗藥突變體。崔曉嵐等[10]通過紫外線照射辣椒疫霉菌株N-7的菌絲，共獲得了12株抗烯酰嗎啉突變體，抗性指數(shù)在16.4～132.2，通過紫外照射菌株DZ-16的游動(dòng)孢子，獲得1株抗性指數(shù)為680倍的高抗水平的突變體；但袁善奎等[12]采用紫外線誘變菌絲的方法，從l株致病疫霉敏感菌株中獲得3%突變頻率的抗烯酰嗎啉突變體，抗性倍數(shù)僅為1.5～1.9，未獲得高抗水平的突變體。Stein等[17]則采用化學(xué)誘變劑溴化乙錠和紫外光處理相結(jié)合，獲得抗性指數(shù)大于20.0的2株致病疫霉抗藥突變株，而用含藥培養(yǎng)基進(jìn)行持續(xù)性馴化篩選，選到第10代時(shí)所獲得突變體菌株的抗性指數(shù)均小于8.0；本研究對(duì)8株敏感菌株經(jīng)120 d（20代）連續(xù)在含烯酰嗎啉培養(yǎng)基上進(jìn)行馴化后，部分菌株的抗性指數(shù)隨馴化代數(shù)增多呈現(xiàn)先升后降或先降后升的現(xiàn)象，如菌株DRLZ-13第5代的抗性指數(shù)達(dá)4.1，第10代達(dá)最大值為87.3，之后第15代和第20代分別降到58.9和50.4，而部分菌株如DRGL-16經(jīng)20代誘導(dǎo)后其抗藥性反而比其親本菌株降低，表明部分瓜類疫霉菌突變體對(duì)烯酰嗎啉的抗藥性極不穩(wěn)定，僅3株突變體（DRGL-4，DRNN-14，DRYL-154）的抗性指數(shù)呈現(xiàn)穩(wěn)定上升，到第20代時(shí)其EC50值分別為0.486 8、0.385 8、0.468 9 μg/mL，但它們?nèi)詫僦虚g型菌株，未達(dá)到抗性（EC50值﹥10 μg/mL）菌株水平。在紫外線誘導(dǎo)抗藥突變體時(shí)，紫外照射95%的菌落致死時(shí)間后，經(jīng)7天培養(yǎng)，供試的5株菌株在培養(yǎng)基平板上均沒有長(zhǎng)成扇形角突變，在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行二次紫外線照射再培養(yǎng)才獲得1株抗藥突變體（DRNN-308），抗性指數(shù)僅為1.4。由此可見，通過藥劑馴化或紫外誘導(dǎo)等方法較難獲得高抗水平的瓜類疫霉突變體。

適合度是抗性菌株和親本菌株單獨(dú)存在時(shí)的生存或致病能力的反映[18]。有文獻(xiàn)報(bào)道，經(jīng)誘導(dǎo)獲得的抗藥突變體，其菌絲生長(zhǎng)率和侵染率均有所下降，適合度普遍降低，認(rèn)為致病疫霉的大田抗性發(fā)展不太可能發(fā)生[17]；部分研究結(jié)果也表明，對(duì)烯酰嗎啉抗藥性的產(chǎn)生沒有導(dǎo)致突變體致病性喪失，但在RSA平板上的生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢能力以及在離體葉盤上的產(chǎn)孢能力都較親本菌株有顯著下降，表明致病疫霉抗藥突變體的總體適合度較敏感親本有所下降，不利于抗藥群體的發(fā)展[12]。崔曉嵐等[10]的研究結(jié)果顯示，部分突變體如菌株N-13的致病力與其親本相比明顯減弱，而其他突變體與其親本菌株致病力相當(dāng)，綜合分析認(rèn)為，抗性突變體的產(chǎn)生有利于辣椒疫霉抗藥性群體的發(fā)展；本研究結(jié)果顯示，在致病力方面，抗藥突變體明顯比親本菌株減弱，部分突變體幾乎已失去對(duì)原始寄主的致病力，但在不同pH和不同溫度培養(yǎng)條件下，部分抗藥突變體菌絲生長(zhǎng)率與親本菌株相比均有不同程度的提高。

烯酰嗎啉用于疫病的防治已近30年的時(shí)間[19]，但目前仍未見從大田中檢測(cè)到抗性菌株的報(bào)道，此外，基于本研究的綜合結(jié)果，作者認(rèn)為在當(dāng)前的大田管理水平和栽培模式下，瓜類疫霉抗藥突變體群體在田間的形成和發(fā)展不大可能發(fā)生，烯酰嗎啉仍屬于低抗性風(fēng)險(xiǎn)的用于防治卵菌病害的有效殺菌劑，大田使用過程應(yīng)注意與嘧菌酯、氰霜唑、霜脲氰、霜霉威等不同作用機(jī)理的藥劑混配或輪換使用[8，20]。

參考文獻(xiàn)

[1] 桂琦一. キュウリ疫病を起因するPhytophthora melonis n. sp.について[J]. 日本植物病理學(xué)會(huì)報(bào)， 1968， 34： 167.

[2] 吳永官， 蔣雅琴， 黃思良， 等. 華南瓜類疫霉的RAPD遺傳多樣性分析[J]. 菌物學(xué)報(bào)， 2015， 34（3）： 410-423.

[3] 吳永官， 胡春錦， 黃思良， 等. 華南瓜類疫霉種群的致病力及其寄主嗜好性[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)， 2012， 39（2）： 103-108.

[4] 朱豪紅， 陳景成， 吳永官， 等. 玉林市黑皮冬瓜疫病發(fā)生影響因素分析及防治技術(shù)措施[J]. 中國植保導(dǎo)刊， 2009， 29（4）： 22-23.

[5] Davidse L C， Hofman A E， Velthuis G C M. Specific interference of metalaxyl with endogenous RNA polymerase activity isolated nuclei from Phytophthora megasperma f. sp. Medicaginis[J]. Experimental Mycology， 1983， 7： 344-361.

[6] Parra G， Ristaino J B. Resistance to mefenoxam and metalaxyl among field isolates of Phytophthora capsici causing Phytophthora blight of bell pepper[J]. Plant Disease， 2001， 85： 1 069-1 075.

[7] Shew H D. Response of Phytophthora parasitica var. nicotianae isolates to metalaxyl exposure[J]. Plant Disease， 1985， 69： 559-562.

[8] 朱桂寧， 黃福新， 馮蘭香， 等. 番茄晚疫病菌對(duì)甲霜靈、 霜脲氰和烯酰嗎啉的敏感性檢測(cè)[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2008， 41（5）： 1 355-1 365.

[9] 吳永官， 陸少峰， 黃思良， 等. 華南地區(qū)瓜類疫霉對(duì)甲霜靈的田間抗藥性[J]. 微生物學(xué)報(bào)， 2011， 51（8）： 1 078-1 086

[10] 崔曉嵐， 孟慶曉， 畢 揚(yáng)， 等. 辣椒疫霉對(duì)烯酰嗎啉的敏感性基線及室內(nèi)抗藥突變體研究[J]. 植物病理學(xué)報(bào)， 2009， 39（6）： 630-637.

[11] Chabane K， Leroux P， Bompeix G. Selection and characterization of Phytophthora parasitica mutants with ultraviolet-induced resistance to dimethomorph or metalaxyl[J]. Pestic Sci， 1993， 39： 325-329.

[12] 袁善奎， 劉西莉， 劉 亮， 等. 馬鈴薯晚疫病菌對(duì)烯酰嗎啉的敏感性基線及其室內(nèi)抗藥突變體的研究[J]. 植物病理學(xué)報(bào)， 2005， 35（6）： 545-551.

[13] Zhu S S， Liu X L， Wang Y， et al. Resistance of Pseudoperonospora cubensis to flumorph on cucumber in plastic houses[J]. Plant Pathology， 2007， 56： 967-975.

[14] 李衛(wèi)民， 晏衛(wèi)紅， 黃思良， 等. 廣西黑皮冬瓜疫病的病原菌鑒定及其生物學(xué)特性[J]. 植物病理學(xué)報(bào)， 2007， 37（3）： 333-336.

[15] Gallegly M E， Hong C X. Phytophthora： Identifying species by morphology and DNA fingerprints[M]. Minnesota： American Phytopathological Society Press， 2008： 100.

[16] 胡 燕. 煙草黑脛病菌對(duì)烯酰嗎啉的抗性風(fēng)險(xiǎn)研究[D]. 泰安： 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2007.

[17] Stein J M， Kirk W W. The generation and quantification of resistance to dimethomorph in Phytophthora infestans[J]. Plant Disease， 2004， 88（9）： 930-934.

[18] 翟明濤， 王開運(yùn)， 許 輝， 等. 抗氟吡菌胺辣椒疫霉菌株的誘導(dǎo)及其生物學(xué)特性的研究[J]. 植物病理學(xué)報(bào)， 2014， 44（1）： 88-96.

[19] Albert G， Curtze J， Drandarevski A C. Dimethomorph（CME 151）， a novel curative fungicide[J]. Proceedings of the Brighton Crop Protection Conference-Pests and Diseases， 1988， 1： 17-23.

[20] Meng Q X， Cui X L， Bi Y， et al. Biological and genetic characterization of Phytophthora capsici mutants resistant to flumorph[J]. Plant Pathology， 2011， 60： 957-966.