烏雞肽對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用

朱小語，許丹，陳曉文，馮金秋，范愛琴，蔡木易，許雅君*，潘興昌*

1(北京大學(xué) 醫(yī)學(xué)部公共衛(wèi)生學(xué)院，北京，100191) 2(中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院，北京，100027)

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烏雞肽對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用

朱小語1，許丹1，陳曉文1，馮金秋1，范愛琴1，蔡木易2，許雅君1*，潘興昌2*

1(北京大學(xué) 醫(yī)學(xué)部公共衛(wèi)生學(xué)院，北京，100191) 2(中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院，北京，100027)

摘要研究烏雞肽對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。將60只ICR雌性小鼠按體重隨機(jī)分成對(duì)照組、環(huán)磷酰胺模型組、烏雞肽低、中、高劑量組。對(duì)照組連續(xù)腹腔注射3 d，80 mg/(kg·d)生理鹽水，其余各組腹腔注射等量環(huán)磷酰胺建立免疫力低下模型，同時(shí)對(duì)照組、環(huán)磷酰胺模型組以2 g/(kg·bw)酪蛋白灌胃，烏雞肽低、中、高劑量組分別以0.5、1、2 g/(kg·bw)烏雞肽灌胃15 d。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測(cè)量小鼠體重、免疫臟器指數(shù)、胸腺、脾臟形態(tài)學(xué)變化、骨髓有核細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、T淋巴細(xì)胞亞群、細(xì)胞因子等。造模后，模型組小鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)、DNA含量、白細(xì)胞數(shù)、CD3+、CD8+均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。烏雞肽組比模型組小鼠顯著增加骨髓有核細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD3+、CD8+等，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。烏雞肽可改善環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫功能。

關(guān)鍵詞烏雞肽；生物活性肽；環(huán)磷酰胺；免疫調(diào)節(jié)

烏雞又名烏骨雞、泰和雞、武山雞、竹絲雞、絲羽烏骨雞等[1]，屬脊索動(dòng)物門，鳥綱，雞形目，雉科，雞屬[2]，是世界稀有、我國特有的藥食同源珍禽[3]。我國古籍醫(yī)書《本草綱目》、《神農(nóng)本草經(jīng)》、《食療本草》、《中藥志》[4]等均對(duì)烏雞的滋補(bǔ)強(qiáng)壯、防治疾病的作用進(jìn)行了詳細(xì)記載。烏雞營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富，因皮膚和內(nèi)臟內(nèi)含有抗氧化功能的黑色素[5]，富含蛋白質(zhì)和氨基酸，肌肉中脂肪酸含量合理，具有種類齊全且豐富的維生素和礦物質(zhì)而備受關(guān)注[6]。

生物活性肽是結(jié)構(gòu)介于蛋白質(zhì)和氨基酸之間，分子質(zhì)量小于6 000 u，具有抗氧化[7]、增強(qiáng)免疫力[8]、促進(jìn)礦物質(zhì)吸收[9]、抗炎[10]、抗菌[11]、降膽固醇[12]、抗血栓[13]等多種生理功能的肽類的統(tǒng)稱。烏雞肽作為生物活性肽的一種，是以烏雞為原料，經(jīng)酶解、分離、提純后制得的低分子肽類[14]。研究表明，烏雞肽可以通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬能力，來增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)功能[15]。然而，目前對(duì)于烏雞肽免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞免疫、體液免疫途徑并未做深入研究。為此，本實(shí)驗(yàn)通過分析烏雞肽對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠的體重、免疫臟器指數(shù)、骨髓細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓DNA含量、細(xì)胞因子、T淋巴細(xì)胞亞群、白細(xì)胞計(jì)數(shù)等指標(biāo)的影響，探討烏雞肽的免疫調(diào)節(jié)作用，為烏雞肽的進(jìn)一步開發(fā)與應(yīng)用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1受試物

烏雞肽干粉由中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院提供，是由烏雞蛋白經(jīng)酶解制得的相對(duì)分子量低于1 000 u的寡肽混合物，其氨基酸組成見表1。

表1烏雞肽的氨基酸組成

單位：g/(100g)

注：a)天冬氨酸+天冬酰胺(Asp+Asn)；b)谷氨酸+谷氨酰胺(Glu+Gln)

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)ICR健康雌性小鼠60 只，初始體重18～22 g，購自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，合格證號(hào)：SCXK(京)2009-0008。飼養(yǎng)于屏障環(huán)境，溫度范圍為(22±2) ℃，相對(duì)濕度為50%～60%，明暗交替時(shí)間為12 h∶12 h，自由進(jìn)食、飲水。

1.3儀器與試劑

美國BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀，日本光電工業(yè)株式會(huì)社全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀MEK-7222K，UNIC-UV2100紫外可見分光光度計(jì)，SPN3001F電子天平，NIKON TE2000-S倒置熒光顯微鏡，BFX5-320自動(dòng)平衡離心機(jī)，Sigma C5890酪蛋白，Sigma C0768環(huán)磷酰胺。

1.4模型制備

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1 d，正式實(shí)驗(yàn)第1天稱量小鼠初始體重，并按體重隨機(jī)分為5組，每組12只，分別為對(duì)照組、環(huán)磷酰胺模型組、烏雞肽低劑量組、烏雞肽中劑量組和烏雞肽高劑量組。對(duì)照組腹腔注射3 d，80 mg/(kg·d)生理鹽水，其余各組連續(xù)腹腔注射3 d等濃度環(huán)磷酰胺，建立免疫低下小鼠模型。并于正式實(shí)驗(yàn)第1天開始，每天給對(duì)照組、環(huán)磷酰胺模型組2 g/(kg·bw)酪蛋白灌胃，以傳統(tǒng)動(dòng)物優(yōu)質(zhì)蛋白-酪蛋白作為對(duì)照。烏雞肽低、中、高劑量組0.5、1、2 g/(kg·bw)烏雞肽灌胃，實(shí)驗(yàn)持續(xù)15 d。

1.5檢測(cè)指標(biāo)

1.5.1體重及免疫臟器指數(shù)

灌胃第15天，稱量小鼠終末體重。去眼球取血后，脊髓離斷處死小鼠，剖離胸腺和脾臟，用電子天平稱取小鼠胸腺、脾臟重量，并分別計(jì)算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。免疫臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量(g)。

1.5.2免疫臟器細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

將稱重后的胸腺和脾臟固定于10%甲醛溶液中，石蠟包埋、切片，蘇木精-伊紅染色(HE染色)，顯微鏡下觀察胸腺組織和脾臟組織的形態(tài)學(xué)變化。

1.5.3骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)及DNA含量

將小鼠處死后，剖取各組小鼠左側(cè)股骨，剔除周圍附著的肌肉和筋膜，用10%濃度鹽酸沖出小鼠骨髓液。每組6只小鼠進(jìn)行骨髓有核細(xì)胞濃度測(cè)定，在顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。另外6只小鼠進(jìn)行骨髓DNA含量測(cè)定，采用紫外吸光光度計(jì)測(cè)量260 nm波長(zhǎng)處OD值。

1.5.4外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)

將每組6只小鼠去眼球取血，全血滴入肝素抗凝管中，并用激光法對(duì)血常規(guī)五分類進(jìn)行檢測(cè)。

1.5.5外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)

取外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)后的小鼠抗凝管中全血，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群百分率，并計(jì)算相應(yīng)CD4+/CD8+比值。

1.5.6血清中細(xì)胞因子的測(cè)定

取每組6只小鼠T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)后血清20 μL，采用CBA流式液相多重蛋白定量法，用流式細(xì)胞儀測(cè)定小鼠血清中IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-17、IL-1a、IFN、GM-CSF細(xì)胞因子含量。

1.6統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)均采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析并進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)。若方差齊，則使用最小顯著差法；若方差不齊，則使用Tamhane’s T2檢驗(yàn)。P值小于0.05時(shí)，表明結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1體重和免疫臟器指數(shù)

如表2，各實(shí)驗(yàn)組間小鼠初始體重和終末體重并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且胸腺和脾臟指數(shù)各組間也并無明顯差異。

表2　烏雞肽對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠體重和

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01。

2.2免疫臟器細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

如圖1，在光學(xué)顯微鏡下對(duì)胸腺HE染色切片進(jìn)行觀察，可見對(duì)照組的胸腺皮質(zhì)、髓質(zhì)分界清晰，皮質(zhì)面積大于髓質(zhì)面積，且皮質(zhì)顏色較深。環(huán)磷酰胺模型組中皮、髓分界不清，皮質(zhì)面積縮小，且顏色變淺。烏雞肽低、中、高劑量組相對(duì)于模型組而言，脾臟皮質(zhì)顏色逐漸增深，皮質(zhì)不斷增厚，皮、髓交界清晰，且在高倍鏡下可見烏雞肽干預(yù)組淋巴細(xì)胞數(shù)量較模型組顯著增加。

如圖2，對(duì)照組脾小結(jié)發(fā)育良好，模型組脾小結(jié)相對(duì)并不完整，烏雞肽低、中、高干預(yù)組脾小結(jié)結(jié)構(gòu)完整。且在高倍鏡下，可見模型組脾臟淋巴細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組減少，且在烏雞肽干預(yù)中較模型組有不斷增加。

A-對(duì)照組;B-環(huán)磷酰胺模型組;C-烏雞肽低劑量組;D-烏雞肽中劑量組;E-烏雞肽高劑量組圖1　烏雞肽對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠胸腺組織形態(tài)學(xué)變化影響(×100)Fig.1　Effect of SFP on morphologic variations of thymus of immunosuppression mice induced by cyclophosphamide(×100)

A-對(duì)照組;B-環(huán)磷酰胺模型組;C-烏雞肽低劑量組;D-烏雞肽中劑量組;E-烏雞肽高劑量組圖2　烏雞肽對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠脾臟組織形態(tài)學(xué)變化影響(×100)Fig.2　Effect of SFP on morphologic variations of spleen of immunosuppression mice induced by cyclophosphamide(×100)

2.3骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)及DNA含量

如圖3，骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果表明，模型組與對(duì)照組相比有顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。烏雞肽低、中、高劑量組骨髓有核細(xì)胞濃度，與模型組相比有顯著增高，表明烏雞肽干預(yù)的明顯保護(hù)作用。骨髓DNA含量，如圖4，造模組骨髓DNA含量與對(duì)照組相比顯著下降，烏雞肽干預(yù)組較造模組DNA含量顯著上升，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1對(duì)照組；2環(huán)磷酰胺造膜組；3烏雞肽低劑量組；4烏雞肽中劑量組；5烏雞肽離劑量組圖3　烏雞肽對(duì)對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠股骨骨髓有核細(xì)胞濃度的影響Fig.3　Effect of Sily fowl peptide on on concentration of bone marrow cells of immunosuppression mice induced by cyclophosphamide(注：與對(duì)照組相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01)

1對(duì)照組；2環(huán)磷酰胺造膜組；3烏雞肽低劑量組；4烏雞肽中劑量組；5烏雞肽離劑量組圖4　烏雞肽對(duì)對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠股骨骨髓DNA含量的影響Fig.4　Effect of SFP on bone marrow DNA content of immunosuppression mice induced by cyclophosphamide(注：與對(duì)照組相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01)

2.4外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)

由圖5可見，小鼠給予環(huán)磷酰胺后外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著下降，烏雞肽干預(yù)后白細(xì)胞計(jì)數(shù)有明顯恢復(fù)，低、中劑量組數(shù)值較模型組增高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而烏雞肽高劑量組外周血白細(xì)胞數(shù)較模型組顯著增高。

1對(duì)照組；2環(huán)磷酰胺造膜組；3烏雞肽低劑量組；4烏雞肽中劑量組；5烏雞肽離劑量組圖5　烏雞肽對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響Fig.5　Effect of SFP on on white blood cell count of immunosuppression mice induced by cyclophosphamide(注：與對(duì)照組相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01)

2.5外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)

如表3，各試驗(yàn)組外周血CD4+T淋巴細(xì)胞百分率及CD4+/CD8+比值，與對(duì)照組和模型組相比，均無顯著差異(P>0.05)。模型組和烏雞肽低劑量組CD3+T淋巴細(xì)胞百分率顯著低于對(duì)照組，而烏雞肽中、高劑量組CD3+T淋巴細(xì)胞百分率顯著高于模型組。對(duì)CD8+T淋巴細(xì)胞百分率而言，模型組顯著低于對(duì)照組，且烏雞肽高劑量顯著高于模型組。

2.6血清中細(xì)胞因子水平的測(cè)定

如表4，血清細(xì)胞因子測(cè)定結(jié)果表明，小鼠注射環(huán)磷酰胺后，IL-2、IL-6、IL-10、IL-1a和IFN各劑量組間沒有顯著差異。模型組IL-5水平顯著較對(duì)照組增高，且烏雞肽中、高劑量組較模型組有顯著地降低。此外，GM-CSF與IL-5趨勢(shì)相近，模型組水平顯著增高，烏雞肽各劑量組較模型組明顯降低。且IL-4烏雞肽中劑量組較環(huán)磷酰胺組有明顯增高，IL-17中、高劑量組較模型組顯著降低。

表3　烏雞肽對(duì)對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠T淋巴

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01。

表4　烏雞肽對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠細(xì)胞因子的影響

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01。

3討論

烏雞肽作為一種重要的生物活性肽，具有抗自由基氧化[16]、增強(qiáng)免疫力等功效。然而，目前對(duì)于烏雞肽的增強(qiáng)免疫力功能還僅局限于對(duì)巨噬細(xì)胞影響的研究。為此，本實(shí)驗(yàn)使用目前較為常用的化學(xué)造模劑環(huán)磷酰胺，一次大劑量給藥造模，降低小鼠免疫功能，建立良好的免疫低下模型[17]。與此同時(shí)，本研究選用傳統(tǒng)優(yōu)質(zhì)動(dòng)物蛋白-酪蛋白作為對(duì)照組，評(píng)定烏雞生物活性肽的功能。

胸腺和脾臟是機(jī)體重要的淋巴器官，其功能與機(jī)體免疫息息相關(guān)。胸腺是T淋巴細(xì)胞發(fā)育成熟的器官，烏雞肽干預(yù)組與模型組相比可使皮質(zhì)增厚，皮髓交界清晰，淋巴細(xì)胞數(shù)增多。脾臟是成熟T、B淋巴細(xì)胞定居的器官，烏雞肽干預(yù)組與模型組相比，明顯增加脾臟淋巴細(xì)胞數(shù)，維持脾小結(jié)結(jié)構(gòu)的完整。表明烏雞肽干預(yù)組雖然對(duì)胸腺、脾臟指數(shù)并無明顯影響，但對(duì)于胸腺、脾臟組織形態(tài)學(xué)產(chǎn)生影響，烏雞肽可在一定程度上增加免疫抑制小鼠的胸腺淋巴細(xì)胞的數(shù)量，并促進(jìn)脾小結(jié)的發(fā)育[18]。

骨髓是機(jī)體重要的造血、免疫器官，骨髓經(jīng)分化可生成紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等各種血細(xì)胞而發(fā)揮其生理功能[19]。本實(shí)驗(yàn)觀察到環(huán)磷酰胺造模組小鼠的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓有核細(xì)胞數(shù)量以及骨髓DNA含量，與對(duì)照組相比均有明顯下降。表明，環(huán)磷酰胺可以造成骨髓抑制，并引起外周血白細(xì)胞減少。而烏雞肽各劑量組骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)均高于模型組，且烏雞肽高劑量組白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯高于模型組。表明，烏雞肽對(duì)免疫低下小鼠的骨髓抑制狀態(tài)有明顯改善。

T淋巴細(xì)胞在機(jī)體細(xì)胞免疫功能中發(fā)揮著免疫防御、免疫調(diào)節(jié)等重要作用，包括CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞。CD8+T細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，通過抑制T細(xì)胞活化和B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，進(jìn)而達(dá)到抑制機(jī)體免疫的作用。與之相反，CD4+T細(xì)胞在細(xì)胞免疫過程中起著輔助作用。實(shí)驗(yàn)觀察到，烏雞肽可顯著提高免疫低下小鼠脾臟中CD3+、CD8+T淋巴細(xì)胞水平，且烏雞肽干預(yù)組CD4+/CD8+較模型組絕對(duì)值有所降低，提示烏雞肽對(duì)免疫低下小鼠的細(xì)胞免疫具有改善功效[20]。

細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞分泌的一類具有免疫調(diào)節(jié)功能的蛋白或小分子肽類，按照分泌細(xì)胞不同，分為淋巴因子、單核因子等[21]。本實(shí)驗(yàn)中，IL-4、IL-5、IL-17為由T淋巴細(xì)胞分泌的淋巴因子，GM-CSF為巨噬細(xì)胞源性細(xì)胞因子。在環(huán)磷酰胺造模后，烏雞肽干預(yù)可使IL-4、IL-5、IL-17、GM-CSF細(xì)胞因子水平向?qū)φ战M回歸。表明烏雞肽干預(yù)，可以通過下調(diào)炎癥因子IL-17、GM-CSF等的表達(dá)，在免疫機(jī)制中發(fā)揮保護(hù)作用。

研究表明，生物活性肽較游離氨基酸更易于通過腸壁轉(zhuǎn)運(yùn)，具有增強(qiáng)生物體免疫力、促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖、促進(jìn)抗體合成以及調(diào)節(jié)細(xì)胞因子等作用[22]。本實(shí)驗(yàn)中受試物烏雞肽的小分子蛋白質(zhì)含量占96.74%，且賴氨酸、 亮氨酸和精氨酸含量較高，具有較好的免疫調(diào)節(jié)活性。綜上所述，烏雞肽可通過改善環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠骨髓造血、免疫功能，免疫臟器形態(tài)學(xué)變化，淋巴細(xì)胞、細(xì)胞因子等，來起到免疫調(diào)節(jié)作用。

4結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)初步探究了烏雞肽對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠初始、終末體重，免疫臟器指數(shù)，胸腺、脾臟組織形態(tài)變化，骨髓有核細(xì)胞數(shù)、DNA數(shù)，外周血白細(xì)胞數(shù)、以及T細(xì)胞亞群、細(xì)胞因子的影響，結(jié)果提示烏雞肽對(duì)小鼠中樞免疫系統(tǒng)和外周免疫系統(tǒng)均具有較顯著的保護(hù)作用，其分子機(jī)制有待進(jìn)一步的研究。

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Immuno-regulation effects of silky fowl peptide on immunosuppressed mice induced by cyclophosphamide

ZHU Xiao-yu1, XU Dan1, CHEN Xiao-wen1, FENG Jin-qiu1,FAN Ai-qin1, CAI Mu-yi2, XU Ya-jun1*, PAN Xing-chang2*

1(School of Public Health, Peking University Health Science Center, Beijing 100191, China) 2(China National Research Institute of Food & Fermentation Industries, Beijing 100027, China)

ABSTRACTThe objective of this paper was to investigate the immuno-regulation effects of sily fowl peptide (SFP) on mice with immunosuppression. Sixty ICR male mice were randomly divided into five groups based on their weight, including control group, cyclophosphamid model group, SFP low dose group, SFP moderate dose group and SFP high dose group. Control group was given intraperitoneal injection of saline (80 mg/kg·d), and other four groups were given equivalent dose of cyclophosphamid through intraperitoneal injection for three days to establish an immunosuppression model. At the same time, control group and model group received casein treatment (2 g/kg·bw orally once a day for 15 days) and other three groups received SFP treatment (0.5, 1 and 2 g/kg·bw orally once a day for 15 days, respectively). The body weight, immune organ index, morphologic variations of thymus and spleen, bone marrow nucleated cell count, white blood cell count, T lymphocytes and cytokine were measured at the end of the experiment. Results showed that the DNA content and the numbers of bone marrow cells, white blood cell, CD3+ and CD8+ in model group were decreased compared with control group. However, different doses of SFP significantly increased numbers of bone marrow cells, white blood cell, CD3+ and CD8+ compared with control. It could be concluded that SFP could effectively improve the immune function of immunosuppression mice induced by cyclophosphamide.

Key wordssily fowl peptide; bioactive peptide; cyclophosphamid; immune regulation

收稿日期：2015-08-29，改回日期：2015-12-20

基金項(xiàng)目：國家十二五科技支撐項(xiàng)目(2012BAD33B04-02)；國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2013AA102205-02)；科技北京百名領(lǐng)軍人才培養(yǎng)工程項(xiàng)目(Z131110000513026)；北京市科委國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技城成果惠民科技示范工程項(xiàng)目(Z131100003113010)

DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201604009

第一作者：碩士研究生(許雅君教授,潘興昌博士為通訊作者,E-mail：xuyajun@bjmu.edu.cn,E-mail：nutripan@163.com)