樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成安卓奎諾爾的條件優(yōu)化

胡永丹，　路瑞秋，　張薄博，　許贛榮，　廖祥儒*（1.江南大學(xué)工業(yè)與生物技術(shù)教育部重點實驗室，江蘇無錫214122；2.江南大學(xué)生物工程學(xué)院，江蘇無錫214122）

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樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成安卓奎諾爾的條件優(yōu)化

胡永丹1，2，路瑞秋1，2，張薄博1，2，許贛榮1，2，廖祥儒*1，2
（1.江南大學(xué)工業(yè)與生物技術(shù)教育部重點實驗室，江蘇無錫214122；2.江南大學(xué)生物工程學(xué)院，江蘇無錫214122）

摘要：安卓奎諾爾（Antroquinonol）是藥食兩用真菌樟芝子實體中的特征代謝產(chǎn)物之一，具有顯著的生理活性。然而，在普通液態(tài)發(fā)酵條件下，樟芝菌絲體無法合成Antroquinonol，作者在添加前體物質(zhì)和效應(yīng)物促進(jìn)樟芝液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的基礎(chǔ)上，對其培養(yǎng)基以及發(fā)酵條件進(jìn)行研究。結(jié)果表明，在復(fù)合添加大豆油和輔酶Q0的基礎(chǔ)上，利用單因素實驗分別對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的碳氮源的種類和發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，最終確定發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳碳源為米粉50 g/L，氮源為大豆粉6 g/L和玉米漿粉8 g/L。最適的發(fā)酵條件為初始pH 6，接種量為體積分?jǐn)?shù)10%，發(fā)酵溫度25℃，搖床轉(zhuǎn)速150 r/min，在此條件下Antroquinonol的產(chǎn)量可以達(dá)到170.34 mg/L。

關(guān)鍵詞：樟芝；安卓奎諾爾（Antroquinonol）；培養(yǎng)基；發(fā)酵條件

樟芝（Antrodia camphorata，Antrodia cinnamomea）俗稱牛樟芝、牛樟菇等，是臺灣特有的一類十分稀有的藥食兩用真菌[1-3]。樟芝在很久以前就被臺灣土著居民用作治療疾病的良藥，素有“森林紅寶石”之稱[4-6]。近年來，許多研究表明樟芝具有抗氧化、抗炎癥、抗腫瘤、保護(hù)肝臟、免疫調(diào)節(jié)和降血糖等多種功效[7-12]。

樟芝對生長環(huán)境要求苛刻，僅能寄生于臺灣特有樹種-牛樟樹（Cinnamomum kanehirai）的腐朽內(nèi)壁上，且生長極其緩慢，因此利用現(xiàn)代生物技術(shù)進(jìn)行樟芝人工培養(yǎng)已經(jīng)成為解決樟芝供需矛盾的有效方式。目前樟芝常用的3種人工培養(yǎng)方式為：椴木栽培法、固態(tài)發(fā)酵法和液態(tài)發(fā)酵法，其中液態(tài)發(fā)酵法可以在短時間內(nèi)獲得大量的菌絲體，生產(chǎn)效率高，產(chǎn)量穩(wěn)定，是一種經(jīng)濟(jì)環(huán)保的生產(chǎn)方式[13]。然而樟芝液態(tài)發(fā)酵存在的主要問題是得到的菌絲體活性成分較少，因此如何通過對樟芝液態(tài)發(fā)酵過程進(jìn)行優(yōu)化和代謝調(diào)控，縮小其在成分和功效上與野生樟芝子實體之間的差異具有重要的研究意義。

安卓奎諾爾（Antroquinonol）是2007年Lee等從樟芝固態(tài)發(fā)酵菌絲體中萃取并鑒定的一個新的化合物，也是樟芝子實體的特征代謝產(chǎn)物之一[14]。實驗表明，Antroquinonol具有抗癌、抗氧化應(yīng)激和抗炎等活性[15-17]。目前與樟芝Antroquinonol相關(guān)的研究基本上集中在其藥理活性及其藥理機(jī)制方面，對于其生物合成方面的研究較少。固態(tài)發(fā)酵方面，喻學(xué)淳等對樟芝合成Antroquinonol的條件進(jìn)行了優(yōu)化[18]。而液態(tài)發(fā)酵方面，實驗表明，在普通的液態(tài)發(fā)酵條件下，樟芝菌絲體無法合成Antroquinonol。作者分別通過添加前體物質(zhì)和效應(yīng)物，促進(jìn)樟芝液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol[19-20]，然而其產(chǎn)量還較低。在復(fù)合添加前體物質(zhì)和效應(yīng)物的基礎(chǔ)上對樟芝液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行研究，以進(jìn)一步提高液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的產(chǎn)量。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1菌種樟芝菌（Antrodia camphorata）：上海福茂食用菌有限公司提供。

1.1.2試劑葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、馬鈴薯淀粉、玉米淀粉、可溶性淀粉、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、尿素、（NH4）2SO4、MgSO4、K2HPO4、檸檬酸、輔酶Q0、對羥基苯甲酸均為國產(chǎn)分析純試劑；乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）：德國Meker公司產(chǎn)品；黃豆、玉米漿粉、米粉、大豆油市售；樟樹萃取物實驗室制備[20]。

1.1.3儀器與設(shè)備HYG-A全溫?fù)u瓶柜：太倉市強(qiáng)樂實驗設(shè)備有限公司產(chǎn)品；SHZ-D循環(huán)水式真空泵：鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品；高效液相色譜儀：Waters公司產(chǎn)品；Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）：美國賽分科技有限公司產(chǎn)品。

1.2實驗方法

1.2.1培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件樟芝（A. camphorata）接種于PDA斜面，28℃避光培養(yǎng)9 d，4℃保藏。

孢子懸浮液制備：取PDA斜面，利用無菌水洗下斜面表層的孢子，并用玻璃珠打散后鏡檢，使孢子數(shù)達(dá)到1×106個/mL。

種子培養(yǎng)基：葡萄糖20 g/L、黃豆粉2 g/L、玉米漿粉16 g/L、MgSO40.5 g/L、K2HPO40.5 g/L、檸檬酸0.5 g/L，pH自然。28℃、130 rpm培養(yǎng)4 d。

液態(tài)發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖70 g/L、黃豆粉6 g/L、玉米漿粉8 g/L、MgSO40.5 g/L、K2HPO40.5 g/L，pH自然。接種量為體積分?jǐn)?shù)15%，28℃、130 r/min培養(yǎng)15 d。

所有培養(yǎng)基均在121℃滅菌20 min。

1.2.2 Antroquinonol和生物量的測定

1）Antroquinonol含量的測定采用HPLC法測定。對于單一相液態(tài)發(fā)酵，取樟芝發(fā)酵液100 mL，抽濾得到菌體，加入少量體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇研磨5 min后定容至100 mL，50℃震蕩萃取1 h，靜置后0.22 μm濾膜過濾，進(jìn)行HPLC分析[19]。對于雙液相液態(tài)發(fā)酵，先將油相與水相完全分離后進(jìn)行處理。水相處理方式與單一相液態(tài)發(fā)酵相同。對于油相，取1 mL的油相與10倍體積的體積分?jǐn)?shù)95%乙醇混合均勻后靜置萃取，待兩相完全分離后取上層乙醇相微濾進(jìn)行HPLC分析[20]。

Antroquinonol的參標(biāo)經(jīng)提取純化之后制備得到[20]，經(jīng)過UV、HPLC-MS、NMR分析，其純度≥92%。

2）Antroquinonol參標(biāo)的制作精確稱取Antroquinonol 25 mg，乙腈溶解配制成1 mg/mL母液，再分別稀釋定容至5、10、20、40、60、80、100 mg/ L。微濾后進(jìn)行HPLC分析，Antroquinonol的參考標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

圖1　Antroquinonol標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 1 Standard curve of Antroquinonol

3）菌體生物量的測定將發(fā)酵液抽濾后，收集菌體，50℃烘干至恒重后稱重。

1.3實驗設(shè)計

1.3.1復(fù)合添加對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的影響在單獨添加前體物質(zhì)和效應(yīng)物的基礎(chǔ)上[19-20]，考慮選擇效果較好的前體物質(zhì)和效應(yīng)物進(jìn)行復(fù)合添加效果的研究。分別選擇輔酶Q0、對羥基苯甲酸、豆油和樟樹萃取液在樟芝液態(tài)發(fā)酵過程中進(jìn)行復(fù)合添加，考察不同的添加組合與單獨添加對Antroquinonol合成的影響。

1.3.2樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的培養(yǎng)基的優(yōu)化

1）碳源的優(yōu)化在樟芝液態(tài)發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基的前提下，考慮不同碳源對樟芝液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的影響。分別在培養(yǎng)基中加入70 g/L的葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、馬鈴薯淀粉、玉米淀粉、可溶性淀粉和米粉作為碳源，進(jìn)行樟芝液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的最佳碳源種類的篩選，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化碳源的添加量。其中對于馬鈴薯淀粉、玉米淀粉、可溶性淀粉和米粉，需要糊化和水解后，再進(jìn)行培養(yǎng)基的配制。

2）氮源的優(yōu)化同樣的在樟芝基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基和碳源優(yōu)化的前提下，對于氮源對樟芝液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的影響進(jìn)行探究。分別在培養(yǎng)基中加入14 g/L的大豆粉、玉米漿粉、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、硫酸銨和尿素作為氮源，考察樟芝液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol最佳氮源。

1.3.3發(fā)酵條件的優(yōu)化在對培養(yǎng)基的碳氮源進(jìn)行優(yōu)化的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對樟芝液態(tài)發(fā)酵的條件進(jìn)行優(yōu)化。分別選擇合適的初始pH（pH 2～8）、接種量（5%～25%）、發(fā)酵溫度（22～31℃）和搖床轉(zhuǎn)速（100～250 rpm）進(jìn)行實驗，確定出樟芝液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的最佳條件。

2　結(jié)果與討論

2.1復(fù)合添加對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的影響

實驗室前期的研究表明，在基礎(chǔ)液態(tài)發(fā)酵體系中，樟芝菌絲體無法合成Antroquinonol。但在液態(tài)發(fā)酵體系中分別加入相應(yīng)的前體物質(zhì)或者效應(yīng)物后，可以促使Antroquinonol的合成[19-20]。為了進(jìn)一步的提高樟芝液態(tài)發(fā)酵菌絲體合成Antroquinonol的能力，本實驗考慮復(fù)合添加前體物和效應(yīng)物，通過兩種物質(zhì)的協(xié)同作用，達(dá)到進(jìn)一步提高Antroquinonol產(chǎn)量的目的。

如表1所示，分別對前期研究中效果較好的前體物質(zhì)輔酶Q0、對羥基苯甲酸和效應(yīng)物大豆油、樟樹萃取液進(jìn)行單獨添加以及兩兩復(fù)合添加的效果進(jìn)行考察。結(jié)果表明，輔酶Q0和豆油進(jìn)行復(fù)合添加時效果最好。這可能與輔酶Q0與豆油對樟芝菌絲體合成Antroquinonol的促進(jìn)機(jī)制不同有關(guān)，輔酶Q0作為樟芝液態(tài)發(fā)酵過程中Antroquinonol合成的前體物質(zhì)在代謝過程中促進(jìn)Antroquinonol的合成，而豆油在樟芝菌絲體的生長，細(xì)胞的通透性，氧氣的供給以及Antroquinonol的萃取等方面均有一定的促進(jìn)作用，兩者的復(fù)合添加能夠?qū)τ贏ntroquinonol的合成起到協(xié)同促進(jìn)的作用。

2.2樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的培養(yǎng)基優(yōu)化

2.2.1碳源種類對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的影響碳源是微生物生長過程中重要的碳水化合物，提供菌體細(xì)胞核產(chǎn)物的碳架和菌體生命活動所需要的能量。許多真菌菌絲體能夠利用多種碳源進(jìn)行生長，因此選擇了7種常用的碳源，考察不同碳源對樟芝液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的影響，如圖2所示。

表1　復(fù)合添加對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵生物量和Antroquinonol產(chǎn)量的影響Table 1　 Effect of multiple addtitives on the biomass and production of Antroquinonol in submerged fermentation of Antrodia camphorata

圖2　不同碳源對樟芝液態(tài)發(fā)酵生物量和Antroquinonol產(chǎn)量的影響Fig. 2　 Effect of various carbon sources on the biomass and production of Antroquinonol in submerged fermentation of A. camphorata

碳源的種類對樟芝液態(tài)發(fā)酵Antroquinonol的產(chǎn)量和菌體量有明顯的影響。當(dāng)以米粉為碳源時，Antroquinonol的產(chǎn)量最高，其次為葡萄糖，玉米淀粉。其中淀粉和米粉的水解液的對樟芝的菌絲體的生長均有一定的促進(jìn)作用，比葡萄糖等單糖為碳源更有利于菌絲體的生長，且Antroquinonol的產(chǎn)量也普遍偏高。這可能是由于淀粉和米粉在配制培養(yǎng)基時已經(jīng)被水解成各種寡糖的混合物，碳源種類更豐富。而與淀粉相比較，米粉除了碳水化合物外還含有多種蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、無機(jī)鹽、氨基酸以及一些微量元素等，更能促進(jìn)樟芝液態(tài)發(fā)酵Antroquinonol的合成和菌絲體的生長，是樟芝液態(tài)發(fā)酵的最佳碳源。

2.2.2米粉添加量對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的影響在確定米粉為最佳碳源的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步的對培養(yǎng)基中米粉的含量進(jìn)行優(yōu)化，分別選擇30、40、50、60、70和80 g/L 6個水平進(jìn)行實驗。結(jié)果如圖3所示。

圖3　不同質(zhì)量濃度的米粉對樟芝液態(tài)發(fā)酵生物量和Antroquinonol產(chǎn)量的影響Fig. 3　 Effect of different concentrations of rice flour on the biomass and production of Antroquinonol in submerged fermentation of A. camphorata

可以看出當(dāng)米粉的質(zhì)量濃度為50 g/L時，Antroquinonol的產(chǎn)量最高，隨著米粉質(zhì)量濃度的增加，菌體量逐漸增大，但是Antroquinonol的產(chǎn)量卻有所降低，這可能是由于當(dāng)米粉質(zhì)量濃度太高時，大部分的營養(yǎng)都被消耗用來合成菌絲體，而沒有用于合成具有生理活性的次級代謝產(chǎn)物Antroquinonol。由實驗結(jié)果確定米粉的最佳質(zhì)量濃度為50 g/L。

2.2.3氮源種類對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的影響在確定樟芝液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基最佳碳源種類和含量的基礎(chǔ)上，考察不同氮源對合成Antroquinonol的影響，如圖4所示。

圖4　不同氮源對樟芝液態(tài)發(fā)酵生物量和Antroquinonol產(chǎn)量的影響Fig. 4　 Effect of various nitrogen sources on the biomass and production of Antroquinonol in submerged fermentation of A. camphorata

分別選擇了7種不同的有機(jī)和無機(jī)氮源進(jìn)行樟芝液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，由圖可以看出有機(jī)氮源的效果要明顯高于無機(jī)氮源，這與有機(jī)氮源含有較多的氨基酸和生長促進(jìn)因子有關(guān)。其中大豆粉和玉米漿粉的效果最好，但是比對照組中以大豆粉和玉米漿粉為復(fù)合氮源的效果稍差，說明不同種類的有機(jī)氮源對于合成Antroquinonol具有協(xié)同促進(jìn)作用，因此仍然以大豆粉和玉米漿粉作為樟芝液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的氮源。

2.3樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的發(fā)酵條件的優(yōu)化

2.3.1初始pH對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的影響在對樟芝液態(tài)發(fā)酵的培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化的前提下，進(jìn)一步的對其發(fā)酵條件進(jìn)行了探究。首先對于樟芝液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH進(jìn)行了優(yōu)化，分別調(diào)整發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH為2、3、4、5、6、7、8，實驗結(jié)果如圖所示。

圖5　初始pH對樟芝液態(tài)發(fā)酵生物量和Antroquinonol產(chǎn)量的影響Fig. 5 Effect of different initial pH values on the biomass and production of Antroquinonol in submerged fermentation of A. camphorata

如圖所示，隨著發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH的增加，菌體量和Antroquinonol的產(chǎn)量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，初始pH為5時最利于菌絲體的生長，而當(dāng)初始pH為6時，Antroquinonol的產(chǎn)量達(dá)到最高。綜合考慮樟芝液態(tài)發(fā)酵過程中的菌體量和Antroquinonol的產(chǎn)量，確定樟芝液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的最佳初始pH值為6。

2.3.2接種量對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的影響合適的接種量有利于縮短菌體的延滯期，提高活性產(chǎn)物的產(chǎn)量，因此在對樟芝液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基組成和初始pH優(yōu)化的前提下，進(jìn)一步的對其接種量進(jìn)行優(yōu)化，分別選擇接種量為體積分?jǐn)?shù)5%、10%、15%、20%和25%進(jìn)行實驗，結(jié)果如圖6所示。

圖6　接種量對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵生物量和Antroquinonol產(chǎn)量的影響Fig. 6 Effect of different inoculum concentrations on the biomass and production of Antroquinonol in submerged fermentation of A. camphorata

接種量對于樟芝液態(tài)發(fā)酵菌絲體的生長和Antroquinonol的合成具有重要影響。隨著接種量的逐漸增大，菌體量呈逐漸上升的趨勢，當(dāng)接種量為體積分?jǐn)?shù)15%時趨于穩(wěn)定。對于Antroquinonol的合成，當(dāng)接種量為體積分?jǐn)?shù)10%時，Antroquinonol的產(chǎn)量最高，達(dá)到148.27 mg/L。由于樟芝菌生長緩慢，當(dāng)接種量較小時不利于菌絲體的生長和活性產(chǎn)物的合成，而接種量過大則會導(dǎo)致發(fā)酵培養(yǎng)基的營養(yǎng)消耗過快，不利于活性產(chǎn)物的合成，因此選擇合適的接種量較為重要。結(jié)合實驗結(jié)果，確定最佳的接種量為體積分?jǐn)?shù)10%。

2.3.3發(fā)酵溫度對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的影響綜合考慮野生樟芝子實體的生長環(huán)境和一般絲狀真菌的培養(yǎng)溫度，選擇22、25、

28℃和31℃4個溫度水平來進(jìn)行樟芝菌液態(tài)發(fā)酵最佳培養(yǎng)溫度的篩選。

圖7　溫度對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵生物量和Antroquinonol產(chǎn)量的影響Fig. 7　 Effect of different temperatures on the biomass and production of Antroquinonol in submerged fermentation of A. camphorata

如圖7所示，溫度對樟芝液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol和菌絲體的生長有較大的影響，當(dāng)發(fā)酵溫度為25℃時有利于Antroquinonol的合成，而在28℃時較有利于樟芝菌絲體的生長。綜合考慮，確定樟芝液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的最佳培養(yǎng)溫度為25℃。

2.3.4搖床轉(zhuǎn)速對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的影響在樟芝液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH為6、接種量為體積分?jǐn)?shù)10%、發(fā)酵溫度為25℃的條件下，對于樟芝液態(tài)發(fā)酵的搖床轉(zhuǎn)速進(jìn)行了優(yōu)化，分別選擇100、150、200，250 r/min 4個水平進(jìn)行實驗，結(jié)果如圖8所示。

圖8　轉(zhuǎn)速對樟芝菌液態(tài)發(fā)酵生物量和Antroquinonol產(chǎn)量的影響Fig. 8　 Effect of rotational speed on the biomass and production of Antroquinonol in submerged fermentation of A. camphorata

由圖可以看出，在發(fā)酵過程中改變搖床轉(zhuǎn)速對于樟芝液態(tài)發(fā)酵的菌體生長影響不大，但是對于Antroquinonol的產(chǎn)量卻有重要的影響。不同的搖床轉(zhuǎn)速會影響發(fā)酵過程中的供氧量以及菌體形態(tài)，從而影響活性物質(zhì)的合成。當(dāng)搖床的轉(zhuǎn)速過高時不利于發(fā)酵過程中氧氣的供給，因此樟芝液態(tài)發(fā)酵合成Antroquinonol的最佳搖床轉(zhuǎn)速為150 r/min。

3　結(jié)語

對樟芝液態(tài)發(fā)酵過程中前體物質(zhì)和效應(yīng)物的復(fù)合添加進(jìn)行研究，并在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，在復(fù)合添加豆油和輔酶Q0的前提下，發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳碳源為米粉50 g/L、氮源為大豆粉6 g/L和玉米漿粉8 g/L，最適的發(fā)酵條件為初始pH 6、接種量為體積分?jǐn)?shù)10%、發(fā)酵溫度25℃、搖床轉(zhuǎn)速150 r/min，在此條件下Antroquinonol的產(chǎn)量最高可以達(dá)到170 mg/L。

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Optimization of Submerged Fermentation for the Biosynthesis of Antroquinonol from Antrodia camphorata

HU Yongdan1，2，LU Ruiqiu1，2，ZHANG Bobo1，2，XU Ganrong1，2，LIAO Xiangru*1，2
（1. Key Laboratory of Industrial Biotechnology，Ministry of Education，Jiangnan University，Wuxi 214122，China；2. School of Biotechnology，Jiangnan University，Wuxi 214122，China）

Abstract：Antroquinonol，one of the metabolites in the edible and medicinal mushroom Antrodia camphorate，is considered as an effective bioactive component. However，Antroquinonol could not be biosynthesized via conventional submerged fermentation of A. camphorata. In this study，the culture medium and submerged fermentation conditions for the biosynthesis of Antroquinonol from A. camphorata was optimized based on the addition of precursors and effectors. The carbon/nitrogen source and the culture conditions of A. camphorata in submerged fermentation were optimized by single factor experiment with soybean oil and coenzyme Q0 added. The optimal carbon source was rice flour of 50 g/L，while the nitrogen source was soybean flour of 6 g/L and corn steep powder of 8 g/L. The initial pH is pH 6 with the inoculums concentration of 10%（v/v），and the fermentation temperature is 25℃at 150 rpm，under which the production of Antroquinonol can reach 170.34book=29,ebook=34mg/L.

Keywords：Antrodia camphorata，antroquinonol，medium，fermentation conditions

*通信作者：廖祥儒（1964—），男，江西贛州人，理學(xué)博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，主要從事發(fā)酵工程研究。E-mail：13771104596@163.com

作者簡介：胡永丹（1990—），女，河南駐馬店人，發(fā)酵工程博士研究生，主要從事真菌發(fā)酵合成活性產(chǎn)物研究。E-mail：kunlan881221@126.com

基金項目：國家自然科學(xué)基金項目（21306065）；江蘇省自然科學(xué)基金（BK20130134）；江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項目；111引智計劃（111-2-06）；江蘇省現(xiàn)代發(fā)酵工業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心資助項目。

收稿日期：2015-08-13

中圖分類號：Q 815

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1673—1689（2016）01—0028—07