環(huán)氧合酶-2在口腔鱗癌發(fā)生過程中的表達(dá)和意義

高前嵩,蔣　勇

(安徽醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院口腔科,安徽 合肥　 230022)

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環(huán)氧合酶-2在口腔鱗癌發(fā)生過程中的表達(dá)和意義

高前嵩,蔣勇

(安徽醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院口腔科,安徽 合肥 230022)

摘要：目的通過研究環(huán)氧合酶-2(COX-2)在正?？谇火つ?、口腔黏膜不典型增生、口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)中表達(dá)的情況，分析所得到的結(jié)果，從而對COX-2在口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中所發(fā)揮的作用進(jìn)行探討。方法隨機(jī)選取60例口腔鱗狀細(xì)胞癌及20例口腔黏膜不典型增生組織標(biāo)本為研究對象，并選取20例正?？谇火つ?biāo)本作為對照，采用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測COX-2的表達(dá)情況，進(jìn)一步分析COX-2的表達(dá)水平與口腔黏膜病變的關(guān)系。結(jié)果正?？谇火つぶ形匆奀OX-2陽性表達(dá)，而COX-2在口腔黏膜不典型增生及口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)的陽性率分別為65.0%、78.3%，口腔鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)強(qiáng)度明顯高于口腔黏膜不典型增生組織(P=0.0217)。結(jié)論COX-2在口腔鱗狀細(xì)胞癌以及口腔黏膜不典型增生中有不同程度的高表達(dá)，COX-2可能在口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中起重要的作用。

關(guān)鍵詞：口腔鱗癌；口腔黏膜不典型增生；環(huán)氧合酶-2

口腔癌是口腔頜面部較為常見的發(fā)病率較高的一種惡性腫瘤。口腔癌的發(fā)病率仍然具有著逐漸上升的趨勢[1]?？谇击[狀細(xì)胞癌一般可以占到口腔癌的80%左右。近年來，雖然在放療、化療和手術(shù)等方面取得了一定的進(jìn)展，但是口腔鱗癌的五年生存率較低，仍然低于50%[2]。

環(huán)氧合酶(cyclooxygenase,COX)是花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素的限速酶[3]。COX一般存在著環(huán)氧合酶-1(COX-1)和環(huán)氧合酶-2(COX-2)。COX-1非常穩(wěn)定的表達(dá)于大多數(shù)正常的細(xì)胞中。而COX-2一般不怎么表達(dá)于靜息細(xì)胞中。只有當(dāng)機(jī)體受到了一些因子的相關(guān)刺激后，它才會迅速開始合成并且表達(dá)，COX-2與細(xì)胞凋亡、腫瘤發(fā)生等密切相關(guān)[4]。本研究主要是通過觀察COX-2在口腔鱗狀細(xì)胞癌、口腔黏膜不典型增生、正?？谇火つぶ械谋磉_(dá)情況，分析所得到的結(jié)果，從而對COX-2在口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展中所發(fā)揮的作用進(jìn)行分析和探討。

1臨床資料與方法

1.1病例資料隨機(jī)抽選從2014年3月—2015年3月期間本院住院手術(shù)病人的病理檔案。其中收集口腔鱗癌60例，平均年齡53.4歲；男性36例，女性24例；高分化17例、中分化38例、低分化5例。收集口腔黏膜異常增生20例，平均年齡48.5歲，男性12例，女性8例，輕度9例、中度6例、重度5例。這些病理組織都是取自手術(shù)切除，并且術(shù)后都經(jīng)過2位病理科醫(yī)生的明確診斷。這些患者術(shù)前沒有經(jīng)過任何治療。另取20例正?？谇火つぷ鰹閷φ?，來自于拔牙患者手術(shù)中切除的牙齦組織。全部標(biāo)本都經(jīng)過4%多聚甲醛磷酸緩沖液(pH=7.4)固定，石蠟包埋處理，然后3 μm連續(xù)切片。

1.2材料鼠抗人COX-2單克隆抗體購自美國Cayman公司，工作濃度為10 mg·L-1。免疫組化S-P試劑盒、DAB顯色試劑盒、即用型PBS磷酸鹽緩沖液(0.01 mol·L-1，pH=7.5)、即用型抗原修復(fù)液(Citrate枸櫞酸緩沖液，0.01 mol·L-1，pH=6.0)、防脫片劑(左旋多聚賴氨酸)、中性樹膠均購自福建邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3操作步驟(1)將石蠟切片放置于62℃烤箱中，烘烤約2 h左右，然后逐步脫蠟至水，PBS(pH=7.5)沖洗3次，每次約3 min；(2)以0.01 mol·L-1(pH=6.0)檸檬酸緩沖液高壓修復(fù)3 min,自然冷卻至室溫；PBS沖洗3次，每次3 min；(3)除去PBS液，每張切片滴加3%雙氧水，室溫下孵育10 min；PBS沖洗3次，每次3 min；(4)除去PBS液，每張切片滴加正常山羊血清封閉液，在室溫下孵育15 min后，傾去，勿洗；(5)滴加按1∶100比例稀釋的一抗工作液，置于4℃冰箱過夜；(6)PBS液沖洗3次，每次5 min，甩干；(7)每張切片滴加生物素化二抗工作液，室溫下孵育10 min后，用PBS液沖洗3次，每次5 min，甩干；(8)除去PBS液，每張切片滴加新鮮配置的DAB顯色液，在顯微鏡下觀察，顯色5～15 s；(9)蘇木精復(fù)染10 s,自來水沖洗返藍(lán)2 min,梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.4判定方法及標(biāo)準(zhǔn)在細(xì)胞質(zhì)中COX-2陽性染色的標(biāo)準(zhǔn)一般是呈現(xiàn)著棕黃色的彌漫性分布。由2位病理科醫(yī)生采用雙盲法進(jìn)行獨立檢測，一般在免疫染色最多的區(qū)域計數(shù)100個細(xì)胞，以陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)百分比和染色強(qiáng)度來進(jìn)行綜合計分：(1)著色細(xì)胞占計數(shù)細(xì)胞的百分比：≤5%為0分，>5%～≤25%為1分，>25%～≤50%為2分，>50%為3分；(2)染色強(qiáng)度：無色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，黃褐色3分。這兩類結(jié)果進(jìn)行相加，0～1分為(-)，2～3分為(+)，4～6分為(++)，6分以上為(+++)。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法使用SPSS17.0軟件包來對COX-2在正常口腔黏膜、口腔黏膜不典型增生和OSCC中表達(dá)的情況進(jìn)行處理，應(yīng)用秩和檢驗方法。若P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1免疫組化染色結(jié)果在正?？谇火つぶ形匆奀OX-2表達(dá)，在口腔黏膜不典型增生、口腔鱗癌中可見不同程度表達(dá)，見圖1～3。

圖1　正?？谇火つ?×400)

圖2　不典型增生中陽性表達(dá)(×400)

圖3　鱗癌組中陽性表達(dá)(×400)

2.2結(jié)果比較口腔黏膜不典型增生及鱗狀細(xì)胞癌的COX-2表達(dá)結(jié)果見表1。在正常的口腔黏膜上皮中無COX-2陽性表達(dá)。不典型增生組和鱗癌組在各種程度和分級間COX-2的表達(dá)均無顯著性差異(P>0.05)。不典型增生組和鱗癌組之間比較，差異有顯著性(P<0.05)。

表1　口腔黏膜不典型增生及鱗狀細(xì)胞癌COX-2表達(dá)/n

3討論

在我國，口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)常見于舌、頰、牙齦等。腫瘤形成的主要原因是腫瘤細(xì)胞的凋亡和增殖失衡[5]。在一些早期的患者中，也許沒有一些很明顯的癥狀，但是伴隨著病情的進(jìn)一步發(fā)展下去，有些患者將可能會出現(xiàn)一些病理表現(xiàn)，例如腫塊、結(jié)節(jié)、斑塊等，還有一些患者甚至出現(xiàn)了一系列癥狀，例如口齒不清、吞咽困難等，而這些將會對患者的正常生活造成一定的影響?？谇火つげ坏湫驮錾且环N較為常見的癌前病損。許多研究表明口腔黏膜的不典型增生通常會轉(zhuǎn)變?yōu)镺SCC[6]。

目前的一些研究認(rèn)為 COX-2 基因主要是定位在第1號染色體 lq25．2 ～ 25．3 上，長度大概為8.3 kb，構(gòu)成是由10個外顯子和 9個內(nèi)含子，而它的 mRNA 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物大概長度為 4.5 kb。有研究證實，像纖維蛋白原、C-反應(yīng)蛋白和白細(xì)胞介素-6 等與 COX-2 基因多態(tài)性存在明顯相關(guān)性[7]。

近年的研究發(fā)現(xiàn)：人類多種惡性腫瘤及癌前變組織中均有COX-2的高表達(dá)[8]，COX-2與腫瘤的浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[9]。已有研究證實，COX-2基因-765G/C 與哮喘、胃癌、結(jié)腸癌、食管癌等疾病存在極大相關(guān)性[10]。Peng等[11]研究了咽部鱗癌中COX-2的高表達(dá)率在 N1～N3組明顯高于N0組。Shadab等[12]對COX-2在口腔鱗癌的表達(dá)進(jìn)行研究，得出有15.9%的鱗癌組織呈現(xiàn)COX-2過表達(dá)。

口腔黏膜癌變的機(jī)制目前是臨床上一個新的研究熱點。而癌前病變轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤的過程，主要包括[13]局部微環(huán)境的變化，細(xì)胞因子間的正、負(fù)反饋網(wǎng)絡(luò)，多種因子共同作用引起細(xì)胞生長周期變化，刺激腫瘤血管生成等。根據(jù)本實驗結(jié)果，我們可以得出:COX-2不表達(dá)于正?？谇火つど掀そM織，而在口腔黏膜不典型增生和口腔鱗癌中有著不同程度的表達(dá)，所以認(rèn)為COX-2在口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中還是起著一定的作用。為了更有效的去研究COX-2在口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中的一些作用，我們還應(yīng)該進(jìn)一步的深入去探討，例如COX-2在影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制方面、COX-2抑制劑在腫瘤的化學(xué)治療方面等。因此，對于目前的研究，仍然存在著許多問題需要進(jìn)一步的探討。

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(收稿日期：2016-01-04，修回日期：2016-02-10)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.04.031