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    LAMP技術(shù)在中藥材摻假檢測方面的應用

    2016-05-14 11:02:22楊柳陳宇飛王磊張一
    吉林農(nóng)業(yè) 2016年5期
    關(guān)鍵詞:中藥材應用檢測

    楊柳 陳宇飛 王磊 張一

    摘要:針對日益嚴重的中藥材摻假事件,對環(huán)介導等溫擴增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技術(shù)在中藥材摻假檢測方面的應用進行研究,旨在為中藥摻假檢測中LAMP技術(shù)更廣泛、更深入的應用提供一定的幫助。

    關(guān)鍵詞:LAMP;中藥材;摻假;檢測;應用

    中圖分類號: R282.5 文獻標識碼: A DOI編號: 10.14025/j.cnki.jlny.2016.09.053

    “一物有謬,便性命及之”,藥材真?zhèn)尾粌H關(guān)乎治療效果,而且還關(guān)乎患者生命[1]。由于中藥材摻假事件頻發(fā),藥材安全問題日益嚴重[2],而傳統(tǒng)中藥材摻假檢測方法,如性狀鑒別、分光光度法、色譜法等,已無法滿足檢測的要求。近20年間,國內(nèi)外學者一起致力于運用生物技術(shù)對中藥進行研究,尤其是分子標記技術(shù)在中藥鑒定中的應用是目前最令人鼓舞的進展之一[3]。本文針對LAMP技術(shù)在中藥材摻假檢測方面的應用進行研究,旨在為LAMP技術(shù)在中藥材摻假檢測中更好的應用提供一定的幫助。

    1 LAMP技術(shù)介紹

    LAMP技術(shù)是Notomi等在2000年建立的一種新的體外擴增特異DNA片段的分子生物學技術(shù)[4],在65℃恒溫條件下幾十分鐘即可完成核酸擴增。

    2 LAMP技術(shù)在中藥材摻假檢測方面的應用

    2.1用于人參摻假檢測

    人參在《神農(nóng)本草經(jīng)》中被列為上品,具有大補元氣、強心固脫、安神生津的功效,自古以來,價格較昂貴,因而出現(xiàn)了許多偽品[5]。明代李時珍對沙參、薺尼亂人參析之頗詳,足見人參偽品古亦有多種。

    趙源等[6]以線粒體基因 nad1為靶基因設(shè)計特異性引物,建立了人參的LAMP檢測方法,能夠在1小時內(nèi)完成檢測,靈敏度比常規(guī)PCR 高10倍,經(jīng)驗證能夠區(qū)分人參及其近緣種,以及人參制品及其常見偽品。

    2.2用于冬蟲夏草摻假檢測

    冬蟲夏草一直被列為滋補品之首,并有“東方傳奇式珍寶”之美譽[7]。市場上常見的混淆品為有涼山蟲草、蛹草、分枝蟲草等。

    李奎等[8]將包括冬蟲夏草在內(nèi)的6種不同蟲草進行LAMP擴增,建立了冬蟲夏草的環(huán)介導等溫擴增快速檢測方法。

    2.3用于金銀花摻假檢測

    山銀花等與金銀花的原植物是近緣種,性狀特征與金銀花相似,當金銀花價格升高時,部分商家常以山銀花充當金銀花進行銷售,謀取利潤[9]。

    蔣超[10] 建立了快速、簡便、現(xiàn)場化的金銀花分子鑒別方法,當溫度為65℃時,能鑒別金銀花與其同時偽品,解決了金銀花分子鑒別中操作復雜,檢測時間長的問題。

    2.4 用于鉤吻摻假檢測

    鉤吻是馬錢科植物葫蔓藤的全草,又名斷腸草、野葛、毒根、大茶藥等,由于有劇毒,民間一直以外用為主,忌內(nèi)服,多為搗碎或研磨后調(diào)敷患處,也可以煎水洗或煙熏,具有祛風散寮、消腫止痛、攻毒殺蟲的功能[11]。

    余淑琳[12]等采用改良CTAB法提取鉤吻、金銀花和山銀花的總DNA,利用PCR反應對psbA-trnH和trnL-trnF序列進行擴增,設(shè)計鉤吻LAMP引物,從而成功鑒別出鉤吻和金銀花類藥材及其水提液。

    3 LAMP技術(shù)的優(yōu)點

    在中藥材摻假檢測方面, LAMP技術(shù)具有較強的特異性、較高的靈敏度和較快的檢測速度。趙源等[6]建立的人參的LAMP檢測方法,能夠在60分鐘內(nèi)完成檢測。綜合各文獻數(shù)據(jù),可得出結(jié)論:LAMP技術(shù)用于中藥材鑒定領(lǐng)域的基本反應可以在60~90 分鐘內(nèi)完成,如果加入環(huán)引物,則能使反應時間縮短為30~45分鐘。李奎等[8]建立的冬蟲夏草的環(huán)介導等溫擴增快速檢測方法,LAMP最低檢出限達6 pg/mL。綜合各文獻數(shù)據(jù),可得出結(jié)論:與PCR鑒定方法相比,LAMP鑒定靈敏度通常是常規(guī)PCR的10~100倍。LAMP檢測不需要復雜的儀器設(shè)備,檢測現(xiàn)場只需配一臺普通的水浴鍋,就可以完成中藥材的摻假檢測,對于農(nóng)村、基層非常適用。

    4 結(jié)語

    LAMP檢測技術(shù)適用于進行中藥材摻假的實時定性檢測。相信隨著LAMP檢測技術(shù)的發(fā)展和研究的深入,在未來,它必將在中藥材摻假檢測方面有更好的應用,也必將推動中藥材摻假檢測技術(shù)朝著更便捷、更廉價、更準確的方向發(fā)展。

    參考文獻

    [1]蔣超,黃璐琦, 袁媛,等. 金銀花中幾種分子的真?zhèn)舞b別方法比較及其研究進展[J].世界科學技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2014,16(08):1831-1837.

    [2]瘳保生,宋經(jīng)元,謝彩香,等.道地藥材產(chǎn)地溯源研究[J].中國中藥雜志,2014,39(20):3881-3888.

    [3]黃璐琦,袁媛,袁慶軍,等. 中藥分子鑒定發(fā)展中的若干問題探討[J].中國中藥雜志,2014,39(19):3663-3667.

    [4]何曉華,頓玉慧,盧力,等.環(huán)介導等溫擴增技術(shù)在腸桿菌科致病菌檢測中的研究進展[J].食品科學,2014,35(19):312-317.

    [5]尹青青.人參及其偽品鑒別[J].中國誤診學雜志,2007,7(13):3044-3045.

    [6]趙源,宋云,李明福,等.基于LAMP的人參物種鑒定技術(shù)的研究[J].植物檢疫,2015,29(05):30-34.

    [7]劉春泉,宋江峰,李大婧,等.北冬蟲夏草多糖組分的分離純化及結(jié)構(gòu)研究進展[J].食品科學,2007,28(01):370-373.

    [8]李奎,李琦,袁媛,等.環(huán)介導等溫擴增法鑒定檢測冬蟲夏草[J].中草藥,2011,42(08):1605-1608.

    [9]汪楠楠,周建理, 楊青山,等.市售金銀花及其混偽品的微性狀鑒別[J].安徽醫(yī)藥,2014,18(03): 450-452.

    [10]蔣超.中藥現(xiàn)場快速鑒別方法的建立——以金銀花為例[D].北京:中國中醫(yī)科學院,2010.

    [11]劉浩,俞昌喜.鉤吻的研究進展[J].福建醫(yī)科大學學報,2008,42(05):469-472.

    [12]余淑琳,蔣超,黃璐琦,等.基于環(huán)介導等溫擴增技術(shù)快速鑒別鉤吻[J].中藥材,2014,37(04):598.

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