健康豬中豬鏈球菌的檢測技術(shù)與建議

雷宇平

【摘要】：豬鏈球菌病是由豬鏈球菌感染引起的一種常見傳染病。豬鏈球菌的感染不僅對養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的損失，同時也對公共衛(wèi)生，尤其是相關(guān)的從業(yè)人員生命造成了危險，嚴(yán)重感染會引起患者的死亡。豬鏈球菌可以引起豬的多種疾病侵害，各個年齡段的豬。豬鏈球菌通常以敗血癥，腦膜炎，關(guān)節(jié)炎，淋巴結(jié)炎為主要特征。人類在接觸病死豬，即可感染發(fā)病。本研究針對山西省部分豬場豬鏈球菌病的流行狀況進行調(diào)查，在對送檢的病死豬和表觀健康豬，分別進行了豬鏈球菌的分離鑒定，耐藥性分析，致病性分析和血清型鑒定。調(diào)查結(jié)果顯示病死豬分離到的豬鏈球菌占11.3%，而表觀健康豬則平均帶菌率為5.14%，分離菌株的致病性不同，不同豬場菌株的耐藥性也存在著差異。本研究旨在調(diào)查健康豬中豬鏈球菌帶菌者狀況，并揭示健康豬群攜帶豬鏈球菌的公共衛(wèi)生學(xué)建議，同時為豬鏈球菌病的流行病學(xué)調(diào)查提供資料，有利于制定控制此病在豬與豬之間，豬與人之間流行的策略。

【關(guān)鍵詞】：豬鏈球菌，健康豬，毒力因子

豬鏈球菌屬于鏈球菌屬，它可以根據(jù)菌體莢膜抗原特性的不同，可以分成35個血清型。其中豬鏈球菌2型，在世界上流行最廣，致病性最強，同時能引起人的感染，是一種重要的人畜共患病病原。國內(nèi)外均有屠宰場從業(yè)人員感染豬鏈球菌的報道，也被認(rèn)為是一種職業(yè)病。豬鏈球菌2型又稱豬鏈球菌血清2型或莢膜2型豬鏈球菌。豬鏈球菌2型主要引起斷奶仔豬，關(guān)節(jié)炎，腦膜炎，敗血癥及支氣管肺炎。并且健康豬種帶菌率達到了76%，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失，也給公共衛(wèi)生帶來了威脅，從而受到了各有關(guān)方面的高度重視。此外，1型，7型，9型，14型也是引起豬感染的重要血清型。

1 檢測技術(shù)

1.1PCR鑒定

純化的疑似豬鏈球菌菌株，利用檢測谷氨酸脫氫酶基因進行豬鏈球菌菌種的鑒定，若為gdh陽性者再進行1，2，7和9型豬鏈球菌的PCR定型。以參考菌種的DNA模版為陽性對照，金黃色葡萄球菌的DNA模板為陰性對照，水為空白對照。

1.2血清學(xué)鑒定

取經(jīng)過PCR鑒定為豬鏈球菌的1，2，7，9型的分離株，豬鏈球菌1，2，7，9型參考菌株的24h Todd-Hweitt平板上的菌體，按常規(guī)方法進行玻片凝集實驗。凝集血清為豬鏈球菌1，2，7，9型標(biāo)準(zhǔn)抗血清。同時設(shè)PBS對照和菌體對照。

1.3毒力因子檢測

設(shè)計了擴增溶菌酶釋放蛋白（MRP）、細(xì)胞外蛋白因子（EF）、溶血素（sly）、莢膜多糖（cps2A）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶編碼基因（gapdh）、纖連蛋白/血纖蛋白原結(jié)合蛋白（FBPS）和orf2毒力相關(guān)基因的引物，以PCR方法對鑒定為豬鏈球菌1，2，7，9型分離株的6種毒力因子進行檢測。所用于檢測mrp、epf的引物，可擴增不同大小的mrp、epf片段，顯示mrp、epf的變化。

2 檢測結(jié)果

利用gdh特異性引物擴增出688bp目的條帶者，為豬鏈球菌。經(jīng)過凝集試驗發(fā)現(xiàn)，除FL42與豬鏈球菌1型和2型標(biāo)準(zhǔn)血清反應(yīng)均呈陽性，且菌體自身不凝集，判為1/2型，其余菌株均與PCR結(jié)果相符，僅與對應(yīng)血清型的標(biāo)準(zhǔn)抗血清發(fā)生凝集。

毒力因子譜分析發(fā)現(xiàn)，除TN63外，分離株均缺少1至4個毒力因子，分離株FL42，WZ10和BB214檢測到462bp的mrp片段，經(jīng)過BLAST發(fā)現(xiàn)此片段與西班牙豬鏈球菌分離株376的mrp3224-3685段的基因相同。

3討論

豬鏈球菌自然存在于上呼吸道，尤其是扁桃體和鼻腔中。豬群里的感染，多是因為引入腭扁桃體帶有病原體的表觀健康豬，而存在于腭桃體上的豬鏈球菌的血清型非常多變。鏈球菌的抗原結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，包括屬特異，群特意和型特異三種抗原。豬鏈球菌根據(jù)菌體莢膜抗原特性的不同，可以分成35個血清型。從病豬和健康豬分離出的豬鏈球菌血清型不同。從病豬分離的菌種的血清型主要是2型。從健康豬的分離株卻常見18，19，21型豬鏈球菌。豬鏈球菌2型有強致病力，弱致病力和無致病力菌株。從健康豬中分離到的豬鏈球菌2型中，溶菌酶釋放蛋白（MRP），胞外因子（EF），莢膜多糖均為陰性。而從發(fā)病豬分離的豬鏈球菌2型大多數(shù)為MRP+EF+表型。攜帶豬鏈球菌的健康諸是屠宰場工人感染豬鏈球菌病的潛在來源。豬鏈球菌2型可以在4℃以下存活六周，在22-25攝氏度下可以存活十二天。屠宰場引入帶菌動物，工人工作時可能通過傷口感染環(huán)境和豬體上的豬鏈球菌，引發(fā)豬鏈球菌病。

豬鏈球菌的感染不僅對養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失，同時也對公共安全衛(wèi)生尤其是相關(guān)的從業(yè)人員的生命造成了危險，嚴(yán)重感染會引起患者死亡。豬鏈球菌的血清型較多，那樣還具有較強的地域性和時間性，不同地區(qū)分離株耐藥譜不一致，即使同一地區(qū)的不同菌種也有明顯的差異，所以不同豬場的豬鏈球菌分離株的耐藥性也不同。同時豬場對抗生素的濫用，不僅導(dǎo)致治療成本的增加，而且耽誤了最佳的治療時間，是豬鏈菌病能得以不斷發(fā)生和流行，更重要的是，是豬鏈球菌等耐藥譜越來越廣，耐藥性也越來越強。深入對豬鏈球菌毒力因子的研究，和對豬鏈球菌發(fā)病機制的研究，流行病學(xué)和病原學(xué)特性，將為保護效價高的新型基因工程疫苗和有效藥物的研制提供理論依據(jù)，也對進一步的語法和檢測，有效控制傳染源和傳播途徑，具有重要的意義。同時運用多種分子技術(shù)綜合客觀的檢測和鑒定非典型的病原及其毒力，才能夠真正的揭示病原的本質(zhì)。

【參考文獻】：

[1]夏小靜，沈志強，姜世金.豬鏈球菌檢測方法的研究進展. 《中國畜牧獸醫(yī)》.2012年6期

[2]陳國強.豬鏈球菌2型檢測方法的研究及其在出入境檢疫中的應(yīng)用 .預(yù)防獸醫(yī)學(xué). 南京農(nóng)業(yè)大學(xué). 2011（學(xué)位年度）