高效液相色譜法測(cè)定酸降解右旋糖酐含量方法研究

季倩祎　余妙琴

【摘 要】建立了一種采用酸降解法測(cè)定右旋糖酐含量的方法，含量在0.5mg/ml～1.5mg/ml，線性良好A=190878C-4513.7，相關(guān)系數(shù)：R= 0.9998。平均回收率達(dá)99.9%，RSD=0.35（n=9），供試液24h穩(wěn)定。該方法用于右旋糖酐的含量測(cè)定回收率高，精密度好，可行性高。

【關(guān)鍵詞】右旋糖酐 葡萄糖 含量

右旋糖酐（dextran）又名葡聚糖， 是若干葡萄糖脫水形成的聚合物[1]，目前右旋糖酐含量的測(cè)定主要是通過(guò)高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定其不同分子量與濃度之間的關(guān)系，進(jìn)而測(cè)定其中不同分子量的含量[2，3]，對(duì)于單一分子量的右旋糖酐尚未有方法。本文結(jié)合公司產(chǎn)品（右旋糖酐為主要原料）特性建立了一種新的右旋糖酐含量測(cè)定的方法，產(chǎn)品經(jīng)硫酸破壞，右旋糖酐水解轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟荹4]，加碳酸鋇調(diào)節(jié)合適的pH，取上清液經(jīng)HPLC-示差折光檢測(cè)器分析測(cè)定，可定量測(cè)定右旋糖酐的含量，該方法回收率高，精密度好，具有一定的可行性。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1 設(shè)備及試劑

高效液相色譜儀（安捷倫）；右旋糖酐（GE）；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；濃硫酸（優(yōu)級(jí)純，國(guó)藥集團(tuán)）；碳酸鋇（分析純，國(guó)藥集團(tuán)）。

1.2 色譜條件

色譜柱型號(hào)：C18 SPE柱；柱溫：30℃；流動(dòng)相：乙腈：水（75：25，v/v）；流速：1.0ml/min。

2 方法研究

2.1 硫酸濃度的選擇

稱取右旋糖酐原料0.2g，置20mL具塞試管中，分別加入9.8ml 的0.5mol/ml、1.0 mol/ml、2.0 mol/ml硫酸溶液，沸水浴中水解2h令右旋糖酐完全水解，完全水解后加入一定量的碳酸鋇粉末中和至pH 6～7，10000r/min離心5min，取上清液，過(guò)0.45um微孔濾膜，進(jìn)液相色譜分析，結(jié)果右旋糖酐的平均回收率分別為75.4%、95.8%、95.5%，使用2.0 mol/ml硫酸溶液時(shí)因硫酸濃度大，需要的碳酸鋇量較多，使得最終的樣液較少，不易實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。故選擇1.0 mol/ml硫酸溶液水解。

2.2 水解時(shí)間的選擇

稱取右旋糖酐原料0.2g，置20mL具塞試管中，分別加入9.8ml的1.0 mol/ml硫酸溶液，沸水浴中水解1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h，完全水解后加入一定量的碳酸鋇粉末中和至pH 6～7，10000r/min離心5min，取上清液，過(guò)0.45um微孔濾膜，進(jìn)液相色譜分析，結(jié)果右旋糖酐水解時(shí)間為3h，平均回收率達(dá)最大為99.2%，，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，溶液顏色變黃，峰形變化，不易定量。故選擇水解時(shí)間為3h。

2.3線性范圍及相關(guān)系數(shù)

精密稱取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品50mg于10mL容量瓶，加入純化水制備成5mg/ml對(duì)照品溶液貯備液。再稀釋至濃度為1.5mg/mL、1.2mg/mL、1.0mg/mL、0.8mg/mL、0.5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。根據(jù)實(shí)驗(yàn)測(cè)得的峰面積與配制的對(duì)照品溶液濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。其線性方程為 y=190878x-4513.7，相關(guān)系數(shù)：R= 0.9998。

2.4 回收率實(shí)驗(yàn)

模擬產(chǎn)品組成，取右旋糖酐原料分別加入已制備好的空白試液內(nèi)，配制成三種不同濃度溶液1.2mg/ml、1.0mg/ml、0.8mg/ml各3份，按已確定的方法處理分析，計(jì)算回收率平均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差。

2.5重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品6份，制備供試品溶液，按上述方法外標(biāo)法測(cè)定，結(jié)果平均含量為標(biāo)示量的99.6%，（RSD=1.53%，n=6）。

2.6耐用性

將供試溶液分別放置2h、4h、8h、24h后，按上述方法，測(cè)定其峰面積，平均峰面積為224520，RSD=0.35%，結(jié)果表明溶液放置24h穩(wěn)定。

2.7 樣品分析

精密稱定供試品0.2g，置20mL具塞試管中，加入9.8ml 1.0mol/硫酸溶液，沸水浴中水解3h令右旋糖酐完全水解，完全水解后加入一定量的碳酸鋇粉末中和至pH 6～7，10000r/min離心5min，取上清液，過(guò)0.45um微孔濾膜，按液相色譜條件進(jìn)樣分析，并與產(chǎn)品標(biāo)示含量（50mg/ml）相比較。

3 討論

產(chǎn)品中右旋糖酐經(jīng)硫酸水解，碳酸鋇調(diào)節(jié)pH，離心取上清液經(jīng)HPLC-RID分析測(cè)定含量，方法線性良好，回收率高，精密度高，為產(chǎn)品中右旋糖酐含量的測(cè)定提供了一種可行的方法。

參考文獻(xiàn)：

[1]張洪斌，姚日生，朱慧霞.發(fā)酵法生產(chǎn)右旋糖酐的工藝研究[J].合肥工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，27（7）：783-786.

[2]趙峰輝，李新圖，陳建中等.HPLC法測(cè)定右旋糖酐20氯化鈉注射液的含量[J].論著，2013，11（22）：402-403.

[3]徐俊福，徐曙東，何海虹.高效液相色譜法測(cè)定右旋糖酐40葡萄糖注射液的含量[J].藥物鑒定，2004，13（1）：57.

[4]常國(guó)煒，林榮珍，曾練強(qiáng).右旋糖酐酸解與酶解產(chǎn)物比較[J].甘蔗糖業(yè)，2012，6：33-38.

作者簡(jiǎn)介：季倩祎（1988—），女，浙江義烏人，助理工程師，本科，畢業(yè)于河南理工大學(xué)，主要從事儀器分析工作、從事儀器分析工作6年。