HPLC同時測定辛芳鼻炎膠囊中的木蘭脂素和歐前胡素

劉建霞 童翔

摘要：目的 采用高效液相色譜法測定辛芳鼻炎膠囊中的木蘭脂素和歐前胡素中的含量。方法 HPLC條件為：CAPCELL PAK-C18 色譜柱（5μm，4.6mmI.D.×250mm）；流動相為乙腈—水（52：48）；柱溫為30℃；流速為1.0mL/min；檢測波長為230nm；結(jié)果 木蘭脂素、歐前胡素8～80μg，0.02028～0.2028μg與峰面積線性關(guān)系良好；平均回收率分別為：123.11%、103.81%。結(jié)論 本法操作簡單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為辛芳鼻炎膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞：木蘭脂素；歐前胡素；辛芳鼻炎膠囊

中圖分類號：R284 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1007-2349（2016）06-0077-02

辛芳鼻炎膠囊由辛夷、白芷等成分組成，具有發(fā)表散風(fēng)、清熱解毒、宣肺通竅的功效，臨床廣泛應(yīng)用于慢性鼻炎、鼻竇炎等癥的治療。現(xiàn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十五冊，其質(zhì)量檢測僅有白芷藥材的薄層色譜鑒別（TLC），且白芷藥材的TLC鑒別易受其它藥材的干擾，致使檢測結(jié)果不明顯。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床使用安全有效，本文用HPLC法同時測定該制劑中木蘭脂素和歐前胡素的含量，以期為建立辛芳鼻炎膠囊新的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)。

文獻(xiàn)顯示，木蘭脂素和歐前胡素[1～3]分別是該中成藥中辛夷和白芷的主要指標(biāo)成分；本文采用HPLC同時對木蘭脂素和歐前胡素2種成分定量檢測，簡化了操作程序，降低了工作量，實現(xiàn)了對該制劑中2種指標(biāo)成分含量的同時測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀系統(tǒng)（安捷倫科技公司），電子天平（島津AEL-200）；電子天平（賽多利斯BP2110-OCE），超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司KQ-500E），紫外分光光度計（TV：199011901）。

1.2 材料及試藥 木蘭脂素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110882-200605，供含量測定用，置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h以上使用）；歐前胡素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110826-201013，含量以99.6%計，供含量測定用）；辛芳鼻炎膠囊（山西華康藥業(yè)股份有限公司，產(chǎn)品批號：20111107，20130801，20130901，20131004）；甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為CAPCELL PAK-C18（5 μm，4.6 mmI.D.×250 mm）；流動相為乙腈-水（52：48）；柱溫為30℃，流速為1.0 mL/min；檢測波長為230 nm；進樣量為10μL。木蘭脂素在約8.3min出現(xiàn)色譜峰，歐前胡素在約15.3 min出現(xiàn)色譜峰，混合對照品分別在約8.3 min和15.3 min出現(xiàn)色譜峰，見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取木蘭脂素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110882-200605，供含量測定用，置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h以上使用）適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含木蘭脂素0.1 mg的溶液，即得。取歐前胡素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110826-201013，含量以99.6%計，供含量測定用）適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含歐前胡素10 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品約1.0 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加入甲醇10 mL，稱重，超聲處理（功率240W，頻率45kHz）30 min，放冷，補重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性供試品溶液的制備 按處方比例稱取缺辛夷、白芷以外的其他藥材，按制備工藝制成陰性制劑，再按2.2.2 項下的方法制備陰性供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性實驗 分別精密吸取陰性供試品溶液、混合對照品溶液、供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，依法測定。木蘭脂素和歐前胡素的保留時間分別約為8.3，15.3 min，與混合對照品溶液的色譜保留時間一致；陰性供試品溶液在該色譜條件下對測定無干擾。

2.3.2 線性關(guān)系 考察精密吸取上述混合對照品溶液2、4、6、8、10、15、20 μL分別注入液相色譜儀，測定峰面積，以進樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，木蘭脂素、歐前胡素分別在8～80 μg，0.02028～0.2028 μg范圍內(nèi)，進樣量和峰面積呈良好的線性關(guān)系，且r值分別為0.9999、0.9999。

2.3.3 精密度試驗 精密吸取同一混合對照品溶液，按2.1項下的方法連續(xù)進樣6次，分別測定木蘭脂素、歐前胡素的峰面積，峰面積RSD分別為0.2%、0.4%。

2.3.4 重復(fù)性試驗 取同一批號辛芳鼻炎膠囊（20111107）6份，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，依法測定，計算，結(jié)果木蘭脂素、歐前胡素的含量分別為3、5550、0、0851 mg/g，RSD分別為1%、1.2%。

2.3.5 中間精密度試驗 用Agilent 1100高效液相色譜儀（安捷倫科技公司），CAPCELL PAK-C18色譜柱（5 μm，4.6 mmI.D.×250 mm）；在不同人員操作下，精密吸取同一混合對照品溶液，按2.1項下的方法連續(xù)進樣6次，分別測定木蘭脂素、歐前胡素的峰面積，峰面積RSD分別為0.09%、0.6%。取同一批號辛芳鼻炎膠囊（20111107）6份，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，依法測定，計算，結(jié)果木蘭脂素、歐前胡素的含量分別為3.52906、0.08617 mg/g，RSD分別為0.7%、1.2%。

2.3.6 穩(wěn)定性考察 吸取按2.2.2項下的制備條件制備的供試品溶液，于室溫放置0、2、6、9、10、12、24 h后按2.1項下的色譜條件進行，分別測定木蘭脂素、歐前胡素的峰面積，RSD分別為0.7%、2.8%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.7 加樣回收率實驗 取同一批號辛芳鼻炎膠囊（20111107）9份，每份約0.5 g，精密稱定，分別置于錐形瓶中，取木蘭脂素對照品溶液（1.8 mg/mL），歐前胡素對照品溶液0.02028 mg/mL，分別于1，2，3號樣中精密加入0.5和1 mL，4，5，6號樣中精密加1和2 mL，7，8，9號樣中精密加1.5和3 mL精密吸取1、2、3 mL，各3按2.2.2項下方法制備供試品溶液，并按2.1項下的色譜條件，依次測定，計算平均回收率，分別為113.1%，103.8%，RSD分別為1.5%，0.9%。

2.3.8 樣品測定 取3批辛芳鼻炎膠囊，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀中，在上述相同色譜條件下記錄2種成分的峰面積值，求得3批樣品的每粒木蘭脂素的含量分別為0.91，0.90，091（mg/粒）；歐前胡素含量分別為0.02，0.02，0.02（mg/粒）。

3 討論

3.1 提取溶劑與提取時間的選擇 本實驗前期進行了樣品中有效成分的提取方法的考察，分別是加甲醇超聲1 h、加乙酸乙酯浸泡30 min超聲30 min[4]、加乙酸乙酯熱回流提取[3]、加60%甲醇浸泡過夜[5]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加甲醇超聲1 h提取的樣品含有量較其他溶劑高，且雜質(zhì)影響較小。同時按2.1項下的方法考察了加甲醇超聲20、30、40 min不同超聲時間對樣品的影響，實驗表明，超聲30 min時所測峰面積較大，超聲時間較短，且所測成分穩(wěn)定。

3.2 檢測波長的選擇 為確定木蘭脂素和歐前胡素的檢測波長，對木蘭脂素、歐前胡素對照品（均為10 μg/mL）進行紫外全波段掃描，木蘭脂素在210、222.5、230.5、254、278 nm處有較大吸收，歐前胡素在219、231、248.5、276、300.5nm處有較大吸收。取木蘭脂素和歐前胡素的混合對照品，濃度均為0.02 mg/mL，按2.1項下的方法分別考察在210、215、219、230、278 nm波長下對混合對照品的影響，發(fā)現(xiàn)在230 nm波長時，2種對照品所測的峰面積較為理想，且無雜質(zhì)峰，故選擇在230 nm波長下測定。

3.3 柱溫的設(shè)定 取木蘭脂素和歐前胡素的混合對照品，按2.1項下的方法分別考察在20、25、30、35、40℃柱溫下對混合對照品的影響，考察發(fā)現(xiàn)所測峰面積受溫度影響較小，所以柱溫設(shè)定為30℃。

3.4 流動相及洗脫方式的選擇 參閱相關(guān)文獻(xiàn)[6]，分別使用了乙腈-水不同比例的流動相進行實驗。結(jié)果表明，各流動相中主峰之間的分離度均大于1.5，且乙腈：水（52：48）流動相能更好地分離木蘭脂素與歐前胡素，且能使出峰時間提前，考察時間最短，陰性樣品對測定無干擾。

參考文獻(xiàn)：

[1]王春梅，崔新穎，李賀.白芷香豆素的抗炎作用研究[J].北華大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2006，7（4）；318.

[2]王德才，李珂，徐曉燕，等.杭白芷香豆素組分解熱鎮(zhèn)痛抗炎作用的實驗研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2005，12（11）；36.

[3]李戰(zhàn)，吳敏.辛夷和蒼耳子的臨床藥理研究進展[J].上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2004，5（24）；393.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：169.

[5]劉梅，劉新，王飛，等.RP-HPLC同時測定辛芷提取物中的木蘭脂素和歐前胡素[J].光譜實驗室，2012，3（2）.

[6]朱志峰.HPLC法測定鼻淵片中木蘭脂素的含量[J].中成藥，2012，10.

（收稿日期：2016-03-15）