超高效液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定蔬菜中7種磺胺的殘留量

黃志波 王紀(jì)陽 程雪梅 梁志剛 何健安

摘 要 為建立超高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）同時(shí)測(cè)定蔬菜中7種磺胺殘留量的方法。樣品用1%乙酸乙腈提取，以C18色譜柱分離待測(cè)物，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）離子掃描模式，外標(biāo)法進(jìn)行定量，線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。結(jié)果顯示：7種磺胺的檢出限為0.000 4～0.000 6 mg/kg，樣品添加回收率為67.5%～94.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均少于5.3%（n=6）。該方法簡(jiǎn)單快捷、定量準(zhǔn)確，可滿足多種蔬菜中7種磺胺的殘留檢測(cè)要求。

關(guān)鍵詞 超高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法 ；磺胺 ；殘留量 ；蔬菜

中圖分類號(hào) O657.752 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.06.016

Determination of 7 Sulfanilamide in Vegetables by

UPLC-MS/MS Spectrometry

HUANG Zhibo WANG Jiyang CHENG Xuemei LIAGN Zhigang HE Jian'an

（Dongguan Agricultural Products Institute of Quality Safety Supervision and Inspection，

Dongguan， Guagndong 523000）

Abstract The detectable method of 7 sulfanilamide in vegetables by UPLC-MS/MS spectrometry simultaneous has been established. The samples are initially extracted with 1% acetic acid acetonitrile. The eluate is separated by gradient elution with methanol-water solution of different ratio on C18 （100 mm×2.1 mm， 1.8 μm） column， and detected under positive multiple reactions monitoring（MRM）. The external standard calibration curves are used for quantitative analysis， the correlation coefficients is higher than 0.999. The results showed that the 7 sulfanilamide detection limits is 0.000 4～0.000 6 mg/kg. The average spiked recoveries ranged from 67.5%～94.1%， and the relative standard deviations （RSDs， n=6） is less than 5.3%. The method is quick， easy and effective， it can satisfy the demand for the determination of the 7 sulfanilamide residues in vegetables.

Keywords UPLC-MS/MS ； sulfanilamide ； residual ； vegetable

磺胺類藥物（Sulfonamides，SAs）是指具有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的一類藥物的總稱，是一類用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病的化學(xué)治療藥物。因其具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和環(huán)境持久性，容易在環(huán)境中長期殘留，對(duì)人類的健康造成較為嚴(yán)重的影響[1]。

近年來，磺胺類抗生素普遍用在養(yǎng)殖業(yè)中，這些藥物在使用后大多以其原形或者代謝物形式被排出，畜禽糞便廣泛被用作肥料而進(jìn)入到農(nóng)田，并影響農(nóng)田土壤和灌溉水。盡管磺胺在動(dòng)物性食品中污染問題的關(guān)注度很高，但在植物性食品中的污染關(guān)注不多，甚至是空白。植物性食品中磺胺污染可能會(huì)產(chǎn)生與動(dòng)物性食品中殘留超標(biāo)和農(nóng)藥殘留超標(biāo)一樣的人體健康風(fēng)險(xiǎn)。

目前，磺胺類抗生素在動(dòng)物類食品、環(huán)境中的監(jiān)測(cè)分析常有報(bào)道。涉及分析方法有高效液相色譜法（HPLC）[2-4]、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析法（GC-MS）[5]、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析法（LC-MS＼MS）[6-10]，但對(duì)于蔬菜中磺胺類藥物殘留檢測(cè)分析卻非常少，李學(xué)德等[11]撰寫高效液相色譜-熒光檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定蔬菜中3種磺胺類藥物殘留一文中提及的前處理方法要烘干磨碎，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不利于大批量蔬菜的檢測(cè)。

本研究建立了基于超高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（LC-MS/MS）法同時(shí)測(cè)定蔬菜中7種磺胺的殘留量的分析方法。該法快速、簡(jiǎn)單、實(shí)用性高，完全能滿足日常蔬菜中磺胺殘留檢測(cè)的要求。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑

Agilent Technologies 6420 Triple Quard 超高效液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀購于安捷倫公司；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)購于德國Sigma；渦旋混合器購于美國VVW公司；乙腈和甲酸均為色譜純；乙酸為分析純；實(shí)驗(yàn)室用水為Milli-Q超純水儀器制備的超純水。

磺胺嘧啶（CAS：68-35-9）、磺胺吡啶（CAS：144-83-2）、磺胺惡唑（CAS：246-67-47）、磺胺氯噠嗪（CAS：80-32-0）、磺胺異惡唑（CAS：127-69-5）、磺胺地索辛（CAS：155-91-9）、磺胺鄰二甲氧嘧啶（CAS：2447-57-6）均購于德國Dr Ehrenstorfer公司，純度均>98%。

1.1.2 儀器工作條件

色譜條件：采用安捷倫ZORNAX BONUS-RP C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），柱溫為40℃，進(jìn)樣量為1 μL；流動(dòng)相：A為乙腈，B為0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫程序見表1。

質(zhì)譜條件：動(dòng)態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（DMRM）正離子掃描模式。其他質(zhì)譜參數(shù)見表2。

1.2 方法

1.2.1 樣品提取

稱取5.00 g已均質(zhì)過的蔬菜試樣于50 mL的離心管中，加入1%乙酸乙腈15 mL，用渦旋混合器混勻30 s后，震蕩提取30 min。

1.2.2 樣品測(cè)定

將離心后樣品用濾紙過濾，濾液收集到20 mL容量瓶中，最后用水定容至20 mL，混勻后過0.2 μm微孔濾膜后，按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 儀器條件優(yōu)化分析

2.1.1 質(zhì)譜條件考察

在正離子模式下對(duì)各待測(cè)化合物單標(biāo)準(zhǔn)溶液全掃描找出母離子，SIM掃描模式優(yōu)化母離子碎裂電壓；再進(jìn)行子離子掃描，找出每個(gè)化合物所對(duì)應(yīng)的2個(gè)相對(duì)強(qiáng)響應(yīng)的特征子離子，并優(yōu)化起碰撞電壓等參數(shù)，獲得的最佳質(zhì)譜條件見表2。

2.1.2 提取劑的選擇

一般磺胺類藥物提取溶劑有乙腈、二氯甲烷，但二氯甲烷有可能會(huì)提取出脂類物質(zhì)而影響檢測(cè)效果，所以選取乙腈為提取溶劑。由于磺胺類一般為弱堿性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在乙腈中添加1%乙酸比純乙腈提取效果好（圖1）。

2.1.3 色譜柱的選擇

本試驗(yàn)采用安捷倫ZORNAX BONUS-RP C18色譜柱，對(duì)比100 mm×2.1 mm（1.8 μm）柱和50 mm×2.1 mm（1.8 μm）柱后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)50 mm柱的分離度不夠，出峰時(shí)間過快，造成多種藥物同時(shí)出峰，而采用100 mm柱分離效果好，而且峰型對(duì)稱尖銳。因此，本試驗(yàn)采用ZORNAX BONUS-RP C18 100 mm×2.1 mm（1.8 μm）色譜柱。

2.1.4 流動(dòng)相的選擇

比較以乙腈-0.1%甲酸水、甲醇-0.1%甲酸水作為流動(dòng)相對(duì)7種磺胺分離的影響，結(jié)果表明，以乙腈-0.1%甲酸水為流動(dòng)相時(shí)，各藥物有較好的分離，而且峰形和靈敏度也有所提高（圖2），因此選擇乙腈-0.1%甲酸水作為流動(dòng)相。

2.2 基質(zhì)影響、線性范圍及檢出限分析

2.2.1 基質(zhì)影響

液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法中基本都存在基質(zhì)效應(yīng)，且大多都是共提物基質(zhì)成分與目標(biāo)成分的電離競(jìng)爭(zhēng)引起的降低目標(biāo)離子強(qiáng)度，從而對(duì)檢測(cè)定量定性造成較大的影響。由于蔬菜種類多，批量樣品都找對(duì)應(yīng)蔬菜基質(zhì)校準(zhǔn)定量，則工作量大而不符合快速、簡(jiǎn)單、實(shí)用性高的要求。分別采用生菜、豆角、蘿卜、茄子代表葉菜、豆類、根莖類、茄果類蔬菜基質(zhì)，考察純?nèi)軇?biāo)樣與基質(zhì)匹配標(biāo)樣的差異，分別配置純?nèi)軇?biāo)樣與基質(zhì)匹配標(biāo)樣的相同濃度標(biāo)樣上機(jī)對(duì)比，以純標(biāo)峰面積為100%，各種蔬菜基質(zhì)標(biāo)與純標(biāo)的對(duì)比結(jié)果見圖3所示，各種蔬菜的基質(zhì)影響不大，因此，本實(shí)驗(yàn)采用純標(biāo)液外標(biāo)法定量。

2.2.2 線性關(guān)系和檢出限

在質(zhì)量濃度為0.05～0.5 mg/L范圍內(nèi)，純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)UPLC-MS/MS測(cè)定后，以標(biāo)準(zhǔn)品峰面積為縱坐標(biāo)，以待測(cè)物質(zhì)量濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)，得到各藥物的工作曲線（表3），理論定量限按照公式進(jìn)行計(jì)算。

檢出限=■。

其中，C：標(biāo)液濃度為0.05 mg/L；V：定容體積為20 mL；F：濃縮倍數(shù)為4；m：稱樣量為5.00 g；S/N：標(biāo)液濃度0.05 mg/L的信噪比。得到各種農(nóng)藥的最低檢出限結(jié)果見表3。

2.3 方法的回收率和精密度分析

由于蔬菜種類繁多，本實(shí)驗(yàn)只選取了生菜、豆角、蘿卜、茄子代表葉菜、豆類、根莖類、茄果類蔬菜進(jìn)行回收率和精密度的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。選用不含各種待測(cè)組分的生菜、豆角、蘿卜、茄子樣品進(jìn)行3個(gè)濃度水平的添加回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)處理平行重復(fù)6次，按照1.2.2的條件進(jìn)行處理測(cè)定。7種磺胺在不同蔬菜中的添加量、平均回收率和精密度結(jié)果見表4，純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)溶液色譜見圖4。

3 結(jié)論

本研究建立了蔬菜樣品中7種磺胺類藥物殘留同時(shí)測(cè)定的篩選方法，純?nèi)軇?biāo)外標(biāo)法定量，定量準(zhǔn)確，總體回收率為67.5%～94.1%，相對(duì)偏差均小于5.3%，最低檢出限為0.000 4～0.000 6 mg/kg，本方法操作快速、簡(jiǎn)單、實(shí)用性高，能滿足大批量蔬菜樣品的檢測(cè)，易于在蔬菜磺胺類藥物殘留檢測(cè)中推廣應(yīng)用。

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