美國(guó)EPA 農(nóng)藥登記殘留試驗(yàn)樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性資料要求概述

農(nóng)藥殘留樣品儲(chǔ)存穩(wěn)定性（Storage Stability，SS） 試驗(yàn)是要確定在從樣品采收到樣品分析期間， 總的農(nóng)藥有毒殘留物在初級(jí)農(nóng)產(chǎn)品或加工農(nóng)產(chǎn)品中的穩(wěn)定性或降解速率。一般情況下，農(nóng)藥殘留試驗(yàn)樣品從田間取樣后要經(jīng)過一段時(shí)間的儲(chǔ)藏后才能夠被檢測(cè)。在儲(chǔ)藏期間， 農(nóng)藥母體及其代謝物由于揮發(fā)或者發(fā)生一些水解，光解及酶促反應(yīng)等可能會(huì)發(fā)生降解。因此， 為了確定樣品中農(nóng)藥殘留物的性質(zhì)和殘留水平在取樣時(shí)與樣品分析時(shí)的差異， 需要專門開展對(duì)照試驗(yàn)來(lái)評(píng)估樣品儲(chǔ)藏對(duì)總農(nóng)藥有毒殘留物的影響。美國(guó)國(guó)家環(huán)保局（EPA） 從上世紀(jì)八十年代就開始了相關(guān)技術(shù)法規(guī)的制定工作。將美國(guó)環(huán)保局關(guān)于農(nóng)藥登記殘留儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)的有關(guān)要求進(jìn)行翻譯整理， 希望對(duì)我國(guó)制定相關(guān)技術(shù)規(guī)范有所借鑒。

1 基本要求

1. 1 需要與殘留試驗(yàn)同步開展

樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)需要與殘留登記試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。若一種農(nóng)藥/殘留物是揮發(fā)性或者不穩(wěn)定， 樣品儲(chǔ)藏時(shí)間需<30d， 則農(nóng)藥登記管理機(jī)構(gòu)可豁免其儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)。農(nóng)藥及其殘留物是否屬于揮發(fā)性或者不穩(wěn)定則取決于該農(nóng)藥的基本物理性質(zhì)和代謝試驗(yàn)研究結(jié)果。

樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性數(shù)據(jù)最好通常是作為殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)的一部分， 而不是通過獨(dú)立試驗(yàn)獲得。將已知濃度的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性樣品與殘留試驗(yàn)樣品在同一條件下儲(chǔ)藏， 可以保證試驗(yàn)物質(zhì)的同一性。若樣品在儲(chǔ)藏過程中儲(chǔ)藏條件發(fā)生變化的情況， 如冷庫(kù)或冰箱遭遇斷電等， 則儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品可以用來(lái)研究溫度升高對(duì)其殘留水平的影響。

若有可能， 管理機(jī)構(gòu)更傾向于儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)與相應(yīng)的殘留試驗(yàn)同步進(jìn)行。由于再登記時(shí)不太可能獲得所有的田間試驗(yàn)數(shù)據(jù)， 儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)則需與用于登記或再登記的新登記殘留試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。有些情況下， 樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)并非必須。若能證明農(nóng)藥殘留在基質(zhì)中是比較穩(wěn)定的， 且樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)的儲(chǔ)藏條件（特別是溫度） 與其殘留試驗(yàn)相同， 則在不同冰箱所進(jìn)行的單獨(dú)的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)是可以接受的。對(duì)于那些殘留物已知或懷疑不穩(wěn)定或易揮發(fā)的農(nóng)藥， 同步研究是必須的。對(duì)這些農(nóng)藥而言， 建議在殘留試驗(yàn)之前先進(jìn)行儲(chǔ)藏穩(wěn)定性研究， 在處理樣品冷凍前以確定合適的儲(chǔ)藏條件和最長(zhǎng)時(shí)間。

1. 2 代表作物的樣品分析

儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)可以接受作物分組。若能證明在指定的作物中殘留穩(wěn)定， 在相同試驗(yàn)條件下， 則在同組作物中的殘留也可被推斷為是穩(wěn)定的。在作物分組組合里的大組在儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)中通常是可接受的。例如根莖類蔬菜的葉可與葉菜類蔬菜（蕓苔除外） 合并。EPA至少需要5種不同作物試驗(yàn)數(shù)據(jù)。若一種農(nóng)藥在所有類型的作物上都有使用， 則建議進(jìn)行儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)的作物為一種油料種子（大豆， 或堅(jiān)果）， 一種非油谷物， 一種葉菜類蔬菜， 一種根類作物， 一種水果或果菜類蔬菜， 如柑橘或番茄。飼料玉米是一種非油谷物， 而不是一種油料種子。在這些研究中，作物部位是作為食品還是飼料都要考慮。換而言之， 殘留數(shù)據(jù)與對(duì)應(yīng)的作物部位和其最大殘留限量的建立需要考慮， 如小麥籽粒， 小麥青飼料、小麥干草。

代表性作物導(dǎo)則針對(duì)一種農(nóng)藥會(huì)用于所有的作物組。許多農(nóng)藥只應(yīng)用于這些組中的一部分作物。因此， 上述的5種作物并非一直是最合適的。因?yàn)镋PA不能為所有可能的農(nóng)藥使用組合提供導(dǎo)則， 申請(qǐng)者需要就使用哪些代表性作物進(jìn)行樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)提前進(jìn)行判斷。例如，假定一種農(nóng)藥僅僅在葫蘆科蔬菜和核果類水果上使用， 這種情況下， 則每組作物中都要選擇一種作物來(lái)進(jìn)行儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)。申請(qǐng)者可就特殊農(nóng)藥使用組合所需要選擇的試驗(yàn)作物問題與EPA進(jìn)行溝通交流。

若發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥殘留在預(yù)先選擇的某一種代表作物中不穩(wěn)定， 且這組作物的組限量還沒有制定， 則需要在該組作物中選擇其他作物進(jìn)行額外的樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)。

EPA收到的用于加工農(nóng)產(chǎn)品殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)作物主要有3類： 油料種子、谷物、水果及果菜類蔬菜（主要為柑橘、蘋果和番茄）。因?yàn)橛行┘庸まr(nóng)產(chǎn)品（如油和果汁） 基質(zhì)與其初級(jí)農(nóng)產(chǎn)品區(qū)別很大， 加工過程及儲(chǔ)藏過程需要穩(wěn)定性數(shù)據(jù)的支持。如果某種農(nóng)藥殘留已證實(shí)在上述3種作物中的1種加工過的農(nóng)產(chǎn)品中穩(wěn)定， 通常情況下不再需要額外的加工農(nóng)產(chǎn)品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，當(dāng)然其前提是儲(chǔ)藏條件相似， 而且樣品的儲(chǔ)藏時(shí)間不長(zhǎng)于代表性加工農(nóng)產(chǎn)品的儲(chǔ)藏時(shí)間。

對(duì)作物而言， 該加工農(nóng)產(chǎn)品導(dǎo)則針對(duì)那些農(nóng)藥使用于農(nóng)藥殘留可能會(huì)濃縮的加工農(nóng)產(chǎn)品的所有農(nóng)作物。對(duì)于并非使用于所有作物的農(nóng)藥， 則需要在加工農(nóng)產(chǎn)品上進(jìn)行樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)而不是上述的3種作物類型。例如， 一種農(nóng)藥只用于根類作物， 則樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)則需要在馬鈴薯或甜菜的加工部位進(jìn)行。

至于動(dòng)物性產(chǎn)品， 則通常需要支持家畜飼喂或經(jīng)皮處理研究的樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)。代表性產(chǎn)品則需要將考慮包括肌肉（牛或家禽）、肝（牛或家禽）、牛奶和蛋。若殘留在這些基質(zhì)中穩(wěn)定， 不再需要對(duì)組織（脂肪或腎） 進(jìn)行分析驗(yàn)證。

2 殘留試驗(yàn)中樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)具體要求

2. 1 一般要求

通常對(duì)殘留試驗(yàn)中所測(cè)定的總有毒殘留物的每個(gè)化合物均需要有樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)的數(shù)據(jù)。一般情況下， 這意味著在農(nóng)藥最大殘留限量中的殘留定義中包括了這些化合物。若為農(nóng)藥最大殘留限量包括的許多化合物的個(gè)案時(shí)， EPA允許使用殘留代表性化合物來(lái)進(jìn)行儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)。在遇到這類問題時(shí)， 申請(qǐng)者應(yīng)向EPA咨詢。

2. 2 測(cè)試化合物和分析方法

樣品可來(lái)源于田間施藥處理后的作物或家畜， 或者來(lái)源于添加已知濃度的每種待測(cè)物空白樣品。通常情況下，樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)的分析方法要與殘留試驗(yàn)所使用的分析方法相一致， 否則， 則需要提供與殘留試驗(yàn)分析方法等同的數(shù)據(jù)。

在儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)中的樣品同樣可來(lái)自于使用放射性標(biāo)記農(nóng)藥的代謝試驗(yàn)樣品。如果使用這些樣品， 則殘留分析應(yīng)該在殘留試驗(yàn)中所使用“冷” 分析方法或其他有效的總有毒殘留物定量方法。也就是說， 儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)不應(yīng)該只是總放射性的簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)。

若田間處理樣品中農(nóng)藥殘留沒有檢出， 或殘留試驗(yàn)低水平接近于分析方法的定量限， EPA建議在儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)中使用添加空白樣品。在儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)中的最小添加水平建議使用分析方法10倍的定量限（LOQ）， 且最小為0.1mg/kg。例如， IR-4的研究項(xiàng)目09058/啶蟲脒/草莓， 其分析方法的定量限設(shè)為L(zhǎng)OQ=0.01mg/kg， 儲(chǔ)藏穩(wěn)定性（SS） 樣品添加為10×.01mg/kg=0.1mg/kg。這將會(huì)使因?yàn)榛厥章矢叨茸儺愃鶎?dǎo)致的殘留穩(wěn)定的不確定性的可能性降為最小。如果在殘留試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)所檢測(cè)到的殘留量比上述建議的最小水平高出很多， 則儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)添加濃度最好使用相似的殘留水平。

在進(jìn)行儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)和殘留試驗(yàn)時(shí)， 都要避免分析方法的回收率和變異系數(shù)超出范圍。不管是否為使用過的方法， 當(dāng)儲(chǔ)藏穩(wěn)定性樣品從冰箱拿出進(jìn)行分析時(shí)， 每個(gè)時(shí)間點(diǎn)都要進(jìn)行新的添加回收試驗(yàn)。若儲(chǔ)藏穩(wěn)定性樣品的回收率明顯高于或低于同步添加樣品100%的回收率，允許對(duì)殘留試驗(yàn)中的殘留量進(jìn)行修正。

在總有毒殘留物多于1種化合物時(shí)， 如有母體化合物和多種代謝產(chǎn)物， 分析方法能夠分別檢測(cè)殘留物中的每種化合物， 儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品應(yīng)添加混合物。若分析方法將所有的殘留物轉(zhuǎn)化為一種基團(tuán)， 則不建議使用添加混合標(biāo)樣或使用田間處理或風(fēng)化殘留物。當(dāng)使用一種共性基團(tuán)的分析方法時(shí)， 應(yīng)該確定相關(guān)化學(xué)性質(zhì)和毒性類型的添加混合物或使用田間處理樣品的可接受性。例如， 所測(cè)定的殘留物中許多成份有相似的慢性毒性， 則按接下來(lái)使用的1種共性基團(tuán)方法添加1種混合物是可接受的。另外， 由于母體化合物氧化為相關(guān)代謝產(chǎn)物后其毒性有顯著差異的， 則使用1種共性基團(tuán)作為乙酰膽堿抑制類農(nóng)藥則不被接受。也就是說， 在出現(xiàn)后面的這種情況時(shí)， 檢測(cè)方法需要分開檢測(cè)每種代謝物。

2. 3 樣品形態(tài)要求

用于儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)的作物樣品形態(tài)， 如有勻漿， 粗切， 全部作物， 提取物等， 需要與用于殘留試驗(yàn)的樣品的儲(chǔ)藏形態(tài)保持一致。有時(shí)儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品需要反映上述幾種樣品的形態(tài)， 如田間試驗(yàn)樣品是勻漿后保存幾個(gè)月， 在最終分析前提取物再保存幾周， 樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性則需要以同樣樣品形態(tài)進(jìn)行試驗(yàn)和檢測(cè)。美國(guó)IR4充分考慮其可操作性， 一般選擇用勻漿樣品添加標(biāo)樣做儲(chǔ)藏穩(wěn)定性， 做為最壞的儲(chǔ)藏條件。

如果一個(gè)儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)不能反映最終分析前提取物的儲(chǔ)藏條件， 則整個(gè)儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)需要重做?？瞻讟悠诽崛∥锏奶砑尤襞c殘留試驗(yàn)樣品的相應(yīng)提取物的保存時(shí)間和保存條件相一致， 且以分析提取物中的殘留以確定殘留的穩(wěn)定性則是可接受的。為避免這些額外的試驗(yàn)， 申請(qǐng)者可以在進(jìn)行樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)時(shí)包括提取物的穩(wěn)定性試驗(yàn)， 除非申請(qǐng)者的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程是在提取當(dāng)天就對(duì)這些提取物進(jìn)行分析。

有時(shí)殘留試驗(yàn)樣品以完整的形態(tài)儲(chǔ)藏， 同時(shí)儲(chǔ)藏穩(wěn)定性樣品則以勻漿的形態(tài)保存。為保證樣品能均勻的添加， 必須用勻漿樣品進(jìn)行儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)。若能證明殘留數(shù)據(jù)穩(wěn)定， 由于在儲(chǔ)藏穩(wěn)定試驗(yàn)中所使用的勻漿樣品比使用整個(gè)作物更能代表更易降解的情況， 因此EPA會(huì)接受這些研究數(shù)據(jù)。勻漿過程能釋放與農(nóng)藥或代謝物發(fā)生反應(yīng)的酶或酸， 或其他化合物。在勻漿時(shí)若殘留不穩(wěn)定， EPA會(huì)基于個(gè)案進(jìn)行討論，在勻漿或采取其他措施， 如需要重復(fù)進(jìn)行樣品不同儲(chǔ)藏形態(tài)或分析到采樣時(shí)間的田間試驗(yàn)。在此結(jié)果的基礎(chǔ)上， 以決定是否需要對(duì)樣品以整個(gè)作物形態(tài)保存的殘留量損失進(jìn)行校正。影響該決定的主要因素包括勻漿樣品殘留量的損失程度和農(nóng)藥的風(fēng)險(xiǎn)狀態(tài)。

如果樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)需要持續(xù)很久，通常更傾向于對(duì)樣品進(jìn)行萃取， 去除大部分或者全部溶劑后在-20℃或更低溫度下儲(chǔ)藏提取物。這樣就減少了與具有降解農(nóng)藥能力酶接觸的機(jī)會(huì)， 進(jìn)一步保護(hù)了作物組織中“結(jié)合態(tài)” 的農(nóng)藥殘留物。這與FAO 的有關(guān)導(dǎo)則要求是相一致。

2. 4 樣品容器要求

正如許多樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)參數(shù)一樣， 樣品容器應(yīng)與殘留試驗(yàn)中的樣品容器一致。但是， EPA認(rèn)識(shí)到申請(qǐng)者標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程是將殘留試驗(yàn)樣品儲(chǔ)藏于塑料袋（便于處理和儲(chǔ)藏未勻漿的大個(gè)體樣品） 和玻璃瓶中（儲(chǔ)藏較小的， 通常是勻漿后的， 添加了總有毒殘留物的樣品）。這兩種容器的密封性可能不一樣， 這兩種材料對(duì)農(nóng)藥的吸附能力也不盡相同。但是， 只要農(nóng)藥是不易揮發(fā)的， 通常不會(huì)由于使用了不同的容器而導(dǎo)致試驗(yàn)報(bào)告被拒絕。

2. 5 儲(chǔ)藏條件要求

EPA認(rèn)識(shí)到在樣品被分析的冷凍處理之前， 殘留試驗(yàn)樣品幾乎都需要從田間轉(zhuǎn)運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室。在運(yùn)轉(zhuǎn)運(yùn)過程中， 應(yīng)該保持樣品的冷凍狀態(tài)， 如放置干冰， 或盡可能縮短轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間。樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)應(yīng)模擬殘留試驗(yàn)樣品在分析前的儲(chǔ)藏條件（溫度、濕度、光照）。儲(chǔ)藏溫度應(yīng)該為-20℃或更低。對(duì)那些已知的不穩(wěn)定農(nóng)藥， 申請(qǐng)者應(yīng)該考慮使用更低的溫度以避免或最大程度降低儲(chǔ)藏階段農(nóng)藥殘留的損失。樣品需要保存于黑暗處， 以避免光化學(xué)反應(yīng)。EPA強(qiáng)調(diào)從樣品采集時(shí)， 到樣品保存于實(shí)驗(yàn)室階段， 為保證農(nóng)藥殘留試驗(yàn)樣品的完整性所做的工作。殘留試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)描述實(shí)驗(yàn)室收到樣品前， 樣品是如何處理和保存的。

在以前的殘留試驗(yàn)中， 盡管樣品是保存于冰箱中， 但精確的儲(chǔ)藏溫度或許未知。若在再登記時(shí)使用這些數(shù)據(jù)， 則EPA會(huì)建議在兩個(gè)溫度（-20℃和-5℃） 下， 再進(jìn)行樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)， 來(lái)解決以前登記時(shí)樣品儲(chǔ)藏溫度不確定的問題。儲(chǔ)藏于較高溫度的樣品， 應(yīng)該先行分析。 若殘留在此較高溫度時(shí)也穩(wěn)定， 則儲(chǔ)藏于低溫條件下的樣品可以不用分析。

取樣頻率。EPA對(duì)儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)過程中的采樣間隔并沒有嚴(yán)格的要求。需要一個(gè)科學(xué)的時(shí)間點(diǎn)， 來(lái)確認(rèn)殘留試驗(yàn)中在最長(zhǎng)儲(chǔ)藏時(shí)間內(nèi)殘留物是穩(wěn)定的， 或者如果有必要對(duì)損失進(jìn)行校正時(shí)， 說明在每個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)殘留的損失量。為明確在樣品進(jìn)行儲(chǔ)藏時(shí)的殘留量， 一般都需要在零時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣。最小取樣次數(shù)取決于殘留的穩(wěn)定性和殘留試驗(yàn)過程中樣品的儲(chǔ)藏時(shí)間。若樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性為幾個(gè)月， 且殘留穩(wěn)定， 則只需要最終點(diǎn)和一些中間時(shí)間點(diǎn)（除零時(shí)間點(diǎn)樣品外） 的樣品數(shù)據(jù)就可以了。但如果樣品儲(chǔ)藏幾年或在幾個(gè)月的儲(chǔ)藏期間， 發(fā)現(xiàn)殘留降解明顯， 則需要更多的時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)。

若殘留的降解相對(duì)較高， 則取樣間隔可選擇0、14、28、56和112d； 若儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)， 殘留穩(wěn)定， 則建議選擇0、1、3、6、12個(gè)月作為取樣間隔。無(wú)論如何， 樣品儲(chǔ)藏時(shí)間需要包括殘留試驗(yàn)中最長(zhǎng)儲(chǔ)藏時(shí)間。

殘留試驗(yàn)儲(chǔ)藏時(shí)間范圍通常很大， 相應(yīng)的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性的試驗(yàn)不可能包括每次和每個(gè)試驗(yàn)的取樣時(shí)間。在必須對(duì)殘留損失進(jìn)行校正和兩個(gè)試驗(yàn)的取樣間隔不匹配時(shí)， EPA通常會(huì)要求開展補(bǔ)充試驗(yàn)。EPA對(duì)每個(gè)分析物每次取樣時(shí)的最小樣品數(shù)也沒有具體的要求。盡管許多情況下1個(gè)儲(chǔ)藏樣品（除了同步添加回收樣品外） 就已經(jīng)足夠， 但EPA鼓勵(lì)申請(qǐng)者額外準(zhǔn)備一些備用的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性樣品以防止發(fā)生意外情況， 如同步回收率數(shù)據(jù)不好， 或明顯異常的結(jié)果， 其他樣品的數(shù)據(jù)或許能夠?qū)@些不使用的數(shù)據(jù)提供校正。若EPA需要儲(chǔ)藏穩(wěn)定性更多處理樣品的分析結(jié)果， 或處理樣品儲(chǔ)藏結(jié)束時(shí)間比期望的更長(zhǎng)，則備份的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性樣品同樣可用。

2. 6 儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)儲(chǔ)藏時(shí)間的要求

樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)的儲(chǔ)藏時(shí)間一般應(yīng)該與殘留試驗(yàn)樣品的最長(zhǎng)儲(chǔ)藏時(shí)間相同或更長(zhǎng)。但是， 有些情況下樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)的儲(chǔ)藏時(shí)間會(huì)較相應(yīng)的殘留試驗(yàn)樣品的儲(chǔ)藏時(shí)間短。若儲(chǔ)藏時(shí)間較短， 殘留降解較慢時(shí)， 采用穩(wěn)定期儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)的外推來(lái)延長(zhǎng)儲(chǔ)藏期也是可以被認(rèn)可的。這種外推只適用于至少有6個(gè)月的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性數(shù)據(jù)， 并且除零時(shí)間點(diǎn)外， 還至少要有3個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)的樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

在一些特殊情況下， EPA會(huì)接受來(lái)自田間試驗(yàn)平行樣分析結(jié)果作為上述外推依據(jù)。有時(shí)，來(lái)自田間的處理樣品或其他殘留試驗(yàn)樣品被分成幾個(gè)部分， 一部分會(huì)被迅速分析， 如在收獲后的30d以內(nèi)， 而另外一部分為被冷凍儲(chǔ)藏。如果冷凍儲(chǔ)藏一段時(shí)間后， 冷凍樣品部分的分析結(jié)果表明與在收獲后30d分析樣品部分的殘留量一樣， 則EPA也會(huì)考慮使用這些數(shù)據(jù)來(lái)支持殘留試驗(yàn)。

但是， 當(dāng)發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥殘留在任何一種作物中不穩(wěn)定時(shí)， 前面提到的外推和平行樣一般就不再適用了。為了讓EPA接受這種特殊作物田間試驗(yàn)支持的方案， 需要提供農(nóng)藥殘留物在其他作物上穩(wěn)定的數(shù)據(jù)。

在登記階段， 會(huì)存在究竟是使用新的作物田間試驗(yàn)數(shù)據(jù)， 還是使用樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)來(lái)支持原有的田間試驗(yàn)的問題。選擇哪個(gè)試驗(yàn)則取決于兩者誰(shuí)能在較短時(shí)間內(nèi)完成。例如， 田間試驗(yàn)對(duì)某種特定作物而言或許可用，但樣品被儲(chǔ)藏了4年而且沒有可用的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性數(shù)據(jù)， 在這種情況下， 為加快登記進(jìn)程， 則EPA會(huì)要求做一個(gè)新的田間試驗(yàn)， 因?yàn)榕c4年的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性相比， 該試驗(yàn)?zāi)茉谳^短的時(shí)間內(nèi)完成。

2. 7 美國(guó)IR-4項(xiàng)目?jī)?chǔ)藏穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)實(shí)例

IR-4通常在殘留試驗(yàn)中對(duì)其所有殘留實(shí)驗(yàn)都要求儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)的數(shù)據(jù)。IR-4工作計(jì)劃書對(duì)儲(chǔ)藏穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中有詳細(xì)規(guī)定[7]， 使用添加勻漿后空白樣品添加水平為分析方法定量限的10倍（即10×LOQ） 或接近實(shí)際殘留量。如在取樣后的30d以內(nèi)完成樣品分析， 儲(chǔ)藏穩(wěn)定性可以豁免。由于IR-4通常做特色作物或小宗農(nóng)作物的殘留試驗(yàn)， 已經(jīng)掌握了大量相關(guān)農(nóng)藥的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性數(shù)據(jù)， SS儲(chǔ)藏要求時(shí)間一般0d （分析第一個(gè)樣品的當(dāng)天） 及樣品的最長(zhǎng)儲(chǔ)藏時(shí)間相同或更長(zhǎng)（分析最后樣品之后）。如IR-4掌握了充分儲(chǔ)藏穩(wěn)定性數(shù)據(jù)， 儲(chǔ)藏（SS） 0d亦可豁免。儲(chǔ)藏穩(wěn)定性（SS） 的樣品至少保存5年。

3 儲(chǔ)藏穩(wěn)定性結(jié)果的使用

如果儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明， 在殘留試驗(yàn)期間儲(chǔ)藏階段農(nóng)藥殘留有限降解， 在該研究樣品采集時(shí)的殘留量會(huì)使用校正因子進(jìn)行校正。但是， 如果在儲(chǔ)藏階段農(nóng)藥殘留降解很快， 則需要重做該項(xiàng)試驗(yàn)， 并且在樣品采收后就迅速對(duì)樣品進(jìn)行分析。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)， 當(dāng)降解率達(dá)到30%時(shí)， 會(huì)使用校正因子。當(dāng)超過該值時(shí)， EPA將進(jìn)行儲(chǔ)藏階段不穩(wěn)定化合物殘留水平包括絕對(duì)值和相對(duì)值（總有毒殘留物的百分?jǐn)?shù)） 在內(nèi)的考慮。

在使用30%的法則前， 降解程度通常會(huì)由方法的添加回收率來(lái)校正。也就是說， 某分析物儲(chǔ)藏后的殘留量應(yīng)該是去除掉同步添加回收試驗(yàn)回收率之后的結(jié)果。例如， 某儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)原始添加水平為1.0mg/kg （通過0d時(shí)分析， 且由同步添加回收率75%的回收率進(jìn)行校正）。在儲(chǔ)藏一段時(shí)間后， 樣品分析結(jié)果為0.63mg/kg，有近37%的損失。若同步添加回收率為70%， 則儲(chǔ)藏樣品中的校正殘留量為0.63mg/kg/0.70 =0.9mg/kg。因此， 校正后的儲(chǔ)藏?fù)p失率為10%，或者儲(chǔ)藏樣品的校正回收率為90%。不管儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)階段的損失程度如何，申請(qǐng)者都不應(yīng)該報(bào)告校正后的農(nóng)藥殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)。這些校正應(yīng)該由EPA來(lái)進(jìn)行。該校正適用于儲(chǔ)藏?fù)p失和分析方法回收率。但是， 若申請(qǐng)者能夠完整的提供包括沒有校正的殘留量， 校正因子和校正后的結(jié)果的報(bào)告， 則EPA能夠接受校正因子和報(bào)告校正的結(jié)果。

代謝研究中儲(chǔ)藏穩(wěn)定性要求。EPA有權(quán)對(duì)在植物和動(dòng)物代謝研究中樣品采集， 準(zhǔn)備和儲(chǔ)藏樣品過程中關(guān)于樣品完整保存做出具體要求。由于對(duì)殘留物檢測(cè)前的樣品添加比較困難和代謝研究需要時(shí)間長(zhǎng)， 目前EPA的觀點(diǎn)是在樣品采收后的4～6個(gè)月進(jìn)行樣品分析， 則一般不需要儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)， 除非有證據(jù)表明， 在試驗(yàn)階段分析部位的基質(zhì)和提取物在合適的儲(chǔ)藏條件會(huì)阻止農(nóng)藥殘留物的降解。

如果在樣品采集后的4～6月內(nèi)不能完成代謝試驗(yàn)， 則需要提供在樣品采集到最后分析階段農(nóng)藥殘留沒有變化的證明。這些試驗(yàn)可在該研究的初期和完成時(shí)， 由對(duì)代表性基質(zhì)進(jìn)行分析來(lái)進(jìn)行。這些分析應(yīng)該證明在試驗(yàn)時(shí)標(biāo)記的農(nóng)藥殘留物基本沒有變化。若發(fā)現(xiàn)有變化， 如HPLC典型峰或薄層色譜點(diǎn)的消失， 則需要從樣品采集到分析期間選一段較短時(shí)間進(jìn)行額外的分析和其他試驗(yàn)。

4 試驗(yàn)報(bào)告的有關(guān)要求

儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)的報(bào)告應(yīng)該包括如下具體描述：

儲(chǔ)藏的樣品， 未加工或加工的； 試驗(yàn)化合物； 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和儲(chǔ)藏條件， 如冰箱溫度、儲(chǔ)藏時(shí)間、容器類型等； 殘留分析方法和儀器； 儲(chǔ)藏穩(wěn)定性結(jié)果和數(shù)據(jù)報(bào)告； 統(tǒng)計(jì)分析； 為了保證這些操作的有效性所采取的質(zhì)量控制措施或預(yù)防措施， 包括以上每步的具體日期。

根據(jù)EPA的要求， 申請(qǐng)者描述試驗(yàn)樣品是如何準(zhǔn)備的， 如粗分、勻漿， 所使用的具體容器等都是非常重要的。如與在殘留試驗(yàn)中樣品制備或容器上有差異， 需要明確指出， 提供有價(jià)值的研究數(shù)據(jù)和依據(jù)。若已知， 應(yīng)提供相應(yīng)殘留試驗(yàn)的主記錄識(shí)別號(hào)。

當(dāng)多個(gè)重復(fù)樣品在同一時(shí)間點(diǎn)分析時(shí)， 每個(gè)樣品不能只報(bào)告平均值， 所有檢測(cè)值都應(yīng)該列在報(bào)告中， 包括用同步添加回收率校正的結(jié)果報(bào)告， 如作物、分析物、殘留量、儲(chǔ)藏時(shí)間、同步添加回收率、儲(chǔ)藏樣品、儲(chǔ)藏樣品及校正回收率。

試驗(yàn)報(bào)告的格式和內(nèi)容也非常重要。要有標(biāo)題頁(yè)或封面頁(yè)。標(biāo)題頁(yè)和其他與本研究相關(guān)的文件要求， 如數(shù)據(jù)提交要求和機(jī)密數(shù)據(jù)請(qǐng)求程序。報(bào)告除了目錄， 還要有摘要或前言。這部分內(nèi)容應(yīng)該包括試驗(yàn)的目的、前言（包括儲(chǔ)藏驗(yàn)證數(shù)據(jù)簡(jiǎn)表）、樣品制備和添加回收、儲(chǔ)藏和取樣過程、分析過程、計(jì)算方法。

試驗(yàn)材料部分要包括分析物的描述。如果使用了添加回收， 需要描述分析物的化學(xué)名、通用名、實(shí)驗(yàn)室名、CAS名， 還有純度的檢測(cè)/檢查（所有列于參考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)表中的母體和其他任何相關(guān)代謝物） 和標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備。如果使用了被風(fēng)化的殘留樣品， 要確定在零時(shí)間點(diǎn)（定義為儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)開始的時(shí)間） 樣品中分析物的性質(zhì)和量。申請(qǐng)者認(rèn)為合適的、且與提供在儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)確認(rèn)試驗(yàn)過程中使用分析物質(zhì)的完整的、詳細(xì)的描述和鑒定相關(guān)的其他相關(guān)信息。

還要有供試作物信息。在儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)中所使用到的初級(jí)農(nóng)產(chǎn)品， 如作物、品種或變種及植物學(xué)名， 特定的作物部位或加工農(nóng)產(chǎn)品的識(shí)別。儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)中初級(jí)農(nóng)產(chǎn)品樣品的生長(zhǎng)階段， 一般條件， 如未成熟或成熟， 綠或熟， 新鮮或干等， 農(nóng)產(chǎn)品的大小等。儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)前的初級(jí)農(nóng)產(chǎn)品的處理或準(zhǔn)備或樣品的加工， 如修剪、清潔或其他殘留去除方法， 混合、濃縮、切或提取等信息描述。

樣品識(shí)別號(hào)， 樣品來(lái)源、田間試驗(yàn)號(hào)、空白或風(fēng)化殘留樣品、編碼或標(biāo)簽信息， 應(yīng)該與在樣品采收時(shí)所給定的代碼和標(biāo)簽信息一致。申請(qǐng)者認(rèn)為合適的、且與提供所使用初級(jí)農(nóng)產(chǎn)品完整的、詳細(xì)的描述和鑒定相關(guān)的其他相關(guān)信息。

方法的描述， 如試驗(yàn)設(shè)計(jì)， 試驗(yàn)作物數(shù)據(jù)、分析數(shù)量、試驗(yàn)添加水平、每個(gè)化合物試驗(yàn)水平的重復(fù)數(shù)、采樣間隔、供試作物對(duì)不同基質(zhì)的代表性等； 試驗(yàn)過程， 如添加過程， 如果用到化合物添加到分析物質(zhì)中的具體方式； 儲(chǔ)藏條件， 應(yīng)該提供溫度、溫度、光照、容器類型及尺寸、作物形態(tài)（提提物或浸提等）、樣品大小及重量、儲(chǔ)藏時(shí)間等參數(shù)； 取樣， 描述在零時(shí)間和后續(xù)正常取樣的取樣過程， 研究持續(xù)時(shí)間應(yīng)與相應(yīng)的田間采集的殘留試驗(yàn)樣品的儲(chǔ)藏

時(shí)間相當(dāng)； 應(yīng)提供樣品制備時(shí)間（浸提或提取等）、添加或檢測(cè)風(fēng)化殘留（零時(shí)間） 的性質(zhì)和量、定期取樣間隔、儲(chǔ)藏結(jié)束、殘留分析； 要有殘留分析方法， 應(yīng)提供標(biāo)題、名稱、時(shí)間和來(lái)源（科學(xué)文獻(xiàn)或公司報(bào)告等）， 如果與殘留試驗(yàn)所使用的方法相同， 則交叉引用分析方法部分的數(shù)據(jù)。

若使用的方法與田間試驗(yàn)樣品殘留分析方法和加工農(nóng)產(chǎn)品方法一樣， 討論與此方法的偏離（試劑、規(guī)程、設(shè)備、操作參數(shù)等）。

還要有具體原理和分析步驟， 如提取或凈化、衍生化、檢測(cè)， 包括所作的任何修改， 化合物檢測(cè)， 使用技術(shù)的確認(rèn)等， 提取效率。

還應(yīng)提供儀器使用和操作參數(shù)， 如檢測(cè)器的構(gòu)造及模式、類型及種類、柱子的填料及尺寸、載氣、流速、溫度、電腦、檢測(cè)限和靈敏度、計(jì)算過程等。

還要有對(duì)具有特別預(yù)防要求的試劑或程序步驟的說明， 如避免安全和健康傷害。

還要提交分析時(shí)間要求， 如執(zhí)行一個(gè)樣品或完整的整個(gè)分析過程， 包括分析步驟。

還要提交殘留量計(jì)算和回收率的詳細(xì)計(jì)算過程。申請(qǐng)者認(rèn)為合適的、且與提供所使用分析方法和殘留試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算相關(guān)信息。

試驗(yàn)報(bào)告還要有結(jié)果與討論。殘留結(jié)果要包括原始數(shù)據(jù)、稀釋因子、峰高及面積、所使用的方法校正因子、公式及標(biāo)準(zhǔn)曲線、理論及檢測(cè)的濃度、回收水平（范圍）、回收率與儲(chǔ)藏時(shí)間（降解數(shù)據(jù)）、儲(chǔ)藏研究時(shí)間的合理性等；統(tǒng)計(jì)分析要包括對(duì)原始數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)測(cè)驗(yàn)進(jìn)行描述； 質(zhì)量控制以確保儲(chǔ)藏穩(wěn)定性有效的控制措施或預(yù)防措施； 申請(qǐng)者認(rèn)為合適的、且與提供與儲(chǔ)藏穩(wěn)定性有效相關(guān)信息的完整、詳細(xì)描述。

試驗(yàn)報(bào)告還應(yīng)包括結(jié)論。對(duì)有關(guān)分析化合物在供試基質(zhì)中穩(wěn)定性與儲(chǔ)藏時(shí)間的相關(guān)性進(jìn)行討論。還要提供項(xiàng)目負(fù)責(zé)人的真實(shí)性證明，包括簽字、打印名、職稱、單位、地址、電話、日期。附表或圖。應(yīng)提交樣品儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)的原始數(shù)據(jù)表和一份基于作物和儲(chǔ)藏的樣品殘留數(shù)據(jù)摘要表； 并提供相關(guān)的曲線圖及流程圖等。

（摘編自《農(nóng)藥科學(xué)與管理》）