探尋“抑菌能手”

向昌亮

近年來(lái)，隨著各大媒體對(duì)食品中違法使用添加劑、防腐劑現(xiàn)象的曝光，人們對(duì)食品和生活用品的安全感持續(xù)降低，食品和日化行業(yè)的原料也從化工合成逐漸向天然提取發(fā)展，且需求量與日俱增。

柑橘類果皮中含黃酮類物質(zhì)，具有抗菌消炎、抗過(guò)敏、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗氧化、抗癌作用，既可用來(lái)制藥又可作為食品添加劑。湘西盛產(chǎn)橙子、橘子和柚子，它們都屬于柑橘類，它們的果皮萃取液是否可以作為抗菌劑？

大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和芽孢桿菌等常見(jiàn)細(xì)菌易對(duì)日常生活造成困擾，所以我想通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究不同柑橘類果皮萃取液的抗菌、滅菌效果。

一、材料與方法

（一）儀器與試劑

手套、燒杯、量筒、酒精燈、竹簽、培養(yǎng)皿、超凈工作臺(tái)、高壓滅菌鍋、 紫外分光光度計(jì)、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋等。去離子水、滅菌雙蒸水、75%的乙醇、細(xì)菌基本培養(yǎng)基（LB）等。

（二）實(shí)驗(yàn)樣品

1.橘皮。取自湘西本地產(chǎn)的橘子。

2.酸柚皮。取自湘西本地產(chǎn)的酸柚。

3.橙子皮。取自超市購(gòu)買的普通食用臍橙。

稱取橘皮、酸柚皮、橙子皮各200g。

（三）實(shí)驗(yàn)步驟

1.將橘子、酸柚、橙子的果皮分別搗碎，用200ml無(wú)菌水浸泡獲得1g/ml果皮汁液。

2.把不同種類、濃度的果皮汁液添加到液體培養(yǎng)基中，以不加果皮汁的全培養(yǎng)基為對(duì)照組。

3.將添加不同果皮汁液和無(wú)菌水的培養(yǎng)基分成小份，分別接種大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和芽孢桿菌，并置于37℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中，每隔6h取微量菌液，適當(dāng)稀釋，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定其活菌濃度。

4.以時(shí)間為橫坐標(biāo)、菌體濃度為縱軸繪制生長(zhǎng)曲線，根據(jù)觀察比較不同柑橘類果皮汁液的抗菌效能。

二、結(jié)果與分析

比較分析三種柑橘類果皮萃取液不同濃度下不同接種菌株菌液中菌體的濃度，結(jié)果如下。

1.對(duì)金黃色葡萄球菌的抗菌情況

在無(wú)添加果皮汁的對(duì)照組中，每個(gè)時(shí)期菌液濃度都明顯高于同一時(shí)期已添加果皮汁的菌液濃度。添加果皮汁后的該細(xì)菌生長(zhǎng)速度明顯延遲，至12h才達(dá)到對(duì)照組6h時(shí)的菌液濃度，且穩(wěn)定期的菌液濃度始終處于對(duì)照組菌液最高值的一半左右，36h后進(jìn)入衰亡期。

因此，三種果皮汁對(duì)金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，且相差不大，酸柚皮汁原液和按1∶5進(jìn)行混合時(shí)的抑菌效果最好。

2.對(duì)大腸桿菌的抗菌情況

柑橘類果皮萃取液對(duì)大腸桿菌的抗菌效果明顯。在無(wú)添加果皮汁的對(duì)照組中，每個(gè)時(shí)期菌液濃度明顯高于同一時(shí)期已添加果皮汁的菌液濃度。添加果皮汁后的該細(xì)菌生長(zhǎng)速度明顯延遲，至12h大部分加了果皮汁的培養(yǎng)基中菌液濃度都明顯低于對(duì)照組6h時(shí)的菌液濃度，且穩(wěn)定期的菌液濃度明顯低于對(duì)照組菌液最高值的一半左右。

因此，三種果皮汁對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用且相差不大，其中最低值均出現(xiàn)在酸柚皮汁原液和按1∶5進(jìn)行混合的培養(yǎng)基中。

3.對(duì)芽孢桿菌的抗菌情況

在無(wú)添加果皮汁的對(duì)照組中，每個(gè)時(shí)期菌液濃度都明顯高于同一時(shí)期已添加果皮汁的菌液濃度。添加果皮汁后的該細(xì)菌生長(zhǎng)速度明顯延遲，且每種果皮汁不同濃度的抑菌效果區(qū)別也較明顯，菌液最低值出現(xiàn)在酸柚皮汁原液的培養(yǎng)基中。

因此，三種果皮汁對(duì)芽孢桿菌的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，并且酸柚皮汁原液的抑菌效果最好，與酸柚皮汁和液體培養(yǎng)基按1∶5進(jìn)行混合時(shí)相差不大，橘皮汁原液次之，橙皮汁原液效果不明顯。

三、結(jié)論

各生長(zhǎng)時(shí)期菌液中菌體的數(shù)量均明顯低于對(duì)照組，因此，三種柑橘類果皮萃取液的抗菌效果明顯，且生長(zhǎng)曲線的趨勢(shì)與對(duì)照組基本一致，這與生長(zhǎng)過(guò)程中抗菌物質(zhì)的消耗有關(guān)。

抑菌效果與果皮萃取液的濃度呈正比，濃度越高抑菌效果越強(qiáng)。同時(shí)，不同柑橘果皮萃取液的抗菌效果存在差異，且對(duì)不同細(xì)菌的抑菌效果差異明顯。

本實(shí)驗(yàn)只是初步探討了三種柑橘類果皮萃取液的抗菌效果，驗(yàn)證了柑橘類果皮萃取液具有抗菌的作用，由于技術(shù)和設(shè)備受限未能對(duì)果皮萃取液進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，即統(tǒng)一標(biāo)定，因此無(wú)法比較各種柑橘果皮萃取液的抗菌差異，也無(wú)法準(zhǔn)確給出柑橘果皮萃取液的抗菌效能。

萃取液中物質(zhì)成分復(fù)雜，可能存在多種物質(zhì)都具有抗菌作用的情況。因此，在進(jìn)一步的探索中可將果皮萃取液進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，從而比較各種柑橘果皮萃取液的抗菌差異和抗菌效能，進(jìn)一步測(cè)定各種柑橘果皮萃取液中的化合物組成，確定其中的抗菌物質(zhì)。（指導(dǎo)老師：楊生巖 康麗華 杜 盈）