七氟醚預(yù)處理對(duì)梗阻性黃疸肝缺血再灌注大鼠腎損傷的影響及機(jī)制

張雪霞，李毅，李文華，周少朋(中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院，廣東珠海519000)

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七氟醚預(yù)處理對(duì)梗阻性黃疸肝缺血再灌注大鼠腎損傷的影響及機(jī)制

張雪霞，李毅，李文華，周少朋(中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院，廣東珠海519000)

摘要：目的觀察七氟醚對(duì)梗阻性黃疸肝缺血再灌注大鼠腎損傷的影響，探討其作用機(jī)制。方法將60只SD大鼠隨機(jī)分成三組，每組20只。模型組制備梗阻性黃疸肝缺血再灌注模型；七氟醚預(yù)處理組吸入七氟醚30 min、吸入空氣30 min，制備梗阻性黃疸肝缺血再灌注模型；正常對(duì)照組僅手術(shù)游離肝門至膽總管。分別于處理1、3、6、12、24 h每組隨機(jī)選取4只大鼠行下腔靜脈采血，檢測(cè)血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)。處死大鼠，取左腎組織，光鏡下觀察腎組織病理學(xué)變化；制備腎組織勻漿，檢測(cè)腎組織丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、三磷酸腺苷(ATP)。結(jié)果對(duì)照組不同時(shí)間點(diǎn)腎小管及腎間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常；模型組腎臟近曲小管上皮細(xì)胞濁腫，并出現(xiàn)細(xì)胞崩析、廣泛細(xì)胞管形成；七氟醚預(yù)處理組腎組織改變同模型組，但程度均減輕。與對(duì)照組比較，模型組及七氟醚預(yù)處理組各時(shí)間點(diǎn)血清Cr、BUN水平均升高(P均<0.01)；七氟醚預(yù)處理組各時(shí)間點(diǎn)血清Cr和BUN水平均低于模型組(P<0.05或<0.01)。與對(duì)照組比較，模型組及七氟醚預(yù)處理組各時(shí)間點(diǎn)腎組織MDA升高，SOD、ATP降低，組間比較P均<0.01；七氟醚預(yù)處理組各時(shí)間點(diǎn)腎組織MDA低于模型組，SOD、ATP高于模型組，組間比較P<0.05或<0.01。結(jié)論七氟醚預(yù)處理可減輕梗阻性黃疸肝缺血再灌注大鼠腎損傷，其機(jī)制可能與減少氧自由基產(chǎn)生有關(guān)。

關(guān)鍵詞：梗阻性黃疸；缺血再灌注；七氟醚；丙二醇；超氧化物歧化酶；三磷酸腺苷

肝臟缺血再灌注損傷是梗阻性黃疸手術(shù)中常見的病理生理過程，其產(chǎn)生原因與原發(fā)疾病本身及手術(shù)方式等有關(guān)，可導(dǎo)致肝臟本身及遠(yuǎn)隔臟器(如腎臟)的損傷[1～3]。氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)是缺血再灌注損傷的主要發(fā)病機(jī)制。麻醉劑七氟醚具有抗炎特性，但其對(duì)缺血再灌注損傷的影響尚不清楚。2014年1月～2015年7月，本研究觀察了七氟醚對(duì)梗阻性黃疸肝缺血再灌注大鼠腎損傷的影響，現(xiàn)分析結(jié)果并探討其作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1材料清潔級(jí)成年雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量150～200 g，購(gòu)自中山大學(xué)北校區(qū)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。七氟醚購(gòu)自美國(guó)雅培公司，丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活力檢測(cè)試劑盒、三磷酸腺苷(ATP)檢測(cè)試劑盒、BCA蛋白均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2動(dòng)物分組及處理將SD大鼠隨機(jī)分為三組，每組20只。模型組：制備梗阻性黃疸肝缺血再灌注模型[4]。大鼠術(shù)前禁食12 h、禁水2 h，腹腔注射戊巴比妥鈉(40 mg/kg)，腹部剃毛、消毒，經(jīng)劍突下正中切口約2 cm，暴露第一肝門及肝左、中葉肝蒂，用無損傷鉗夾閉左側(cè)葉、中央葉的血管和膽管，造成70%肝臟缺血，阻斷30 min后取下血管夾，恢復(fù)肝臟供血。術(shù)后肝組織病理切片及血清肝功能結(jié)果均提示造模成功。七氟醚組：將大鼠置于有機(jī)玻璃箱內(nèi)，進(jìn)氣端連接七氟醚揮發(fā)罐，揮發(fā)罐控制吸入醚的濃度。采用麻醉機(jī)的氣體流量計(jì)控制混合氣體流量，出氣端連接麻醉氣體監(jiān)測(cè)儀，維持七氟醚吸入濃度為2.4%，并在麻醉箱底鋪設(shè)鈉石灰以吸收CO2，持續(xù)30 min后吸入空氣30 min；制備梗阻性黃疸肝缺血再灌注模型，方法同模型組。正常對(duì)照組：僅手術(shù)游離肝門至膽總管。分別于處理1、3、6、12、24 h每組隨機(jī)選取4只大鼠，行下腔靜脈采血，于常溫下3 000 r/min離心10 min，取血清。取血后處死大鼠，分別取左腎組織，沿矢狀面剖開，一半置于10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋，行病理切片；另一半制備組織勻漿，-80 ℃冰箱保存。

1.3相關(guān)指標(biāo)觀察①腎組織病理學(xué)變化：取腎組織切片，光鏡下觀察腎組織病理學(xué)變化。②腎功能：采用HITACH7170全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)。③腎組織MDA、SOD、ATP：取腎組織勻漿，采用化學(xué)比色法測(cè)定腎組織MDA、SOD、ATP，具體操作參照試劑盒說明書。

2結(jié)果

2.1各組腎組織病理學(xué)變化對(duì)照組不同時(shí)間點(diǎn)腎小管及腎間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常；模型組腎臟近曲小管上皮細(xì)胞濁腫，并出現(xiàn)細(xì)胞崩析、廣泛細(xì)胞管形成，且在缺血再灌注3、6 h較明顯，6 h后減輕；七氟醚組腎組織改變同模型組，但改變程度均減輕。

2.2各組不同時(shí)間點(diǎn)血清Cr、BUN及腎組織MDA、SOD、ATP水平比較與對(duì)照組比較，模型組及七氟醚預(yù)處理組各時(shí)間點(diǎn)血清Cr、BUN水平均升高(P均<0.01)；七氟醚預(yù)處理組各時(shí)間點(diǎn)血清Cr和BUN水平均低于模型組(P<0.05或<0.01)。與對(duì)照組比較，模型組及七氟醚預(yù)處理組各時(shí)間點(diǎn)腎組織MDA升高，SOD、ATP降低，組間比較P均<0.01；七氟醚預(yù)處理組各時(shí)間點(diǎn)腎組織MDA低于模型組，SOD、ATP高于模型組，組間比較P<0.05或<0.01。見表1。

表1　各組不同時(shí)間點(diǎn)血清Cr、BUN及腎組織MDA、SOD、ATP水平比較

注：與對(duì)照組同時(shí)間點(diǎn)比較，#P<0.01；與模型組同時(shí)間點(diǎn)比較，△P<0.05，▲P<0.01。

3討論

對(duì)梗阻性黃疸患者行手術(shù)治療時(shí)常采用經(jīng)典的Pringle肝門阻斷術(shù)或其他肝門阻斷術(shù)以減少術(shù)中出血的風(fēng)險(xiǎn)，但肝門阻斷可造成肝臟的缺血再灌注損傷[5]，血流阻斷及氧運(yùn)輸減少導(dǎo)致炎癥反應(yīng)并最終損傷器官是其發(fā)生的主要原因。肝臟缺血再灌注不僅導(dǎo)致肝臟損傷，還會(huì)導(dǎo)致遠(yuǎn)隔臟器(如腎臟)的損傷[6]。本研究模型組腎小球毛細(xì)血管及腎間質(zhì)充血、腎小管上皮細(xì)胞水腫均較其他組嚴(yán)重，血清Cr、BUN水平也較其他組升高，說明肝缺血再灌注后可導(dǎo)致腎組織損傷，與Oliveira-Santos等[7]研究結(jié)果一致。

肝缺血再灌注所致腎損傷的發(fā)生機(jī)制尚未闡明，但普遍認(rèn)為可能與氧自由基代謝、氧化應(yīng)激、細(xì)胞能量代謝等有關(guān)。MDA是反映機(jī)體脂質(zhì)過氧化物含量及受超氧離子自由基攻擊程度的常用指標(biāo)[8]。SOD能清除超氧離子自由基[9]，尤其對(duì)缺血再灌注過程中產(chǎn)生的超氧離子自由基的清除作用明顯[10]。ATP由線粒體產(chǎn)生，能夠反映細(xì)胞線粒體的功能狀態(tài)及細(xì)胞能量代謝水平[11]。因此，檢測(cè)腎組織MDA、SOD和ATP可以間接反映腎組織內(nèi)自由基水平。有研究表明，七氟醚預(yù)處理可明顯降低缺氧/復(fù)氧后細(xì)胞內(nèi)活性氧及MDA的生成，提示七氟醚通過降低細(xì)胞產(chǎn)生的活性氧，恢復(fù)抗氧化酶活性，從而減少細(xì)胞死亡，抑制低缺氧/復(fù)氧所誘發(fā)的氧化損傷[12]。

本研究七氟醚組腎臟病理學(xué)改變輕于模型組，血清Cr、BUN水平低于模型組，腎組織ATP、SOD水平高于模型組、MDA低于模型組；說明七氟醚預(yù)處理可減輕梗阻性黃疸大鼠肝缺血再灌注引起的腎損傷，其機(jī)制可能與抑制氧自由基產(chǎn)生有關(guān)。但本研究對(duì)七氟醚預(yù)處理的觀察時(shí)間僅24 h， 其長(zhǎng)期療效及具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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(收稿日期：2015-09-14)

中圖分類號(hào)：R575

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-266X(2016)12-0031-03

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2016.12.009

通信作者：周少朋(E-mail: xiaoxuetougao@163.com)

基金項(xiàng)目：珠海市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014D0401990017)。