乳腺癌生發(fā)過(guò)程中WWOX和Caspase－9的表達(dá)①

王　新，周　昱，廉奇鑫

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科，黑龍江佳木斯154003)

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乳腺癌生發(fā)過(guò)程中WWOX和Caspase－9的表達(dá)①

王新，周昱，廉奇鑫

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科，黑龍江佳木斯154003)

摘要:目的: WWOX、Caspase－9兩因子通過(guò)檢測(cè)是否在人體乳腺癌組織有表達(dá)，并分析WWOX、Caspase－9在乳腺癌組織中的表達(dá)特點(diǎn)，研究?jī)烧哧P(guān)系。方法:在乳腺正常組織、乳腺癌組織中應(yīng)用Elivision法測(cè)50例正常乳腺組織、乳腺癌組織中，同時(shí)整理患者的病理資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)。結(jié)果:在原位癌以及正常乳腺組織、浸潤(rùn)癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別是40.00% (18/45) ;53.85%(7/13)，76.92%(10/13)，66.67% (8/12)，58.33% (7/12)，75.56% (34/45)。且WWOX、Caspase－9每組兩兩相互比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論:①WWOX在乳腺癌組織中呈高表達(dá)，Caspase－9在乳腺癌中呈低表達(dá)。②WWOX、Csapase－9可能與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)。

關(guān)鍵詞:乳腺癌; WWOX、Caspase－9;免疫組織化學(xué)Elivision法

在惡性腫瘤中乳腺癌現(xiàn)今已經(jīng)成為女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一［1］，我國(guó)女性乳腺癌在我國(guó)所有惡性腫瘤中比例為7%～10%并且呈上升狀態(tài)。無(wú)論在國(guó)內(nèi)外乳腺癌都是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì)，全球每年有至少120萬(wàn)女性診斷為乳腺癌，50萬(wàn)人死于本病。在發(fā)達(dá)國(guó)家有報(bào)道顯示乳腺癌是女性惡性腫瘤中的第1位，比例約為32%［2］。

WWOX (ww domain contaming oxidoreductase)因子是近些年新發(fā)現(xiàn)的新抑癌基因［3］，它是在人類染色體16q23.3－q24.1中發(fā)現(xiàn)的，它含有414個(gè)氨基酸。WWOX因子內(nèi)含有一個(gè)特殊的氧化還原酶它其中的短鏈(short－ehaindehydrogenase reauetasedomainSRD)，國(guó)內(nèi)外學(xué)著研究表明WWOX可與ER、雌二醇相結(jié)合［3］，并作用于這兩個(gè)因子上。

半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶－9(Caspase －9)、在人體染色體1號(hào)染色體短臂中(p36.3p 36.1)發(fā)現(xiàn)該因子，Caspase－9它的結(jié)構(gòu)非常特殊常以無(wú)活性酶原結(jié)構(gòu)存在，至今為止只發(fā)現(xiàn)Caspase－9含有N末端的原域、大亞單位的20KD和小亞的10KD單位。而該區(qū)域中又包含了死亡效應(yīng)區(qū)域DED和Caspase聚集區(qū)域CARD，且DED和CARD屬于死亡域超家族。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用研究Elivision法檢驗(yàn)WWOX、Caspase－9兩因子分別在50例乳腺癌、50例癌旁正常組織中的表達(dá)情況，并探索WWOX、Caspase－9兩因子在乳腺中是否有關(guān)系及可能存在的臨床意義。

1　資料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源

在佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科選取2014 －01～2015－05進(jìn)行手術(shù)患者，并籌集術(shù)中切除的乳腺標(biāo)本，通過(guò)病理科知深大夫給予冰凍切除術(shù)及術(shù)后免疫組化結(jié)果選定正常乳腺組織及正常良性組織13例、原位癌12例以及浸潤(rùn)癌45例共計(jì)70例均為女性，年齡25～66歲。并查詢病理編號(hào)，在借用病理科存檔蠟塊，選取術(shù)前術(shù)后均未放療以及化療內(nèi)分泌治療靶向治療等。

1.2主要試劑

從北京博奧森生物有限公司購(gòu)買WWOX兔抗單克隆抗體以及Caspase－9兔抗單克隆抗體，通用Elivision法試劑盒以及DAB顯色試劑都是從北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司買入。

1.3免疫組化

通過(guò)(Elivision法)研究乳腺癌及正常組織中WWOX、Caspase－9是否有表達(dá)。

1.4結(jié)果判定

WWOX主要以細(xì)胞核表達(dá)，其表達(dá)陽(yáng)性為內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕褐色顆粒、而Caspase－9在細(xì)胞漿內(nèi)表達(dá)，其陽(yáng)性為出現(xiàn)黃色或棕褐色顆粒。應(yīng)用雙盲法觀察所有切片并計(jì)數(shù)，著色強(qiáng)度明顯強(qiáng)于背景處計(jì)數(shù)。每張病理切片至少在高倍鏡下(×200)觀察不重復(fù)的視野10個(gè)，以每視野中有100細(xì)胞計(jì)算其中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。Elivision法結(jié)果根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比和染色強(qiáng)度分別計(jì)分，前者計(jì)分按0分為≤0% ～10%，1分為10%～25%，2分為26%～50%，3分為為51%～75%，4分為75%～100%。后者計(jì)分按0分為無(wú)色，1分為淡黃色，2分為黃色，3分為黃褐色，兩者乘積: (－)為0～3分，(+ )為4～6分，()為7～9分，()為10～12分，其中“–”示為陰性表達(dá)，“+”以上示為陽(yáng)性表達(dá)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)的方式對(duì)計(jì)量數(shù)據(jù)資料進(jìn)行表示，采用t進(jìn)行檢驗(yàn)，蛋白表達(dá)的陽(yáng)性表達(dá)等計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)資料以率來(lái)表示，采用χ2檢驗(yàn)或Fish檢驗(yàn)，WWOX、Caspase－9蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1 WWOX在正常乳腺組織、乳腺癌組織中的表達(dá)

正常乳腺組織、原位癌、浸潤(rùn)癌中WWOX、Caspase－9蛋白表達(dá)水平，見(jiàn)表1～2。

表1　三組間WWOX表達(dá)水平

表2　三組間Caspase－9表達(dá)水平

WWOX蛋白在13例正常乳腺組織中陽(yáng)性表達(dá)為10例，陽(yáng)性表達(dá)率為76.92%;在12例乳腺原位癌中陽(yáng)性表達(dá)為8例，陽(yáng)性表達(dá)率為66.67%;在45例乳腺浸潤(rùn)癌中陽(yáng)性表達(dá)為18例，陽(yáng)性表達(dá)率為40.00%。Caspase－9蛋白在13例正常乳腺組織中陽(yáng)性表達(dá)為7例，陽(yáng)性表達(dá)率為53.85%;在12例乳腺原位癌中陽(yáng)性表達(dá)為7例，陽(yáng)性表達(dá)率為58.33%;在45例乳腺浸潤(rùn)癌中陽(yáng)性表達(dá)為34例，陽(yáng)性表達(dá)率為75.56%。通過(guò)秩和檢驗(yàn)我們可看出(表1，2) WWOX和Caspase－9分別在正常乳腺組織、原位癌、浸潤(rùn)癌中兩兩比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2浸潤(rùn)癌中WWOX與Caspase－9蛋白表達(dá)水平見(jiàn)表3～4。

表3　浸潤(rùn)癌中WWOX表達(dá)水平

表4　浸潤(rùn)癌Caspase－9表達(dá)水平

WWOX蛋白在16例浸潤(rùn)癌I期乳腺組織中陽(yáng)性表達(dá)為10例，陽(yáng)性表達(dá)率為62.50%;在14例浸潤(rùn)癌II期乳腺組織中陽(yáng)性表達(dá)為5例，陽(yáng)性表達(dá)率為35.71%;在15例浸潤(rùn)癌III期乳腺組織中陽(yáng)性表達(dá)為3例，陽(yáng)性表達(dá)率為20.00%。Caspase－9蛋白在16例浸潤(rùn)癌I期乳腺組織中陽(yáng)性表達(dá)為9例，陽(yáng)性表達(dá)率為56.25%;在14例浸潤(rùn)癌II期乳腺組織中陽(yáng)性表達(dá)為11例，陽(yáng)性表達(dá)率為78.57%;在15例浸潤(rùn)癌III期乳腺組織中陽(yáng)性表達(dá)為14例，陽(yáng)性表達(dá)率為93.33%。通過(guò)秩和檢驗(yàn)我們可看出(表3，4) WWOX和Caspase－9分別在浸潤(rùn)癌I期、潤(rùn)癌II期、浸潤(rùn)癌III期中兩兩比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.3乳腺癌生發(fā)過(guò)程中WWOX與Caspase－9蛋

白的相關(guān)性

①正常乳腺組織、原位癌、浸潤(rùn)癌中WWOX與Caspase－9的相關(guān)性:在36例WWOX陽(yáng)性表達(dá)的乳腺組織中Caspase－9陽(yáng)性表達(dá)的例數(shù)為16例，在24例Caspase－9陰性表達(dá)的的乳腺組織中WWOX陰性表達(dá)的例數(shù)為4例，且兩組數(shù)據(jù)差異比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 5，P＜0.05)，用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法Spearman分析，結(jié)果為二者在正常乳腺組織、原位癌、浸潤(rùn)癌組織中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=－0.336，P＜0.05)，提示二者在乳腺癌生發(fā)過(guò)程中起到了負(fù)相關(guān)作用，見(jiàn)表5。

表5　正常乳腺組織、原位癌、浸潤(rùn)癌中WWOX與Caspase－9的相關(guān)性

②乳腺癌中WWOX與Caspase－9的相關(guān)性: 在26例WWOX陽(yáng)性表達(dá)的乳腺癌組織中Caspase －9陽(yáng)性表達(dá)的例數(shù)為14例，在16例Caspase－9陰性表達(dá)的的乳腺癌組織中WWOX陰性表達(dá)的例數(shù)為4例，且兩組數(shù)據(jù)差異比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 5.77，P＜0.05)，用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法Spearman分析，結(jié)果為二者在乳腺癌組織中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=－0.369，P = 0.005)，提示二者在乳腺癌中起到了負(fù)相關(guān)作用，并且隨著病情加重負(fù)相關(guān)性加大，見(jiàn)表6。

表6　原位癌、浸潤(rùn)癌中WWOX與Caspase－9的相關(guān)性

3討論

乳腺癌的發(fā)生與致癌基因的激活、抑癌基因的失活或缺失有密切關(guān)系。2000年Bednarek等人鑒定出的新基因WWOX可與多種腫瘤的發(fā)生有一定

關(guān)聯(lián)，如在食管癌，胃癌，肺癌，乳腺癌，前列腺癌，卵巢癌等惡性腫瘤中都出現(xiàn)不同程度的WWOX基因外顯子丟失、雜合性缺失及的表達(dá)降低等異常表達(dá)［5］。前人對(duì)WWOX、Caspase－9在各種惡性腫瘤的表達(dá)已經(jīng)進(jìn)行了初步研究，并且在乳腺癌中也有研究，有過(guò)相同的觀點(diǎn)。WWOX在浸潤(rùn)癌中的陽(yáng)性表達(dá)明顯低于乳腺原位癌組織，兩者比較(P＜0.05)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Caspase－9在浸潤(rùn)癌中的陽(yáng)性表達(dá)明顯高于乳腺原位癌組織。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的WWOX和Caspase－9在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)數(shù)據(jù)，WWOX、Caspase－9同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)的例數(shù)為14例，WWOX、Caspase－9同時(shí)陰性表達(dá)的例數(shù)為4例，且兩組數(shù)據(jù)差異比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 5.77，P＜0.05)，用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法Spearman分析，結(jié)果為二者在乳腺癌組織中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=－0.369，P＜0.05)。本實(shí)驗(yàn)希望通過(guò)WWOX、Caspase－9在乳腺癌生發(fā)過(guò)程中的表達(dá)以及在病理、臨床分其中數(shù)據(jù)與結(jié)果，能為檢測(cè)乳腺癌發(fā)生、發(fā)展、治療等方面提供新的依據(jù)，為治療提供新思路。

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(收稿日期:2015－12－07)

通訊作者:周昱(1969～)男，黑龍江集賢人，學(xué)士，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E－mail: zhouyu731@126.com。

作者簡(jiǎn)介:王新(1962～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。

基金項(xiàng)目:①黑龍江省衛(wèi)生廳科研項(xiàng)目，編號(hào): 2013244。

中圖分類號(hào):R737.9

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

文章編號(hào):1008－0104(2016) 02－0016－02