微柱凝膠技術在血小板交叉配型中的臨床應用

郭建生 姚葉林 何英愛

1.廣東省東莞市中心血站，廣東東莞 523930；2.廣東省東莞市石龍人民醫(yī)院檢驗科，廣東東莞 523326

微柱凝膠技術在血小板交叉配型中的臨床應用

郭建生1姚葉林2何英愛2

1.廣東省東莞市中心血站，廣東東莞 523930；2.廣東省東莞市石龍人民醫(yī)院檢驗科，廣東東莞 523326

目的 探討微柱凝膠技術在血小板交叉配型中的臨床應用價值。 方法 采用微柱凝膠免疫分析技術對8例免疫性血小板輸注無效的患者進行交叉配型，選擇結果為“相合”的血小板進行血小板治療，計算分析血小板計數(shù)增高指數(shù)（CCI），CCI>4.5×109/L說明血小板輸注有效。選擇8例輸注無效進行配型的作為實驗組，另選擇8例輸注無效未配型的作為對照組，比較兩組的血小板輸注結果。 結果 實驗組患者CCI均>4.5×109/L，輸注有效，對照組患者CCI均<4.5×109/L，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。 結論 微柱凝膠免疫分析技術可以避免或減輕由免疫原因引起的輸注無效，此方法簡單快速，結果準確可靠，值得推廣。

微柱凝膠免疫分析技術；血小板輸注無效；血小板交叉配型

機采血小板的應用在本市普及率已達100%，各種惡性血液病患者或臨床上需長期輸注血小板的患者在輸注過程中經常遇到輸注無效的情況，主要原因是由于機體免疫產生了同種抗體，產生的同種抗體中主要有HLA抗體（占80%）[1]、血小板特異性抗體（HPA抗體）、ABH抗體等，其中血小板的抗原結構復雜，免疫產生血小板抗體的概率很高，尤其是反復大量輸注血小板的患者約50%以上產生血小板同種抗體，相當于紅細胞同種抗體產生頻率的幾十倍[2]。因此選擇一種合適的方法尋找合適的獻血者，以避免患者免疫產生同種抗體后出現(xiàn)輸注無效的情況，這既可解決HLA抗體引起的輸注無效，也可解決HPA及ABH等同種抗體引起的輸注無效，是臨床輸血尤其是血小板輸注無效中急需解決的問題。本研究選擇8例各種原因引起血小板減少的患者，采用微柱凝膠免疫分析技術進行血小板交叉配合，治療效果較好。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2013年2 ～11月由本市幾家醫(yī)院上送的患者血液標本8例，均為長期反復住院患者，年齡5～77歲，男性5例，女性3例。其中再生障礙性貧血2例，急性非淋巴細胞白血病1例，血小板減少性紫癜5例，多次輸注未經配型的機采血小板，血小板抗體檢測為陽性，并排除非免疫因素（感染、發(fā)熱等）。血型為O型3例，A型2例，B型2例，AB型1例。選擇此8例輸注無效的進行配型者作為實驗組，再選擇同期8例未配型者作為對照組。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器 SORVALL Biofuge pico離心機，BYL型血型血清學多用離心機（BYF-I型，長春博研科學儀器有限公司），免疫微柱孵育器。

1.2.2 試劑 試劑盒包含微柱凝膠抗人球蛋白試劑卡，指示紅細胞等，由吉林省長春博迅生物技術責任有限公司提供，在有效期內使用。

1.3 配型輸注方法

各選擇同血型5袋庫存機采血小板（1治療量/袋），應用微柱凝膠免疫分析技術交叉配型，O型紅細胞加上抗人IgG致敏，作致敏紅細胞用，該致敏紅細胞與患者血漿各50 μl，放37℃孵育10 min，再將被檢血小板按順序加入微柱凝膠管中，離心1000 r/min，1 min后觀察檢測結果。結果判讀與微柱凝膠紅細胞抗原抗體反應相同。致敏紅細胞沉于微柱凝膠管底部的判為陰性，在凝膠管上面為強陽性，懸浮在凝膠中的為弱陽性。選擇配型結果為陰性的血小板進行輸注。

1.4 血小板輸注療效觀察

在患者輸注血小板前進行血小板計數(shù)，在輸注血小板后24 h再進行血小板計數(shù)，計算記錄輸注后24 h血小板計數(shù)增高指數(shù)（CCI），用于評估患者血小板輸注的療效（24 h CCI>4.5×109/L則血小板輸注有效[3]）。

1.5 統(tǒng)計學分析

應用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學分析，采用Fisher檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 交叉配型結果

8例患者分別與同血型的5袋機采血小板進行交叉配合試驗，“+”為交叉配合結果陽性，“-”為交叉配合結果陰性。除患者5外，其余7位患者用5袋同型機采血小板進行配型，至少有1袋機采血小板配合成功。患者5重新選擇兩袋同型血小板交叉配合后結果均為相合（表1）。

表1 交叉配型結果

2.2 患者輸注交叉配合血小板后24 h的結果

8例患者血小板交叉配合后進行輸注的效果見表2。

表2 患者輸注交叉配合血小板后24 h的結果

2.3 配型與未經配型血小板輸注結果的比較

實驗組在輸注后CCI均>4.5×109/L，對照組CCI均＜4.5×109/L，兩組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。

3 討論

血小板輸注的有效性一直是倍受關注的研究課題，這些年來尤其是免疫性因素（同種免疫）所引起的血小板輸注無效更加是研究的焦點。因為國家一直推行成分輸血，血小板的輸注越來越被廣泛應用。在臨床上，聯(lián)合化療的患者、骨髓移植的患者等都需要輸注血小板，導致血小板輸注無效的情況經常發(fā)生，這就不僅達不到治療的效果，甚至還耽誤病情。從另一角度分析，現(xiàn)各大城市血液供應普遍緊張，而機采血小板的供應更加緊缺，長期以來各醫(yī)院患者是血站采集一袋輸一袋；現(xiàn)隨著本市臨床血小板供應的相對充裕（本市2013年血小板采集增長率達55.4%），為免疫性血小板輸注無效患者進行輸注前的交叉配型提供了可能。

影響血小板輸注療效的原因有很多，概括起來主要見于兩大類[4]：一類為非免疫因素，包括發(fā)熱、感染、脾大、活動性出血等；另一類為免疫性因素（同種免疫），包括HLA抗體（占80%）[1]、血小板特異性抗體（HPA抗體）、ABH抗體等。姚葉林等[5-6]研究報道血小板抗體的檢出率達19%～60%。如果進行血小板的交叉配型試驗，選擇“適合性血小板輸注”，可以很大程度地提高血小板輸注療效，減少寶貴血液資源的浪費。

本研究選擇8例患者已經出現(xiàn)了血小板輸注無效，經過血小板交叉配型輸注后CCI均>4.5×109/L，與未經配型的輸注組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），說明微柱凝膠免疫分析技術用于血小板配型，可以避免或減少因免疫原因導致的血小板輸注無效。方檀等[7]的報道采用SEPSA法對10例血小板輸注無效的患者進行血小板配型，陳玫等[8]報道采用SEPSA法對12例血小板輸注無效的患者進行血小板配型，結果顯示10例患者CCI均>4.5×109/L，與本研究結果一致。因此建議已經出現(xiàn)了免疫性血小板輸注無效的患者，盡可能地進行血小板配型后再行輸注。

當前用于血小板交叉配型的血清學技術只提到了兩種方法（SEPSA和MPHA）[9]，該兩種方法實驗過程復雜，所需時間較長。微柱凝膠免疫分析技術已廣泛用于交叉配血、血型正反鑒定、ABO抗體鑒定、不規(guī)則抗體篩選等，但用于血小板交叉配型則少見報道。本研究應用微柱凝膠免疫分析技術進行血小板交叉配型，可以同時檢測HLA、HPA及ABH抗體，達到理想的實驗結果，所需要的實驗時間也較短，約在1 h內就可以完成實驗，方法簡單快速，結果準確可靠，值得有條件的單位推廣應用。同時東莞市中心血站要有足夠的機采血小板庫存量以供進行血小板交叉配型使用，這就要呼吁更多的市民積極投入到成分獻血的行列中，為廣大患者無私奉獻！

[1]陳小伍，于新發(fā)，田兆嵩.輸血治療學[M].北京：科學出版社，2012：155.

[2]王培華.輸血技術學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：178-182.

[3]李敬蘭，曹金霓.血小板輸注無效的原因與防治[J].中國輸血雜志，1994，7（4）：217.

[4]李濟生，趙冉.血小板輸注無效的原因及預防[J].實用醫(yī)技雜志，2004，11（5）：589.

[5]姚葉林，郭建生，何英愛.微柱凝膠免疫分析技術檢測血小板抗體的應用[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2013，10（增刊1）：83-84.

[6]史恩祥，范海麗，王苗武，等.卡式微柱凝膠法檢測血小板抗體的應用[J].臨床輸血與檢驗，2007，9（1）：70-71.

[7]方檀，楊巖，王初.血小板配型處理免疫性血小板輸注無效10例觀察[J].吉林醫(yī)學，2005，26（12）：1338.

[8]陳玫，胡榮花，方建.免疫性血小板輸注無效12例處理[J].中國輸血雜志，2004，17（1）：55.

[9]血站技術操作規(guī)程[Z].衛(wèi)醫(yī)政發(fā)[2012].

Clinical application of microbubes gel technology in platelet cross match

GUO Jian-sheng1YAO Ye-lin2HE Ying-ai2
1.Dongguan Center Blood Station,Guangdong Province,Dongguan 523930,China;2.Departement of Clinical Laboratory, Shilong People′s Hospital of Dongguan City in Guangdong Province,Dongguan 523326,China

ObjectiveTo explore the clinical application value of microbubes gel technology in platelet cross match.MethodsMicrobubes gel immunoassay technology was used to make cross match for 8 patients who were platelet transfusion refractoriness because of immunity,then platelet therapy was applied to those"matched"platelets,the platelet corrected count increment(CCI)was caculated and analysed,and if the CCI was higher than 4.5×109/L,the platelet transfusion was valid.Eight cases of transfusion performed with type were selected as the experimental group,and the other eight cases of transfusion performed without type were chosen as control group,the platelet transfusion result was compared.ResultsCCI of experimental group was higher than 4.5×109/L,of control group was lower than 4.5×109/L,there was significant difference between two groups(P＜0.01).ConclusionMicrobubes gel immunoassay technology can avoid or reduce transfusion refractoriness causes by the immune,this method is simple and fast,and the results are accurate and relible.It is worth to promoting.

Microbubes gel immunoassay technology;Platelet Transfusion Refractoriness;Platelet cross match

R457.1

A

1674-4721（2014）03（c）-0024-03

2014-02-13本文編輯：郭靜娟）

廣東省東莞市醫(yī)療衛(wèi)生科技計劃一般項目立項（201210515026021）