顯色培養(yǎng)基分離嬰幼兒乳粉中阪崎腸桿菌的效果比對和應(yīng)用

◎ 程曉云，李建梅

（云南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院，云南 昆明 650223）

阪崎腸桿菌（E. sakazakii）是引起人們廣泛關(guān)注的一種危險的條件致病菌，是人和動物腸道內(nèi)寄生的一種革蘭氏陰性無芽孢桿菌，屬腸桿菌科，腸桿菌屬，是腸道正常菌群中的一種，在1980年前一直被稱為黃色陰溝腸桿菌。阪崎腸桿菌是近幾年在乳制品中新發(fā)現(xiàn)的一種致病菌。研究表明含有阪崎腸桿菌的嬰兒配方奶粉可引起嚴(yán)重的新生兒腦膜炎、小腸結(jié)腸炎和菌血癥，死亡率達(dá)50%以上。因此檢測嬰兒配方奶粉及制品中的阪崎腸桿菌十分重要。

我國在2005年5月通過《奶粉中阪崎腸桿菌檢測方法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的審定，對奶粉嚴(yán)查此菌。因此，按國家食品安全標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，阪崎腸桿菌在嬰兒配方乳粉中不得檢出。阪崎腸桿菌的檢測方法需要分離培養(yǎng)、鏡檢觀察、生化鑒定等多個步驟，檢測周期長，整個過程約6～7 d，且操作復(fù)雜，選擇良好的培養(yǎng)基是準(zhǔn)確分離、早期發(fā)現(xiàn)阪崎腸桿菌的良好方法。國家標(biāo)準(zhǔn)《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 阪崎腸桿菌檢驗》（GB/T 4789.40-2010）規(guī)定，采用阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基作為分離該菌的培養(yǎng)基。[1]阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基是實驗室常用的檢測嬰幼兒乳粉中的阪崎腸桿菌的培養(yǎng)基，主要利用阪崎腸桿菌自身代謝產(chǎn)生的α-葡萄糖苷酶與相應(yīng)顯色底物反應(yīng)顯色的原理來檢測。為分析國產(chǎn)與國外顯色培養(yǎng)基在嬰幼兒乳粉中分離阪崎腸桿菌的分離效果，筆者于2013-2015年采用廣東環(huán)凱公司阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（CRM）和河南科瑪嘉阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（DFI）同時檢測36份嬰幼兒乳粉，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

《德國刑事訴訟法典》將“通訊監(jiān)聽”與“扣押”、“搜查”并列規(guī)定于同一章節(jié)[5]，并且將“通訊監(jiān)聽”視作與“扣押”、“搜查”同等性質(zhì)的偵查措施。在德國，監(jiān)聽實行法官令狀主義，并且針對不同情形的監(jiān)聽分別規(guī)定了不同的適用條件，但是，《德國刑事訴訟法典》并未對偶然監(jiān)聽所得材料的證據(jù)能力作出規(guī)定。對于合法監(jiān)聽時偶然獲得的另案證據(jù)是否予以排除，德國學(xué)說和實務(wù)主要存在以下四種不同見解[6]：

1 資料與方法

1.1 樣品來源

2014-2015年間，采集的嬰幼兒奶粉，共36份。樣品來自國內(nèi)外不同的生產(chǎn)廠家，在云南省流通市場購買。

雖聽說最近有城里姑娘下嫁農(nóng)村的事兒，可那只是聽說而已。在我看來，像她這樣漂亮姑娘的下眼皮總比上眼皮長，像畫上的人一樣，是可望而不可即的。我把手一揮，學(xué)電影上那樣，喝了一聲：“上！”搶先占領(lǐng)了有利地形——炕頭。大家先一怔，接著也呼嚕一下?lián)砩峡?。猴子的二齒鉤眼睛盯著人家不放，我扯膀子給拉了上來。巴克夏沖他做個鬼臉，他紅著臉伸手借抓撲克來掩飾，巴克夏卻一把按住了他的手：“不忙，白磨手不干，講一下，輸了咋辦？”

1.2 培養(yǎng)基和試劑

CRM，DFI，胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA），改良硫酸鹽胰蛋白胨肉湯，萬古霉素（Mlst-Vm）,革蘭氏染液，阪崎腸桿菌生化鑒定試劑盒等，均購自廣東環(huán)凱生物科技有限公司，所用的培養(yǎng)基和試劑均按操作說明書進(jìn)行。選用法國梅里埃公司全自動生化鑒定系統(tǒng)對比鑒定顯色培養(yǎng)基。[2]

1.3 方法

我國在頒布檢測阪崎腸桿菌國家標(biāo)準(zhǔn)前，阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（DFI瓊脂）細(xì)菌莢膜染色法。

細(xì)菌莢膜是細(xì)菌細(xì)胞壁外面的一層黏液性物質(zhì)，對染料的親和力弱，不易著色，通常采用負(fù)染色法染色，即使菌體和背景著色而莢膜不著色，因此在菌體周圍呈一透明圈。由于莢膜含水量在90%以上，染色時一般不用熱固定，以防莢膜皺縮變形。莢膜染色法用于肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、炭疽芽胞桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌等有莢膜細(xì)菌的鑒定。[4]

（1）阪崎腸桿菌的培養(yǎng)分離及生化實驗。①前增菌和增菌：取試樣100 mL，加入已預(yù)熱至44 ℃裝有900 mL得緩沖蛋白胨水的錐形瓶中，充分溶解，于（36±1）℃培養(yǎng)16～20 h。用移液管移取1 mL接種于10 mL ST-Vm肉湯中，（44±0.5）℃培養(yǎng)22～26 h。②分離：將mLST-Vm( (每 10mL mLST 溶液中加 0.1mL的萬古霉素))肉湯混勻，各取增菌培養(yǎng)液一環(huán)，分別劃線于CRM平板和DFI平板，（36±1）℃培養(yǎng)22～26 h。在CRM平板和DFI平板上，阪崎腸桿菌在兩種平板上均呈藍(lán)綠色典型菌落。挑取1～5個可疑菌落，劃線接種于TSA平板。（25±1）℃培養(yǎng)（48±4）h。③生化鑒定：自TSA平板上挑取黃色可疑菌落，進(jìn)行生化試驗，結(jié)果見表1。鑒定陽性菌株為ATCC29544標(biāo)準(zhǔn)指控菌株。[3]

表1 生化試驗結(jié)果統(tǒng)計表

（2）分離鑒定。將疑似菌落分離純化，革蘭氏染色后，選用法國梅里埃公司鑒定卡（陰性卡）進(jìn)行儀器生化鑒定和確認(rèn)。

莢膜菌液；結(jié)晶紫酒精飽和液5 mL，加蒸餾水95 mL混合液；200 g/L硫酸銅水溶液。

將莢膜菌涂片在空氣中自然干燥，不需加熱固定。滴加結(jié)晶紫染色液，在火焰上微微加熱，使玻片上染液冒蒸汽為止，用200 g/L硫酸銅水溶液沖洗染液，切勿用流水沖洗。用吸水紙吸干后油鏡觀察。

2 結(jié)果

36份樣品中，生長疑似菌落份數(shù)在CRM平板和DFI平板上分別為6份和5份，疑似菌落份數(shù)檢出率分別為16.67%和13.89%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Χ2=0.08，P＞0.05）；在2份陽性加標(biāo)樣品中，兩者結(jié)果一致，陽性符合率為100%，見表2。

表2 CRM平板和DFI平板分離阪崎腸桿菌結(jié)果比較表

3 討論

國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T4789.40-2010《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗阪崎腸桿菌檢驗》方法第一法。

3.1 原理與應(yīng)用

——寧波對10個網(wǎng)紅品牌奶茶樣品做檢測，發(fā)現(xiàn)其糖和脂肪含量非常高，即使點(diǎn)單時選擇“無糖”，糖含量也不低。針對這一結(jié)果，網(wǎng)友調(diào)侃道

3.2 材料

（3）質(zhì)量控制。阪崎腸桿菌鑒定陽性菌株為ATCC29544標(biāo)準(zhǔn)指控菌株。

3.3 方法

（4）統(tǒng)計學(xué)處理。采用SPSS21.0軟件，率的比較用Χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

評價創(chuàng)造 按照希斯贊特米哈伊的觀點(diǎn)，教師握著學(xué)生創(chuàng)造力的“生殺大權(quán)”，這意味著教師正確識別并積極評價學(xué)生的創(chuàng)造性行為和傾向?qū)W(xué)生展現(xiàn)創(chuàng)造力至關(guān)重要．目前常用的創(chuàng)造力評價方法有自我評價、同伴提名、個性測量、發(fā)散思維測試和歷史回溯等．已有的一些心理學(xué)量表提供了較好的參考，但就數(shù)學(xué)教學(xué)而言，教師仍應(yīng)掌握基本的評價原理和方法并進(jìn)行創(chuàng)造性的應(yīng)用．

4 結(jié)果

細(xì)菌菌體呈紫色，莢膜呈淡紫色或無色。阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基具有較高的選擇性和特異性，且兩種培養(yǎng)基的特異性無明顯差別，可以達(dá)到相同的靈敏度和檢測限，顯色培養(yǎng)基對阪崎腸桿菌的特異性高，抗干擾性強(qiáng)。

5 結(jié)語

參考文獻(xiàn)：

為保證工會會計記錄的順利進(jìn)行，應(yīng)當(dāng)對工會會計進(jìn)行合理的定額。通過科學(xué)合理的定額保證工會活動的公開性、合理性、透明性，避免出現(xiàn)赤字等問題。在進(jìn)行工會預(yù)算時，應(yīng)當(dāng)根據(jù)工會的實際情況、發(fā)展目標(biāo)、財務(wù)管理水平等建立合理的預(yù)算標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)市場變化、發(fā)展水平等規(guī)范工會會計預(yù)算，保證預(yù)算目標(biāo)的科學(xué)合理性。進(jìn)而通過預(yù)算激發(fā)工會員工的工作激情與熱情，提升工會績效水平，并構(gòu)建有力的監(jiān)督機(jī)制，保證工會財會順利進(jìn)行。

顯色培養(yǎng)基在嬰幼兒奶粉微生物檢測中的應(yīng)用，可大大提高檢出率和減少檢測時間，應(yīng)用顯色培養(yǎng)基鑒定細(xì)菌是一種快捷方便易推廣的快速檢測方法，通過顯色培養(yǎng)基的特異性酶的顯色底物，直接觀察菌落顏色即可初步鑒定菌種，具有快速、簡便、節(jié)約成本等優(yōu)點(diǎn)。結(jié)果顯示，增菌液在37 ℃培養(yǎng)時，在顯色培養(yǎng)基上分離會出現(xiàn)假陽性的菌落，而在44 ℃培養(yǎng)時，即可排除此干擾。所以在實際檢測中仍然需要檢測人員提高對檢測樣品的前增菌方法和對阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基特異性和靈敏度的及時嚴(yán)格地按國家標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行觀測，才能有效提高樣品檢測率。[5]

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部. GB/T 4789.40-2010 食品微生物學(xué)檢驗 食品微生物學(xué)檢驗 阪崎腸桿菌檢驗[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

[2]吳清平，周艷紅，蔡芷荷.衛(wèi)生微生物特異性顯色培養(yǎng)基的研究與應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2005（1）：124-126.

“我想不到會是這樣的結(jié)局?！膘o秋說。她想不到會是怎樣的結(jié)局？是終與楚墨發(fā)生關(guān)系的結(jié)局？是發(fā)生關(guān)系的同時即結(jié)束關(guān)系的結(jié)局？她該釋然還是該失落？她該怨恨楚墨還是該感激楚墨？偷情——她的心被狠狠地刺了一下，她有一種被侮辱的感覺。

[3]吳清平，葉應(yīng)旺，郭偉鵬，等.阪崎腸桿菌的生物學(xué)特性及其檢測技術(shù)[J].微生物學(xué)報，2006（6）：99-103.

[4]楊萬穎，祝仁發(fā)，李傳禮，等.嬰幼兒食品中阪崎腸桿菌方法的改進(jìn)[J].檢疫檢驗科學(xué)，2008（2）：39-42.

[5]盧勉飛，蔡芷荷，吳清平，等.阪崎腸桿菌培養(yǎng)基的應(yīng)用研究[J].微生物學(xué)報，2009（11）：1789-1793.