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    消銀湯對豚鼠銀屑病樣模型血清TNF—α、IFN—γ水平的影響

    2016-04-26 17:53宋紅霞
    科技視界 2016年10期
    關鍵詞:腫瘤壞死因子銀屑病干擾素

    宋紅霞

    【摘 要】目的:探討消銀湯對TNF-α、IFN-γ水平的影響。方法:建立豚鼠耳部銀屑病皮損模型,給予不同劑量的消銀湯干預,14d后,采用ELISA法檢測豚鼠血清TNF-α、IFN-γ的含量。結果:消銀湯組豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量均明顯低于模型組(P<0.01);消銀湯高劑量組對豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ表達的改善作用優(yōu)于甲氨蝶呤(P<0.05或P<0.01)。結論:消銀湯對銀屑病具有治療作用。

    【關鍵詞】銀屑??;消銀湯;腫瘤壞死因子-α;干擾素-γ

    銀屑病是一種常見的易復發(fā)的慢性炎癥和增殖性皮膚病,目前該病病因和發(fā)病機理不明,大多數(shù)學者認為銀屑病是一種多基因遺傳背景下的T細胞介導的自身免疫性疾病[1]。消銀湯是筆者的臨床經(jīng)驗方,治療尋常型銀屑病取得了滿意的療效。本實驗利用消銀湯對豚鼠銀屑病樣動物模型進行研究,檢測豚鼠血清中腫瘤壞死因子(TNF)-α和干擾素(IFN)-γ的水平,為臨床應用提供實驗依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 動物

    白色豚鼠53只,普通級,體質量為300g~350g,雌雄兼用,由重慶醫(yī)科大學實驗動物中心提供,合格證號:SYXK(渝)2012-0001。

    1.2 藥物

    消銀湯藥物組成:黃芩10g、生地15g、牡丹皮12g、赤芍15g、半枝蓮30g、白花蛇舌草15g、槐花10g、紫草10g、玄參15g、丹參15g、雞血藤15g和甘草6g。制備方法:稱取各藥材,用水煎煮制備,共煎煮兩次,煎出液合并,濃縮到每劑藥168ml。消銀湯的人體推薦攝入量為168g·d-1生藥,相當于2.8g·kg-1·d-1生藥(成人以60kg計)。

    1.3 主要試劑及設備

    甲氨蝶呤片(上海信誼藥業(yè)有限公司,批號:20130403),普萘洛爾(山西云鵬制藥有限公司,批號:130801),聚乙烯吡咯烷酮,氮酮(國藥集團化學制劑有限公司,批號:20131115,20131030),豚鼠TNF-α,IFN-γELISA試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司,批號:201311),光學顯微鏡(日本奧林巴斯公司),LP-400酶標儀(法國巴斯德公司)。

    1.4 消銀湯對豚鼠銀屑病樣模型血清中TNF-α、IFN-γ含量的影響

    鹽酸普萘洛爾搽劑制備方法:取鹽酸普萘洛爾5g,用50%乙醇溶解,加入氮酮5mL作為透皮吸收促進劑,加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)5g為成膜材料,最后補加50%乙醇至100mL,攪拌均勻即得[2]。

    取白色豚鼠53只,雌雄兼用,隨機抽取8只作為正常對照組,其余豚鼠用玻棒涂抹普萘洛爾搽劑于兩側耳廓皮膚,用量為0.1mL/cm2,每日兩次,連續(xù)涂抹兩周,制備耳部皮膚銀屑病樣皮損模型(至第2周末,空白組及造模組隨機處死5只豚鼠作耳組織病理學檢查,如出現(xiàn)銀屑病樣病理改變,則提示造模成功)[3]。

    將成模豚鼠40只,隨機分為模型組、消銀湯高(26.0g·kg-1)、中(13.0g·kg-1,等于臨床等效劑量)、低(6.5g·kg-1)劑量組、陽性對照組(甲氨蝶呤0.77mg·kg-1,相當于臨床等效劑量),每組8只。各組灌胃給藥,每天兩次,連續(xù)14d,給藥容積為13ml·kg-1。正常組和模型組給予等量的生理鹽水。末次給藥1h后,腹腔注射20%烏拉坦麻醉豚鼠,切開腹部,暴露腹主動脈,采集全血8mL,室溫靜置30min,3000r·min-1離心15min,吸取上清,置于-80℃保存。用ELISA試劑盒檢測血清中細胞因子TNF-α、IFN-γ含量,具體操作嚴格按照說明書進行。

    1.5 統(tǒng)計學分析

    采用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析,計量資料以均數(shù)±標準差(■±s)表示,組間比較采用單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 消銀湯對豚鼠銀屑病樣模型血清中TNF-α、IFN-γ含量的影響

    與空白對照組相比,模型組豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量均明顯升高(P<0.01);與模型組相比,消銀湯各劑量組及甲氨蝶呤組豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量均明顯降低(P<0.01);消銀湯高劑量組與甲氨蝶呤組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01),見表1:

    表1 消銀湯對豚鼠銀屑病樣模型血清中TNF-α、IFN-γ含量的影響)(■±s,n=8)

    注:與模型組比較aP<0.01;與甲氨蝶呤組比較bP<0.05,cP<0.01.

    3 討論

    銀屑病是一種以紅斑鱗屑為主的慢性炎癥性皮膚病,其病因和發(fā)病機制復雜。目前,銀屑病發(fā)病機制主要有遺傳因素、免疫因素、感染因素、內(nèi)分泌因素、神經(jīng)精神因素等[4]。近年來,大量研究表明銀屑病存在著免疫異常,而細胞因子作為免疫調(diào)節(jié)的物質基礎在銀屑病的發(fā)病中起著重要的作用[5]。TNF-α是一種重要的促炎癥性細胞因子,與銀屑病的發(fā)生密切相關,它能夠促進淋巴細胞浸潤,能夠促進朗格漢斯細胞成熟,能夠促進上皮細胞和成纖維細胞的生長[6]。INF-γ在銀屑病中既可導致角質形成細胞異常增生,又可使T細胞進入表皮增殖活化[7]。

    本實驗結果顯示,模型組豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量明顯高于空白對照組,消銀湯各劑量組對豚鼠血清TNF-α、IFN-γ均有抑制作用,其中消銀湯高劑量組的作用優(yōu)于甲氨蝶呤組,結果提示消銀湯對銀屑病豚鼠模型的治療作用可能與降低血清中TNF-α、IFN-γ的表達水平有關。

    【參考文獻】

    [1]郝平生.豚鼠銀屑病動物模型組織中TNF-α表達及加味涼血消風散的調(diào)控實驗研究[J].成都中醫(yī)藥大學學報,2011,34(3):29-31.

    [2]李濤,李洪梅,李小芹,等.銀屑平顆粒對豚鼠銀屑病動物模型的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16(16):137-139.

    [3]王萍,聶繼紅,孫玉華.雙黃解毒乳膏對銀屑病動物模型作用的實驗研究[J].中成藥,2011,33(7):1227-1229.

    [4]趙辨.中國臨床皮膚病學[M].第1版.南京:江蘇科學技術出版社,2009:1008-1009.

    [5]陳文娟,史玉玲.銀屑病免疫學的研究進展[J].國際皮膚性病學雜志,2015,41(1):31-34.

    [6]郝平生.豚鼠銀屑病動物模型組織中TNF-α表達及加味涼血消風散的調(diào)控實驗研究[J].成都中醫(yī)藥大學學報,2011,34(3):29-31.

    [7]胡祥宇,楊文信.血清中腫瘤壞死因子α、干擾素γ及白介素4與尋常型銀屑病中醫(yī)辨證相關性研究[J].西南軍醫(yī),2015,17(2):156-158.

    [責任編輯:王楠]

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