浙江省玉米紋枯病病原融合群鑒定及致病性研究

韓海亮，譚禾平，趙福成，包 斐，蘇 婷，王桂躍

（浙江省東陽玉米研究所，浙江東陽 322100）

文獻(xiàn)著錄格式：韓海亮，譚禾平，趙福成，等.浙江省玉米紋枯病病原融合群鑒定及致病性研究［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，57（3）：370-372.

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浙江省玉米紋枯病病原融合群鑒定及致病性研究

韓海亮，譚禾平，趙福成，包 斐，蘇 婷，王桂躍*

（浙江省東陽玉米研究所，浙江東陽 322100）

文獻(xiàn)著錄格式：韓海亮，譚禾平，趙福成，等.浙江省玉米紋枯病病原融合群鑒定及致病性研究［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，57（3）：370-372.

摘 要：從浙江省不同玉米產(chǎn)區(qū)采集玉米紋枯病標(biāo)樣，分離純化得到絲核菌65株，融合群鑒定結(jié)果表明，所取樣品屬AG1-ⅠA和AG5融合群，其中AG1-ⅠA為優(yōu)勢融合群，占95.38％。選取不同玉米產(chǎn)區(qū)10株AG1-ⅠA典型菌株和3株AG5菌株進(jìn)行致病力測試，結(jié)果表明，AG1-ⅠA融合群菌株致病力明顯高于AG5融合群菌株，且融合群內(nèi)存在致病力分化。

關(guān)鍵詞：玉米紋枯??；立枯絲核菌；融合群鑒定；致病性

玉米紋枯?。≧hizoctonia solani）是世界上玉米產(chǎn)區(qū)廣泛發(fā)生、危害嚴(yán)重的世界性病害之一。20世紀(jì)70年代以后，隨著玉米種植面積的擴(kuò)大，雜交種的推廣應(yīng)用，施肥量及種植密度的提高，玉米紋枯病在我國的發(fā)生發(fā)展日趨嚴(yán)重，現(xiàn)已成為我國玉米產(chǎn)區(qū)的主要病害之一，尤其在我國西南和南方玉米種植區(qū)，由于玉米生長期氣溫高、濕度大，紋枯病已成為玉米第一大病害。

近幾年來，浙江省鮮食玉米面積不斷擴(kuò)大，玉米紋枯病的發(fā)生也漸趨嚴(yán)重，春季玉米從玉米拔節(jié)期開始，尤其是進(jìn)入梅雨季節(jié)以后，由于田間氣溫高，濕度大，玉米紋枯病發(fā)生嚴(yán)重，一般情況下發(fā)病株占全部植株的50％以上，嚴(yán)重田塊甚至達(dá)到100％［1］。玉米紋枯病危害葉鞘，造成底部葉片過早枯死，部分品種由于不抗病且穗位較低，紋枯病可直接危害果穗，形成穗腐，造成嚴(yán)重的產(chǎn)量損失。

玉米紋枯病有3種病原菌，主要是立枯絲核菌。根據(jù)前人的研究結(jié)果，玉米紋枯病菌根據(jù)菌絲融合情況分為不同的融合群，有專家對(duì)華北、西南、華中等地區(qū)的玉米紋枯病菌進(jìn)行過系統(tǒng)的相關(guān)研究，明確了當(dāng)?shù)貎?yōu)勢菌絲融合群以及優(yōu)勢致病病原菌融合群［2-6］，而浙江地區(qū)由于玉米種植面積小，此前無人對(duì)此做過專門的研究，作者對(duì)浙江省玉米紋枯病病原菌融合群進(jìn)行了分析，對(duì)優(yōu)勢病株進(jìn)行了致病性測定，為今后玉米育種和在生產(chǎn)上防治玉米紋枯病提供重要的理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1材料

2013年秋季和2014年夏季在玉米紋枯病發(fā)病盛期，在浙江省8個(gè)縣（市）采集典型玉米紋枯病樣本共75份，主要為發(fā)病葉鞘和菌核。采用水瓊脂分離法純化，得到絲核菌65株。從四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所獲得融合群標(biāo)準(zhǔn)菌株AG1-ⅠA，AG1-ⅠB，AG1-ⅠC，AG1-ⅢB，AG4，AG5和WAG-Z。研究用的培養(yǎng)基主要有馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）和水瓊脂（WA）培養(yǎng)基。玉米紋枯病病級(jí)測定植株用感病品種浙糯玉7號(hào)4葉1心期幼苗。

1.2方法

1.2.1紋枯病病原菌分離純化

采用水瓊脂培養(yǎng)基，按照周而勛等［7］報(bào)道的絲核菌快速分離方法分離菌株。從樣本中獲得絲核菌菌株，經(jīng)單菌絲分離后，根據(jù)Parmeter［8］報(bào)道的立枯絲核菌種的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)過形態(tài)鑒定和核相觀察，對(duì)各菌株進(jìn)行鑒定。

1.2.2絲核菌菌株核相鑒定

參照黃江華等［9］的方法使用0.5％KOH-番紅O對(duì)菌絲染色后，在光學(xué)顯微鏡下鑒定細(xì)胞核數(shù)目，區(qū)分雙核和多核絲核菌。

1.2.3菌絲融合群鑒定

參考陳延熙等［10］的玻片配對(duì)法。將鑒定出的立枯絲核菌菌株分別與各融合群標(biāo)準(zhǔn)菌株配對(duì)進(jìn)行融合觀察，在兩菌菌絲交疊處滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.001％的苯胺蘭乳酚油稀釋液，加蓋玻片后鏡檢［11］，根據(jù)待測菌株與某一標(biāo)準(zhǔn)菌株間的菌絲融合現(xiàn)象判定其融合群種類。

1.2.4致病性測定

經(jīng)判定后的各融合群取10個(gè)代表菌株，將其移植于PDA平板上，25℃下培養(yǎng)至菌絲鋪滿培養(yǎng)皿。將木質(zhì)牙簽剪成2 cm左右小段，放置于裝有15 m L PDB培養(yǎng)液的三角瓶中，滅菌后接入待測菌株，待牙簽上布滿菌絲后，將牙簽接入玉米浙糯玉7號(hào)4葉1心期幼苗的第1葉鞘，每菌株接種10株，以不接種為對(duì)照，每菌株重復(fù)3次，每天澆水1次，保證土壤表面濕潤。15 d后進(jìn)行病級(jí)調(diào)查，計(jì)算病情指數(shù)。

病級(jí)分成5級(jí)，標(biāo)準(zhǔn)如下［3］：0級(jí)不發(fā)??；1級(jí)病害發(fā)展到第1葉鞘；2級(jí)病害發(fā)展到第2葉鞘；3級(jí)病害發(fā)展到第3葉鞘；4級(jí)病害發(fā)展到第3葉鞘以上，或植株死亡。

2　結(jié)果與分析

2.1形態(tài)特征

采集到的典型玉米紋枯病樣本75份，經(jīng)水瓊脂分離法得到絲核菌65株，形態(tài)特征符合Parmeter等［8］報(bào)道的菌絲分類特征。

經(jīng)0.5％KOH-番紅O染色后，鏡檢表明65株菌株均為多核菌株，未發(fā)現(xiàn)雙核菌株。

2.2菌絲融合群

將65個(gè)不同地區(qū)分離得到的立枯絲核菌菌株與7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌株融合群進(jìn)行融合測定，結(jié)果（表1）表明，所有菌株分別屬于AG1-ⅠA和AG5 2個(gè)融合群，其中AG1-ⅠA融合群為優(yōu)勢群，共62份，占95.38％，3個(gè)菌株屬AG5融合群，占4.62％；AG1-ⅠA和AG5融合群菌株地域分布無明顯規(guī)律。

2.3致病性

在62個(gè)屬于AG1-ⅠA融合群中選出10個(gè)生長旺盛的菌株和3株AG5菌株對(duì)浙糯玉7號(hào)接種結(jié)果（表2）表明，所有接種玉米植株幾乎100％發(fā)病，但AG1-ⅠA融合群菌株致病力明顯高于AG5融合群菌株，AG1-ⅠA融合群中不同菌株之間致病力也有一定差異，致病力最高的為PA1408菌株，平均病指達(dá)到79.17。

表1　不同取樣地點(diǎn)采集的立枯絲核菌融合群分類及數(shù)量

表2　不同立枯絲核菌融合群菌株對(duì)浙糯玉7號(hào)的致病性表現(xiàn)

3　小結(jié)與討論

本研究初步明確了浙江省玉米紋枯病病原菌的融合群為AG1-ⅠA和AG5融合群。其中AG1-ⅠA融合群為浙江省優(yōu)勢菌群，各縣（市）均有分布，AG5融合群只在磐安、淳安和縉云等地樣品中鑒定到?？祖面玫龋?］在東北地區(qū)鑒定結(jié)果表明，AG1-ⅠA所占比例為73.41％，其次為AG5，占22.54％。牛福芳［3］對(duì)山東、安徽、江蘇、湖北和陜西5省取樣測定結(jié)果表明，AG1-ⅠA為主要融合群，占鑒定總數(shù)的84.80％。崔麗娜［6］對(duì)西南地區(qū)取樣測定結(jié)果表明，AG1-ⅠA檢出率達(dá)到80.6％。這些研究結(jié)果均與本研究結(jié)果相似。致病性測定結(jié)果表明，AG1-ⅠA融合群的致病力較高，但內(nèi)部存在致病力分化，致病力最高的菌株為PA1408，此菌株可作為以后品種抗性鑒定的標(biāo)準(zhǔn)菌株使用。

在致病性測定時(shí)發(fā)現(xiàn)，AG1-ⅠA融合群菌株接種后能形成玉米紋枯病典型的云紋斑，而AG5接種形成的癥狀不典型，多為葉鞘的連片水漬狀壞死干枯，這與牛福芳在其研究中的描述相似。在取樣時(shí)要求取典型病斑葉鞘和菌核可能是導(dǎo)致AG1-ⅠA融合群檢出率大大高于其他融合群的原因。

本研究取樣范圍有一定代表性但仍不夠完善，只能基本反映浙江省玉米紋枯病病原概況，本試驗(yàn)只檢測出AG1-ⅠA和AG5 2個(gè)融合群，而他人的研究還檢出了少量的AG1-ⅠB，AG2，AG4和WAGZ等融合群，以后還需要進(jìn)一步擴(kuò)大病樣的取樣范圍，取樣時(shí)對(duì)不典型的病斑樣品要重點(diǎn)采集，全面了解浙江省玉米紋枯病的病原，為抗性品種選育和病害防治提供基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

［1］王兆富，聞祿，胡美靜，等.玉米紋枯病的發(fā)生規(guī)律及防治策略展望［J］.遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011（6）41-46.

［2］孔婷婷，周曉錕，高增貴，等.東北地區(qū)玉米紋枯病菌菌絲融合群鑒定及其致病力研究［J］.玉米科學(xué)，2013，21 （4）：132-137.

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［11］方中達(dá).植病研究方法［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998.

（責(zé)任編輯：張才德）

通信作者：王桂躍，E-mai1：zjdygy@163.com。

作者簡介：韓海亮（1984—），男，助理研究員，主要從事玉米病蟲害綜合治理工作。

基金項(xiàng)目：國家現(xiàn)代玉米產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)（CARS-02）；浙江省農(nóng)科院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目

收稿日期：2016-01-04

中圖分類號(hào)：S435.132

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：0528-9017（2016）03-0370-02

DOI：10.16178/j.issn.0528-9017.20160324