白細胞介素8基因多態(tài)性與卵巢癌發(fā)生的關(guān)系

陳 雪，張建潔，袁 琳，王婧娜，馬冬霞

(華北石油管理局總醫(yī)院：1婦產(chǎn)科，2神經(jīng)內(nèi)科， 任丘 062550)

卵巢癌是婦科腫瘤中導致婦女死亡的主要病因，大多數(shù)患者在確診時已經(jīng)發(fā)展到晚期[1,2]。卵巢癌晚期5年生存率僅為30%，約有70%的患者在確診時已為晚期[3-5]。研究發(fā)現(xiàn)免疫系統(tǒng)在腫瘤的發(fā)生中起重要作用，趨化因子參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。白細胞介素8(interleukin 8, IL-8)是趨化因子家族的成員，在免疫過程中發(fā)揮募集和活化中性粒細胞的作用。研究發(fā)現(xiàn)IL-8參與血栓形成及新生血管形成，且在多種人類腫瘤組織中高表達，IL-8在慢性感染、炎癥和腫瘤進展過程中起重要作用，其過表達可能提示腫瘤易感性升高或臨床病理特征改變，研究發(fā)現(xiàn)IL-8通過調(diào)節(jié)腫瘤應答及促進血管形成在腫瘤的發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用[6，7]。本研究旨在研究IL-8+781基因多態(tài)性與患者卵巢癌發(fā)生易感性之間的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集2014年1月至2014年12月在華北石油管理局總醫(yī)院婦產(chǎn)科確診的卵巢癌患者，以病理結(jié)果為診斷依據(jù)，同時在門診就診患者中收集與病例組年齡相匹配的健康女性作為健康對照組。本研究已通過華北石油管理局總醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會論證審批，所有參與研究患者均已了解研究目的并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 標本的收集及處理 取研究對象約2 ml外周血于抗凝管中，用常規(guī)方法提取外周血DNA，測定DNA濃度，保存于-80℃待用。

1.2.2 聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)分析 PCR-RFLP分析IL-8+781基因多態(tài)性，聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)正向引物：CTCTAACTCTTTATATAAGGAATT，反向引物：GATTGATTTTATCAACAGGCA。PCR反應體系如下：100 ng DNA，1×PCR緩沖液，0.2 mmol/L dNTP，2 mmol/L MgCl2，50 pmol正反向引物及Ampli-Taq Gold DNA 聚合酶；PCR反應條件如下：95℃ 3 min預變性，95℃ 30 s，50℃ 60 s、72℃ 60 s循環(huán)35次，延伸72℃ 10 min。

1.2.3 位點檢測 PCR擴增后，產(chǎn)物用5UEcoRⅠ限制酶37℃ 3 h，然后用2%的瓊脂糖凝膠電脈鑒定基因型。經(jīng)EcoRⅠ限制酶酶切后可產(chǎn)生184 bp和19 bp的片段，位點是C還是T取決于EcoRⅠ限制酶是否發(fā)生作用，如果位點是C則產(chǎn)生184 bp和19 bp兩條片段。

1.3 統(tǒng)計學處理

應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。Hardy-Weinberg平衡檢驗分析納入研究者是否具有代表性；卡方檢驗分析基因型分布差異；多因素logistic回歸分析卵巢癌發(fā)生的風險，以比值比(OR)及95%可信區(qū)間(CI)表示相對危險度。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 納入研究對象基本特征

從2014年1月至2014年12月，共有81例卵巢癌患者(病例組)和100名健康志愿者(對照組)納入本研究，年齡分別為(56.9±8.9)歲和(57.1±7.2)歲。根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期，81例卵巢癌患者中，9例(11.1%)為FIGO Ⅰ期，8例(9.9%)為FIGO Ⅱ期，55例(67.9%)為FIGO Ⅲ期，9例(11.1%)為FIGO Ⅳ期(表1)。

2.2 IL-8+781基因型與卵巢癌發(fā)生的風險

表1 卵巢癌患者一般情況

FIGO: International Federation of Gynecology and Obstetrics; TNM: tumor, nodes and metastasis

納入研究的病例組和對照組基因型和等位基因頻率均符合Hardy-Weinberg平衡定律(病例組χ2=0.369，P=0.538；對照組χ2=1.988，P=0.161)，說明納入的研究對象有良好的代表性。病例組與對照 IL-8+781基因型和等位基因分布如表2所示，IL-8+781基因型在兩組間分布差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.202, df=2,P=0.027)、等位基因在兩組間分布差異也具有統(tǒng)計學意義(χ2=6.274, df=2,P=0.015)，因此IL-8+781基因型可能影響卵巢癌的發(fā)生。多因素logistic回歸分析判斷卵巢癌發(fā)生的風險，結(jié)果如表3所示，攜帶基因型TT發(fā)生卵巢癌的風險顯著高于攜帶基因型CC(OR=3.385, 95%CI: 1.361～8.418;P=0.009)，攜帶等位基因T發(fā)生卵巢癌風險顯著高于等位基因C(OR=1.704, 95%CI:1.122～2.590；P=0.013)；IL-8+781基因型在本組卵巢癌患者FIGO各分期的分布差異有統(tǒng)計學意義(P=0.032；表4)，表明FIGO分期與IL-8+781基因型有密切關(guān)系。

3 討 論

IL-8是趨化因子家族，可由多種細胞(如單核細胞、巨噬細胞、成纖維細胞等)分泌產(chǎn)生，主要介導中性粒細胞的激活及從外周血遷移到組織，參與免疫系統(tǒng)的啟動和擴大，因此與多種疾病的發(fā)生有密切關(guān)系[8,9]。IL-8可能參與前列腺癌、直腸癌和卵巢癌的發(fā)生，并且有研究發(fā)現(xiàn)IL-8可以作為卵巢癌的生物標志物。在卵巢癌患者中，發(fā)現(xiàn)患者腹水、血清以及腫瘤組織中IL-8表達升高。另外，一些研究也發(fā)現(xiàn)IL-8可能參與卵巢癌的病程發(fā)展。IL-8基因位于染色體4q13-21，有4個外顯子、3個內(nèi)含子和1個遠端啟動子組成，常見的SNP多態(tài)性為-251A/T、+396G/T和+781C/T。

表2 病例組與對照組IL-8+781基因型和等位基因分布比較

IL-8: interleukin 8

表3 IL-8+781基因型與卵巢癌發(fā)生風險的相關(guān)回歸研究

IL-8: interleukin 8

表4 卵巢癌患者FIGO各分期IL-8+781基因型分布情況

FIGO: International Federation of Gynecology and Obstetrics; IL-8: interleukin 8

既往研究發(fā)現(xiàn)IL-8基因多態(tài)性與腫瘤的發(fā)生(如胃癌、肺癌、結(jié)直腸癌等)有相關(guān)性，本研究旨在研究IL-8+781基因多態(tài)性與中國人卵巢癌發(fā)生之間的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-8+781在病例組與對照組間有顯著差異，回歸分析顯示攜帶基因型TT發(fā)生卵巢癌的風險顯著高于攜帶基因型CC(OR=3.385,95%CI:1.361～8.418,P=0.009)，攜帶等位基因T發(fā)生卵巢癌風險顯著高于等位基因C(OR=1.704, 95%CI: 1.122～2.590,P=0.013)。位于IL-8基因內(nèi)含子1內(nèi)的IL-8+781 C/T SNP，位于C/EBPβ結(jié)合序列，這個序列可以被等位基因C破壞，因此IL-8+781SNP可以影響IL-8基因轉(zhuǎn)錄水平[10]。

在IL-8+781基因多態(tài)性與其他疾病的研究中發(fā)現(xiàn)，攜帶基因型TT的患者發(fā)生口腔鱗癌的風險明顯升高[11]，等位基因T與經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)后再狹窄風險相關(guān)[12]。然而，一些研究發(fā)現(xiàn)，等位基因C與哮喘發(fā)生風險相關(guān)[13]，IL-8+781基因多態(tài)性與非小細胞肺癌有關(guān)，等位基因C可能使非小細胞肺癌發(fā)生風險升高。IL-8基因常見的多態(tài)性位點為+781C/T、-251A/T、+1633C/T、+2767A/T，研究發(fā)現(xiàn)IL-8基因不同位點基因多態(tài)性參與多種疾病的發(fā)生，如IL-8+2767A/T位于IL-8基因3’-URT處，有重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)作用，研究發(fā)現(xiàn)IL-8+2767A/T可能對口腔腫瘤、肝細胞腫瘤等的發(fā)生有重要作用[14]。IL-8作為趨化因子家族成員，參與細胞增殖、遷移以及腫瘤的侵襲，促進腫瘤細胞躲避應激誘導的凋亡以及血管生成、腫瘤生長和轉(zhuǎn)移[11,15]。既往研究發(fā)現(xiàn)卵巢癌患者卵巢囊液、腹水以及腫瘤組織中高表達，因此IL-8參與卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展[16]。

本研究發(fā)現(xiàn)IL-8+781基因多態(tài)性可能影響卵巢癌的發(fā)生及分期，將來需要大樣本病例進行進一步的驗證，為未來卵巢癌無創(chuàng)診斷提供思路。

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