巨大血小板對GEN.S血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類的影響

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巨大血小板對GEN.S血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類的影響

李杰

(鐘祥市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科， 湖北 鐘祥431900)

目前血液常規(guī)分析主要使用各種血液分析儀完成，儀器均使用阻抗法原理進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，對于白細(xì)胞分類則采用各種光、電、化學(xué)染色技術(shù)手段。貝克曼- 庫爾特GEN.S血液分析儀(簡稱GEN.S)利用VCS技術(shù)同時(shí)對單個(gè)白細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞體積(V)，高頻電流傳導(dǎo)(C) 及激光散射(S)的分析，從而得到白細(xì)胞五分類的結(jié)果。當(dāng)血液中出現(xiàn)巨大血小板(giant platelet)時(shí)會干擾阻抗法儀器的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果，導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果降低。對于此類標(biāo)本，國際血液學(xué)專家委員會及國內(nèi)專家提出應(yīng)進(jìn)行顯微鏡鏡檢以避免巨大血小板對血小板計(jì)數(shù)的干擾[1,2]，但巨大血小板對白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類的干擾則未見報(bào)道。本研究對GEN.S血液分析儀巨大血小板報(bào)警標(biāo)本進(jìn)行顯微鏡檢復(fù)核，發(fā)現(xiàn)巨大血小板除對血小板計(jì)數(shù)有干擾外尚可干擾白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類結(jié)果，有效的顯微鏡檢可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1材料與方法

1.1儀器與試劑研究使用儀器為貝克曼- 庫爾特GEN.S血液分析儀，試劑為原裝配套試劑，雙目顯微鏡(Olympus公司生產(chǎn))，瑞氏染液(貝索公司生產(chǎn))，牛鮑氏血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，按全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程配制白細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液。

1.2標(biāo)本來源湖北省鐘祥市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科臨檢室2015年3月-6月住院病人血常規(guī)標(biāo)本，其中經(jīng)GEN.S檢測后有巨大血小板陽性提示的血液標(biāo)本共200例(占同期標(biāo)本總數(shù)約2%)。

1.3方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)抽患者靜脈血2 ml于EDTA.K2抗凝管中送檢，在2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行血液分析后取血樣制備血涂片，瑞氏染色后由經(jīng)過細(xì)胞形態(tài)學(xué)專業(yè)培訓(xùn)的主管技師按全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行顯微鏡鏡檢白細(xì)胞分類，總共觀察200個(gè)白細(xì)胞，同時(shí)對血液樣本進(jìn)行手工法白細(xì)胞計(jì)數(shù)。人工鏡檢陽性標(biāo)準(zhǔn)為整張涂片中巨大血小板占血小板總數(shù)的比例大于15%[1]。以手工鏡檢結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，與儀器結(jié)果進(jìn)行對比。

1．4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，定量數(shù)據(jù)使用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，P<0.05為差別具有顯著性。

2結(jié)果

2.1對200例儀器巨大血小板提示陽性的標(biāo)本按文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行血涂片瑞氏染色顯微鏡鏡檢，200例標(biāo)本巨大血小板提示陽性標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)195例(97.5%)巨大血小板比例增高的現(xiàn)象。

2.2將儀器巨大血小板提示陽性的標(biāo)本進(jìn)行手工法白細(xì)胞及血小板計(jì)數(shù)，在200例標(biāo)本中，經(jīng)人工復(fù)核，170例結(jié)果儀器測定與人工鏡檢之間差異無顯著性。30例標(biāo)本提示“Cellular Interference”，檢測結(jié)果中白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果偏高，30例標(biāo)本人工與儀器白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類結(jié)果的比較見表1。

2.3對影響白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類的30例標(biāo)本進(jìn)行巨大血小板數(shù)量(占總數(shù)的百分比)與白細(xì)胞計(jì)數(shù)受干擾程度(增高幅度百分比)的相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)巨大血小板數(shù)量與白細(xì)胞計(jì)數(shù)受干擾程度呈正相關(guān)，y=0.76x+18.2，r2=0.74。

表1　受干擾標(biāo)本人工與儀器檢測白細(xì)胞計(jì)數(shù)及淋巴細(xì)胞

3討論

目前已經(jīng)證實(shí)血液分析時(shí)有核紅細(xì)胞、難溶性紅細(xì)胞等存在可影響白細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，巨大血小板對血小板計(jì)數(shù)產(chǎn)生的影響也多見報(bào)道[3，4]。但巨大血小板對其它血細(xì)胞計(jì)數(shù)尤其是白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類的干擾則未見報(bào)道。本研究主要觀察其對白細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類的影響。GEN.S使用經(jīng)典的電阻抗法進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)，全血樣本經(jīng)溶血素作用后，紅細(xì)胞破壞而保留白細(xì)胞進(jìn)行電阻抗法計(jì)數(shù)。在溶血素的作用下時(shí)血小板并未被破壞，但在正常情況下血小板、紅細(xì)胞碎片等非WBC顆粒體積在35fl以下，由于儀器定義大于35fl的顆粒為WBC并進(jìn)行計(jì)數(shù)，故正常情況下血小板體積與白細(xì)胞差別較大，進(jìn)行電阻抗法計(jì)數(shù)時(shí)產(chǎn)生信號不同，儀器可將其與白細(xì)胞準(zhǔn)確區(qū)分而不干擾白細(xì)胞計(jì)數(shù)。在出現(xiàn)巨大血小板且比例增高時(shí)，由于巨大血小板與白細(xì)胞體積接近且不能被溶血素破壞，進(jìn)行電阻抗法計(jì)數(shù)時(shí)產(chǎn)生信號相似，故對白細(xì)胞計(jì)數(shù)產(chǎn)生干擾(儀器提示“Cellular Interference”)并導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏高。目前在高檔的儀器如LH750血液分析儀上儀器具有白細(xì)胞計(jì)數(shù)自動糾正功能，可以排除大部分此類干擾，但部分標(biāo)本儀器仍舊會受到干擾而導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏高[5]。巨大血小板的數(shù)量越高，體積越大，白細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類受干擾的程度越大，與本研究結(jié)果證實(shí)巨大血小板的數(shù)量與白細(xì)胞計(jì)數(shù)受干擾的程度呈正相關(guān)相符，故對此類結(jié)果應(yīng)予以人工糾正以保證其準(zhǔn)確性。

GEN.S在白細(xì)胞分類中使用VCS技術(shù)同時(shí)對白細(xì)胞進(jìn)行三種不同的參數(shù)分析從而得到白細(xì)胞五分類的結(jié)果。其原理為在分析前使用溶血素(ERYTHROLYSE REAGENT)破壞紅細(xì)胞，然后使用穩(wěn)定劑(STABILYSE REAGENT)中和溶血素并保證白細(xì)胞接近于自然狀態(tài)，此時(shí)五類白細(xì)胞大小(V)，電導(dǎo)率(C)，光散射(S)不同，儀器通過收集8192個(gè)白細(xì)胞的VCS參數(shù)以進(jìn)行VCS分析分類。巨大血小板的VCS各參數(shù)接近于淋巴細(xì)胞，當(dāng)其比例增高時(shí)儀器將其分類為淋巴細(xì)胞，故結(jié)果提示淋巴細(xì)胞比例增高。由于部分血小板被儀器誤認(rèn)為白細(xì)胞，故儀器進(jìn)行白細(xì)胞分類時(shí)分析的白細(xì)胞數(shù)量不足，分類結(jié)果會受到干擾而不可信。人工顯微鏡檢時(shí)，可在顯微鏡下通過細(xì)胞大小、顆粒、折光性、染色等特性不同而對白細(xì)胞與血小板進(jìn)行區(qū)分，故可準(zhǔn)確計(jì)數(shù)并分類。

目前各醫(yī)院血液分析均使用各類儀器進(jìn)行，儀器進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)均使用經(jīng)典的電阻抗法，干擾因素較多。從本研究結(jié)果可以看出，血液分析標(biāo)本巨大血小板報(bào)警陽性率約2%，其中有97.5%證實(shí)為真陽性標(biāo)本。在真陽性標(biāo)本中有15%的標(biāo)本對除血小板計(jì)數(shù)產(chǎn)生干擾外也對白細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類產(chǎn)生干擾。使用GEN.S進(jìn)行血液分析時(shí)，對于儀器如出現(xiàn)巨大血小板報(bào)警陽性的標(biāo)本，在進(jìn)行人工鏡檢復(fù)核血小板數(shù)量時(shí)，必須注意血小板對白細(xì)胞數(shù)量與分類的干擾，進(jìn)行人工白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類才能保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。某些血小板系統(tǒng)疾病會出現(xiàn)血小板數(shù)量及形態(tài)的改變，人工顯微鏡檢除了保證結(jié)果的準(zhǔn)確性以外也是血小板系統(tǒng)疾病診斷的標(biāo)準(zhǔn)之一[6,7]。故人工顯微鏡鏡檢仍然是對儀器結(jié)果進(jìn)行復(fù)核的金標(biāo)準(zhǔn)。

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(收稿日期：2015-09-06)

文章編號：1007-4287(2016)03-0480-02