二至丸對更年期綜合征模型大鼠的實(shí)驗研究

朱志芳 　白建民 　鄧敏貞

【摘 要】 目的：研究二至丸對更年期模型大鼠的影響。方法：將SPF級雌性SD大鼠60只隨機(jī)分成假手術(shù)對照組、模型對照組、更年欣膠囊組（4mg/kg）、二至丸高（600mg/kg）、中（300mg/kg）、低（150mg/kg）劑量組，各組灌胃給予相應(yīng)的藥物連續(xù)30d。除假手術(shù)對照組外，給藥30d后對其余5組大鼠通過手術(shù)將0.2ml無水乙醇注射到卵巢內(nèi)1次，建立更年期綜合征模型大鼠。觀察大鼠給藥前后體質(zhì)量的變化，測定血清中雌二醇（E2）、促卵泡成熟激素（FSH）、黃體生成素（LH）、催乳素（PRL）水平，計算子宮系數(shù)和陰道上皮細(xì)胞角化率，以及測定下丘腦5-羥色胺（5-HT）、去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）的含量。結(jié)果：與假手術(shù)對照組比較，模型對照組大鼠的體質(zhì)量緩慢降低，肛溫升高（P<0.05），F(xiàn)SH、LH和PRL水平明顯升高（P<0.05） ，E2水平明顯減少（P<0.01）；陰道上皮細(xì)胞角化率和子宮系數(shù)明顯下降（P<0.01）；降低下丘腦5-HIAA/5-HT （P<0.05），增加NE/DA （P<0.05）；與模型對照組相比較，二至丸各劑量組大鼠體質(zhì)量增長較模型組快，肛溫下降（P<0.05）；FSH、LH水平明顯降低（P<0.01）；PRL水平明顯降低（P<0.05） ，E2水平明顯升高（P<0.05）；陰道上皮細(xì)胞角化率明顯提高（P<0.01）；子宮系數(shù)增加（P<0.05）；增加下丘腦5-HIAA/5-HT （P<0.05），減少NE/DA （P<0.05）。結(jié)論：二至丸能既可以改善性激素，又可以增加更年期綜合征模型大鼠下丘腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量，從而達(dá)到緩解更年期癥狀的作用。

【關(guān)鍵詞】 二至丸；絕經(jīng)綜合征；神經(jīng)遞質(zhì)；性激素；

【中圖分類號】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）06-0034-04

更年期綜合征多因婦女在圍絕經(jīng)前后因卵巢功能逐漸衰退以致雌激素水平下降，引起以植物神經(jīng)功能紊亂代謝障礙為主的一系列癥候群[1]。更年期綜合征見于中醫(yī)古籍的“臟躁”、“郁證”、“崩漏”、“月經(jīng)不調(diào)”等病證中，現(xiàn)代中醫(yī)將其命名為“絕經(jīng)前后諸癥”[2]。該病表現(xiàn)為五心煩熱、烘熱汗出、四肢麻木、時冷時熱等陰陽失調(diào)的癥狀[2]。西醫(yī)學(xué)一般認(rèn)為卵巢功能的衰退是引起更年期各種癥狀的主要原因，應(yīng)用雌激素替代療法治療婦女更年期綜合征，雖能緩解部分癥狀，但是毒副作用較大[2]。二至丸出自清代江昂《醫(yī)方集解》，具有補(bǔ)腰膝，壯筋骨，益腎陰的功效[4]，臨床常用于更年期相關(guān)疾病的治療[5]。本實(shí)驗采用手術(shù)方式制備更年期綜合征大鼠模型，觀察二至丸對模型大鼠生殖內(nèi)分泌和神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)節(jié)，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 材料 二至丸（批號：990910，蘇州雷允上制藥廠）；雌二醇（E2）、黃體生成激素（LH）、促卵泡激素（FSH）、催乳素（PRL）放免試劑盒（批號：116408，美國Beckman公司）；5-羥色胺（5-HT）、去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）標(biāo)準(zhǔn)品（美國Sigma公司）；更年欣膠囊（批號：120702，通化方大藥業(yè)股份有限公司）。

1.2 實(shí)驗動物 SD雌性大鼠，SPF級，體質(zhì)量220～250g，動物正常飼養(yǎng)5d后用于以下實(shí)驗，由鄭州大學(xué)實(shí)驗動物中心提供。動物合格證號：SCXK（豫）2010-0002。

1.3 儀器 ACCESS型全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（美國BECKMAN COULTER公司）；AE-200型電子分析天平（美國METTLER公司）；2695型高效液相色譜儀（美國Waters公司）。

2 方法

2.1 造模[6]雌性大鼠用10%水合氯醛（35mg/kg），腹腔麻醉，腹位固定然后取最末肋骨下、腋中線和距脊柱外側(cè)約2cm交叉處，剪除長毛，常規(guī)皮膚消毒，切開皮趺和背肌約1.5～2.0cm，在切口視野中白色發(fā)亮的脂肪團(tuán)中找出卵巢，輕輕夾住脂肪團(tuán)拉出切口外，模型組用0.5ml的注射器將0.2ml無水乙醇注射到卵巢內(nèi)，假手術(shù)組僅作注射針刺動作而無任何液體，然后順勢將卵巢送回腹腔中，縫合創(chuàng)面，皮膚消毒，腹腔注射青霉素20萬單位，連續(xù)3d，以防手術(shù)感染。

2.2 分組與給藥 取雌性大鼠60只，隨機(jī)分成假手術(shù)組及造模組，假手術(shù)組10只，造模組50只。適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后，將造模組大鼠按體質(zhì)量分5組，分別為模型對照組，更年欣膠囊組（4mg/kg），二至丸高（600mg/kg）、中（300mg/kg）、低（150mg/kg）劑量組。各組連續(xù)灌胃給予相應(yīng)的藥物30d，每天一次。

2.3 觀察與檢測方法

2.3.1 一般觀察 觀察雌性大鼠給藥前后毛發(fā)、舌質(zhì)的變化，分別于給藥前及給藥后第5、15、30天測雌性大鼠體質(zhì)量及直腸溫度。

2.3.2 陰道上皮細(xì)胞角化的檢測 末次給藥2h后，用生理鹽水浸濕的棉簽輕擦雌性大鼠陰道，取出后作陰道涂片，瑞氏染色后光鏡下觀察，計算陰道上皮細(xì)胞角化率。

2.3.3 生殖內(nèi)分泌激素的測定 末次給藥后1d，10%水合氯醛（35mg/kg）腹腔麻醉，腹主動脈采動脈血，3500r/min離心10min制備血清，采用放射免疫分析法測定血清中E2、LH、FSH、PRL的含量水平。

2.3.4 下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)測定 將取血后的雌性大鼠迅速斷頭取腦，用化學(xué)熒光法測定下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、NE、DA、5-HIAA含量。色譜條件：色譜柱為依利特 C18（150mm×4mm，5μm），流動相： 50mmol/l檸檬酸-乙酸鈉緩沖液，流速1.0ml/min，波碳電極，檢測池電壓為0.75V，柱溫為（20±2）℃。3，4-二羥芐胺（DHBA）為內(nèi)標(biāo)物，樣品各主要組分用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量。

2.3.5 臟器系數(shù)的檢測 雌性大鼠處死后解剖，稱取各只大鼠的子宮重量，計算各組雌性大鼠的臟器系數(shù)。

2.4 統(tǒng)計方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計處理，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 對更年期綜合征模型大鼠體質(zhì)量的影響 由表1可知，與假手術(shù)對照組比較，模型大鼠在第15～30d毛色枯燥不光滑，舌尖色暗紅，體質(zhì)量明顯減少（P<0.01）；與模型組對照比較，二至丸中高劑量組治療后大鼠體質(zhì)量均有顯著增加（P<0.05）。

3.2 對更年期綜合征模型大鼠肛溫的影響 由表2可知，與假手術(shù)對照組比較，模型對照組大鼠肛溫明顯增高（P<0.05）；與模型對照組比較，給予二至丸和更年欣膠囊治療后，不同時間大鼠升高的肛溫均有所降低，給藥5d后，二至丸中劑量組大鼠肛溫顯著降低（P<0.01）；給藥15d后，二至丸高、中、低劑量組肛溫均明顯降低（P<0.05）；其中給藥30d后，二至丸中、高劑量組顯著降低大鼠肛溫（P<0.01）。

3.3 對更年期綜合征大鼠臟器系數(shù)及陰道上皮細(xì)胞角化程度的影響 由表3可知，與假手術(shù)對照組比較，模型對照大鼠子宮系數(shù)和陰道上皮細(xì)胞角化程度明顯降低（P<0.01）；與模型對照組比較，二至丸中、高劑量組能明顯增加模型大鼠子宮系數(shù)（P<0.05），陰道上皮細(xì)胞角化程度明顯增加（P<0.01）。

3.4 對更年期綜合征大鼠陰道上皮細(xì)胞角化程度的影響 由圖1可知，與假手術(shù)組比較，模型對照組的角化細(xì)胞較少。與模型對照組比較，更年欣膠囊組合二至丸各劑量組的角化細(xì)胞都有一定程度增加。

3.5 對更年期綜合征模型大鼠血清生殖內(nèi)分泌激素的影響 由表4可知，與假手術(shù)對照組比較，模型對照組的血清E2水平明顯降低，F(xiàn)SH、LH、PRL水平明顯升高；與模型對照組比較，二至丸高、中、低劑量組均能明顯增加模型大鼠E2水平（P<0.05或P<0.01），中高劑量組能明顯降低模型大鼠血清FSH、LH水平（P<0.01），二至丸各劑量組明顯降低大鼠血清中PRL水平（P<0.05或P<0.01）。

3.6 對更年期綜合征模型大鼠下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)的影響 由表5可知，與假手術(shù)對照組比較，模型大鼠下丘腦5-HIAA/5-HT明顯升高（P<0.05），NE/DA含量明顯降低（P<0.01）；與模型對照組比較，二至丸中高劑量組能明顯降低模型大鼠下丘腦5-HIAA/5-HT含量（P<0.05），增加NE/DA含量（P<0.05）。

4 討論

更年期綜合征的表現(xiàn)多見于陰虛內(nèi)熱，陰虛內(nèi)熱癥狀是由于腎氣虛，天癸竭，沖任脈虛，氣血臟腑功能失調(diào)，陰陽失衡所致[7]。腎臟元?dú)鉃橄忍熘?，五臟之根，生命之門，人的生、長、壯、老、已均由腎中精氣的盛衰來決定。婦女至絕經(jīng)前后，精血衰少，沖任虛損，故易使體內(nèi)陰陽失調(diào)、臟腑氣血功能紊亂而發(fā)病[8]。大多以肝腎陰虛和火旺為主，故應(yīng)滋補(bǔ)其陰和清虛火、寧心安神。更年期婦女由于卵巢功能衰退和紊亂，雌激素分泌減少，反饋性引起垂體分泌功能亢進(jìn)，促性腺激素分泌過多，使下丘腦-垂體-卵巢性腺軸調(diào)節(jié)功能紊亂，內(nèi)分泌失調(diào)，進(jìn)而出現(xiàn)植物神經(jīng)、心血管系統(tǒng)功能紊亂、新陳代謝失常的一系列癥候群[9]。造模方法模擬更年期發(fā)生的過程，發(fā)現(xiàn)與文獻(xiàn)報道絕經(jīng)期婦女LH、FSH升高相吻合[10-11]。

二至丸的女貞子甘苦涼，滋腎養(yǎng)肝，《神農(nóng)本草經(jīng)》記載：“女貞子主補(bǔ)中，安五臟，養(yǎng)精神，除百病”；旱蓮草甘酸寒，養(yǎng)陰益精，涼血止血，二藥合用補(bǔ)益肝腎，減少更年期婦女腎氣漸衰，腎陰虧虛引起的頭暈耳鳴、腰膝酸軟的癥狀。該方兩藥合用共奏養(yǎng)血清熱、滋補(bǔ)肝腎之功[12]。由于更年期綜合征患者常因平素性情抑郁，或因病而致心情更為緊張，導(dǎo)致肝郁氣滯，或因腎陰虛而不足以養(yǎng)肝而致肝郁不疏，或脾病及肝，肝病及脾，心脾兩虛而生諸癥，用二至丸對此癥也有治療作用。

研究表明，二至丸對更年期綜合征模型大鼠能降低肛溫（P<0.05或P<0.01），增加血清E2水平（P<0.05或

P<0.01），降低血清FSH、LH、PRL水平（P<0.05或P<0.01），降低下丘腦5-HIAA/5-HT （P<0.05），增加NE/DA （P<0.05），增加子宮系數(shù)（P<0.05），陰道上皮細(xì)胞角化程度明顯增加（P<0.01），為二至丸在臨床上治療絕經(jīng)綜合征提供了實(shí)驗依據(jù)。且葉雪清研究[13]認(rèn)為下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)含量與比值的改變，可能是性腺軸系統(tǒng)老化的始動因素。因此，從治療更年期綜合征的效果而論，二至丸有一定的調(diào)整內(nèi)分泌失調(diào)及植物神經(jīng)功能紊亂的作用。

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（收稿日期：2016.01.04）