生精功能障礙患者Y染色體AZF基因微缺失觀察

孫思，李艷，吳薇

(武漢大學人民醫(yī)院，武漢430060)

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生精功能障礙患者Y染色體AZF基因微缺失觀察

孫思，李艷，吳薇

(武漢大學人民醫(yī)院，武漢430060)

摘要：目的觀察生精功能障礙患者Y染色體無精子因子(AZF)基因微缺失發(fā)生情況。方法 選擇380例生精功能障礙患者為病例組，選擇50例健康男性志愿者為對照組。采用多重PCR技術(shù)檢測兩組Y染色體AZF基因6個序列標簽位點，包括AZFa區(qū)的SY84、SY86，AZFb區(qū)的SY127、SY134，AZFc區(qū)的SY254、SY255。結(jié)果病例組Y染色體AZF基因微缺失23例(6%)，對照組無微缺失，兩組相比，P<0.05。檢出AZF基因微缺失的患者中，無精子癥17例、嚴重少精子癥5例、少弱精子癥1例；20例為單位點微缺失，3例(均為無精子癥患者)為多位點聯(lián)合缺失；SY127缺失2例，SY134缺失1例，SY254缺失7例，SY255缺失16例。結(jié)論 部分生精功能障礙患者存在Y染色體AZF基因微缺失，以AZFb區(qū)及AZFc區(qū)位點缺失為主，其中SY255缺失較為多見。

關(guān)鍵詞：Y染色體；無精子因子基因；生精功能障礙；無精子癥；少精子癥；弱精子癥

研究[1]表明，精子的發(fā)生調(diào)控與Y染色體無精子因子(AZF)密切相關(guān)。AZF基因缺失引起的生精障礙是導(dǎo)致男性不育的重要原因，表現(xiàn)為原發(fā)性無精子癥和少精癥。其中AZFa區(qū)(SY84、SY86)缺失導(dǎo)致青春期前精子發(fā)生阻滯[2,3]；AZFb區(qū)(SY127、SY134)缺失導(dǎo)致減數(shù)分裂前期或減數(shù)分裂中精子發(fā)生阻滯；AZFc區(qū)(SY254、SY255)缺失可導(dǎo)致精液檢查表現(xiàn)為無精、少精或弱精。本研究觀察了生精功能障礙患者Y染色體AZF基因微缺失發(fā)生情況，現(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料2011年7月~2015年7月就診的生精功能障礙患者380例(病例組)，年齡24~51歲，無精子癥122例、嚴重少精子癥53例、少弱精子癥205例。選擇健康男性志愿者50例為對照組，年齡22~50歲。兩組年齡資料具有可比性。

1.2Y染色體AZF基因檢測以ZFY、SRY作為內(nèi)參照；所測Y染色體基因位點包括SY84、SY86、SY127、SY134、SY254、SY255。用Primer Premier5軟件設(shè)計引物，引物序列見表1。采用QIAGEN QIAcube全自動核酸純化系統(tǒng)從全血中提取DNA。取 PCR反應(yīng)管4支，在管壁上分別做好Ⅰ(ZFY)、Ⅱ(SRY)、Ⅲ(SY254、SY86、SY127)、Ⅳ(SY84、SY134、SY255)標記，各加入PCR反應(yīng)液(2×premix)10 μL、DNA模板4 μL，加入相對應(yīng)的PCR引物2 μL，最后加入無菌水4 μL至20 μL。PCR反應(yīng)程序：50 ℃ 10 min；95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 90 s，72 ℃ 1 min，共35個循環(huán)；72 ℃ 10 min；4 ℃ 10 min。將PCR產(chǎn)物各上樣10 μL，配制4%瓊脂糖凝膠進行電泳，應(yīng)用全自動凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果。

1.3統(tǒng)計學方法率的比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

病例組Y染色體AZF基因微缺失23例(6%)，對照組無微缺失，兩組相比，P<0.05。檢出AZF基因微缺失的患者中，無精子癥17例(17/122)、嚴重少精子癥5例(5/53)、少弱精子癥1例(1/205)；20例為單位點微缺失，3例(均為無精子癥患者)為多位點聯(lián)合缺失；SY127缺失2例，SY134缺失1例，SY254缺失7例，SY255缺失16例。

3討論

目前認為Y染色體包含一些精子生成相關(guān)基因，Yq11同源染色體間大的重復(fù)序列發(fā)生重組會導(dǎo)致AZFa、AZFb、AZFc微缺失，進而引起無精子癥或嚴重少精子癥，導(dǎo)致原發(fā)性不育[4]。AZF基因區(qū)域6個序列標簽位點SY84、SY86、SY127、SY134、SY254、SY255缺失導(dǎo)致的男性不育占95%[5~7]。

本研究選擇了AZF基因區(qū)域6個特異位點，采用多重PCR檢測，發(fā)現(xiàn)380例生精障礙患者中AZF基因微缺失率為6%，近年來國內(nèi)外學者對Y染色體AZF基因微缺失檢出率為2%~10%[7~9]，結(jié)果差異可能與研究對象選擇標準及遺傳背景不同、檢測所用序列標簽標記位點密度和位置不同、檢測方法不同有關(guān)。病例組無精子癥患者中，AZF基因缺失率為14%，高于相關(guān)報道；而少精子癥患者缺失率為9%；少弱精子癥缺失率為0.5%，與國內(nèi)外報道結(jié)果相近[10]。無精子癥患者中，AZFc區(qū)單位點缺失14例，AZFb區(qū)、AZFc區(qū)聯(lián)合缺失3例，提示AZF基因區(qū)域大范圍缺失(聯(lián)合缺失)時可表現(xiàn)為無精子癥，而AZFc區(qū)缺失表現(xiàn)為生精能力缺陷[11]。值得注意的是，本研究中AZFc區(qū)位點微缺失率高(87%)，AZFb區(qū)、AZFc區(qū)位點聯(lián)合缺失率為13.0%，絕大多數(shù)AZFc區(qū)單位點微缺失患者生精過程受阻，因此有生育要求的患者需行卵泡胞質(zhì)內(nèi)單精子注射術(shù)輔助生育。

表1　待測基因位點引物序列

本研究未測得AZFa區(qū)位點微缺失，與先前報道有所差異[12]，可能是研究群體和遺傳背景不同所致。病例組中大部分無精子癥患者和少、弱精子癥患者均未檢測到AZF基因微缺失，AZF基因微缺失是否為這部分患者的直接病因尚不明了，可能還存在其他幾類Y染色體缺失機制[13~15]，一些其他未知因素(如肥胖、精索靜脈曲張等)也會影響精子生成從而導(dǎo)致不明原因的生精功能障礙[16]。

總之，部分生精功能障礙患者存在Y染色體AZF基因微缺失情況，Y染色體AZF基因相關(guān)位點檢測對生精功能障礙的診斷有重要參考價值。

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(收稿日期：2015-10-08)

中圖分類號：R715.5

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)07-0071-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.07.027

通信作者：李艷(E-mail: Yanlitf1120@163.com)