子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織中miR-556-3p、VEGF表達變化

易金玲，沈艷麗，馮文廣，劉雁林，朱君

(新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院，烏魯木齊830011)

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子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織中miR-556-3p、VEGF表達變化

易金玲，沈艷麗，馮文廣，劉雁林，朱君

(新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院，烏魯木齊830011)

摘要：目的觀察子宮內(nèi)膜異位癥(EM)患者異位內(nèi)膜組織中miRNA(miR)-556-3p、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達變化，分析miR-556-3p與VEGS表達的相關(guān)性。方法 選擇EM患者36例為病例組，將病例組中卵巢異位內(nèi)膜組織、腹膜異位內(nèi)膜組織、在位內(nèi)膜組織進一步分為病例1、2、3組。另選20例非子宮內(nèi)膜病變患者，取正常子宮內(nèi)膜組織為對照組。采用real-time PCR法檢測miR-556-3p，Western blotting法檢測VEGF蛋白，分析二者表達的相關(guān)性。結(jié)果病例1組、對照組miR-556-3p相對表達量高于病例2組、病例3組，病例3組miR-556-3p相對表達量高于病例2組(P均<0.05)。各組內(nèi)增生期及分泌期內(nèi)膜組織中miR-556-3p相對表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義。病例2組VEGF相對表達量高于其余3組，其中病例1組、病例3組VEGF相對表達量高于對照組(P均<0.05)。病例2、3組miR-556-3p與VEGF表達呈負相關(guān)關(guān)系(r分別為-1.687、-1.105，P均<0.05)。結(jié)論 EM患者異位內(nèi)膜組織中miR-556-3p呈低表達、VEGF呈高表達，以腹膜異位內(nèi)膜組織中表達變化最為明顯。miR-556-3p、VEGF在EM患者腹膜異位內(nèi)膜組織及在位內(nèi)膜組織中表達呈負相關(guān)關(guān)系，二者可能與EM的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

關(guān)鍵詞：子宮內(nèi)膜異位癥；微小RNA；微小RNA-556-3p；血管內(nèi)皮生長因子

子宮內(nèi)膜異位癥(EM)是婦科常見的良性疾病，以痛經(jīng)、月經(jīng)異常、不孕等為主要癥狀。EM形成與發(fā)展的機制尚未完全闡明，大量研究發(fā)現(xiàn)EM發(fā)病與新生血管生成密切相關(guān)[1,2]。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是重要的血管生成因子，可直接作用于內(nèi)皮細胞促使新生血管生成。miRNA是一種內(nèi)生的非編碼小RNA，可通過切斷mRNA分子或抑制其翻譯從而調(diào)控靶基因表達。研究[3]指出，miRNA表達模式異常導(dǎo)致的下游靶基因表達異?？赡苁荅M發(fā)病的重要因素。本研究觀察了EM患者卵巢、腹膜異位內(nèi)膜組織和在位內(nèi)膜組織中miRNA(miR)-556-3p、VEGF的表達變化，并分析miR-556-3p、VEGF表達的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1 臨床資料我院婦科2014年1~12月收治的Ⅲ、Ⅳ期EM患者36例(病例組)，年齡(31.3±3.9)歲；孕次0次6例、1次19例、≥2次11例；均經(jīng)腹腔鏡手術(shù)或開腹手術(shù)觀察及病理檢查確診，且同時出現(xiàn)卵巢及腹膜異位病灶；將病例組卵巢異位內(nèi)膜組織、腹膜異位內(nèi)膜組織、在位內(nèi)膜組織進一步分為病例1、2、3組。選擇同期收治的非子宮內(nèi)膜病變患者20例，年齡(30.9±3.6)歲，孕次0次2例、1次11例、≥2次7例，取正常子宮內(nèi)膜組織為對照組?；颊咴陆?jīng)周期規(guī)律，排除合并心血管系統(tǒng)及其他系統(tǒng)疾病患者、3個月內(nèi)使用性激素治療的患者、6個月內(nèi)有妊娠和哺乳史者。病例組與對照組一般資料具有可比性。

1.2子宮內(nèi)膜組織中miR-556-3p檢測采用real-time PCR法。所有操作嚴格按說明書進行，并以U6為內(nèi)參照。PCR反應(yīng)條件：50 ℃ 2 min，95 ℃ 10 min，45個循環(huán)；95 ℃變性15 s，60 ℃退火及延伸30 s。實驗重復(fù)3次，取均值，以2-ΔΔCt表示miR-556-3p相對表達量。

1.3子宮內(nèi)膜組織中VEGF檢測采用Western blotting法。先以RIPA裂解液提取組織蛋白，依次經(jīng)制膠、上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉等操作后，加入一抗(1∶1 000兔抗人VEGF和1∶1 000兔抗人GADPH)4 ℃孵育過夜，搖床搖動。TBST液清洗3次，每次5 min，后滴加經(jīng)辣根過氧化物酶標記過的二抗，室溫孵育1 h，搖床搖動。清洗，顯色。以GADPH為內(nèi)參照，用GIS1000分析軟件對目的條帶進行灰度值掃描分析，計算VEGF相對表達量。

2結(jié)果

2.1各組miR-556-3p、VEGF表達比較病例1組、對照組子宮內(nèi)膜組織中miR-556-3p相對表達量高于病例2組、病例3組，病例3組miR-556-3p相對表達量高于病例2組(P均<0.05)。病例2組子宮內(nèi)膜組織中VEGF相對表達量高于其余3組，其中病例1組、病例3組VEGF相對表達量高于對照組(P均<0.05)。各組內(nèi)增生期及分泌期內(nèi)膜組織中miR-556-3p相對表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。見表1、2。

表1　各組子宮內(nèi)膜組織中miR-556-3p、

注：與對照組相比，*P<0.05；與病例3組相比，#P<0.05；與病例1組相比，△P<0.05。

表2　各組增生期及分泌期子宮內(nèi)膜組織中

2.2病例組子宮內(nèi)膜組織中miR-556-3p與VEGF表達的相關(guān)性病例2、3組子宮內(nèi)膜組織中miR-556-3p與VEGF表達呈負相關(guān)關(guān)系(r分別為-1.687、-1.105，P均<0.05)。

3討論

EM為育齡婦女常見疾病，發(fā)病率為10%~15%[4]。雖然EM為良性疾病，但其有多種與惡性腫瘤類似的生物學(xué)行為[5]。EM的發(fā)生機制尚未明確，目前子宮內(nèi)膜種植學(xué)說得到學(xué)者們廣泛認可，但無法合理解釋EM為何僅發(fā)生在一部分人群中。學(xué)者們經(jīng)過進一步研究[6]認為EM發(fā)生是遺傳因素、免疫因素、血管因素、雌激素及其受體等多因素共同作用的結(jié)果。近年來研究[7,8]表明，miRNA表達異常所致的表觀遺傳學(xué)紊亂可能是EM發(fā)生發(fā)展的重要機制。

miRNA是真核生物中廣泛存在的一類單鏈小分子RNA，可調(diào)節(jié)細胞增殖、分化、凋亡等病理生理過程。研究表明，miRNA可能作為癌基因或抑癌基因參與多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[9]，其中miR-556-3p參與新生血管生成，VEGF是其靶基因[10]。本研究結(jié)果顯示，不同月經(jīng)周期的子宮內(nèi)膜組織中miR-556-3p表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義；病例1組、對照組子宮內(nèi)膜組織中miR-556-3p相對表達量高于病例2組、病例3組，病例3組miR-556-3p相對表達量高于病例2組，提示miR-556-3p低表達可能與EM的形成有關(guān)，與張銘等[10]的結(jié)果一致。本研究中病例1組與對照組miR-556-3p表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義，可能與組織細胞類型不同有關(guān)。

新生血管生成作為子宮內(nèi)膜種植成功的重要條件，也被認為是EM形成的病理基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn)，血管形成相關(guān)調(diào)控因子如VEGF、腫瘤壞死因子(TNF)等在EM的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[11]。VEGF誘導(dǎo)的血管生成有利于月經(jīng)期子宮內(nèi)膜的修復(fù)。本研究結(jié)果顯示，病例2組子宮內(nèi)膜組織中VEGF相對表達量高于其余3組，其中病例1組、病例3組VEGF相對表達量高于對照組，提示VEGF對EM的發(fā)生有促進作用，且在腹膜異位病灶作用更強[12,13]，這可能與腹膜異位內(nèi)膜組織生長需要更多新生血管和營養(yǎng)物質(zhì)有關(guān)。推測VEGF對EM的促進作用與下列因素有關(guān)[14]：促進新生血管生長和內(nèi)膜細胞增殖；增加微血管通透性，使游離內(nèi)膜組織獲得更多的營養(yǎng)物質(zhì)。

本研究還發(fā)現(xiàn)，病例2、3組子宮內(nèi)膜組織中miR-556-3p與VEGF表達呈負相關(guān)關(guān)系，而病例1組中兩者表達無相關(guān)性，出現(xiàn)這種情況的原因可能是一個生物學(xué)過程受到多個miRNA調(diào)控，不同的miRNA之間形成正負反饋共同調(diào)節(jié)疾病進展過程[10]。我們通過miRNA靶基因預(yù)測軟件Targetscan6.2分析后發(fā)現(xiàn)，VEGF可能是miR-556-3p的靶基因。miR-556-3p低表達可能通過抑制相關(guān)mRNA降解或增加其翻譯，上調(diào)VEGF表達，使新生血管生成增多，從而導(dǎo)致EM的形成和發(fā)展。

綜上所述，EM患者異位內(nèi)膜組織中miR-556-3p呈低表達、VEGF呈高表達，以腹膜異位內(nèi)膜組織中表達變化最為明顯。miR-556-3p的異常表達導(dǎo)致其靶基因VEGF表達增高可能是EM的重要發(fā)病機制。

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(收稿日期：2015-11-09)

中圖分類號：R711.52

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)07-0050-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.07.018

基金項目：新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金資助項目(2014211C123)。