兩個(gè)茄子品種高效再生體系的建立

張玲，王延秀，陳佰鴻，王淑華，石曉昀，黨兆霞

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，甘肅 蘭州　730070)

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兩個(gè)茄子品種高效再生體系的建立

張玲，王延秀，陳佰鴻，王淑華，石曉昀，黨兆霞

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，甘肅 蘭州730070)

摘要：【目的】 建立茄子高效再生體系，為遺傳轉(zhuǎn)化、種質(zhì)創(chuàng)新研究奠定基礎(chǔ).【方法】 以‘蘭雜一號(hào)’和‘蘭雜二號(hào)’兩個(gè)茄子品種為試材，通過(guò)對(duì)不同質(zhì)量濃度外源激素組合的篩選，研究基因型、外植體類型、苗齡、外源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合對(duì)不定芽分化與伸長(zhǎng)的影響.【結(jié)果】 ‘蘭雜二號(hào)’的不定芽分化率顯著高于‘蘭雜一號(hào)’；子葉的不定芽分化能力強(qiáng)于下胚軸和莖段；11～13 d苗齡的外植體不定芽分化頻率較高；‘蘭雜一號(hào)’和‘蘭雜二號(hào)’分別在6-BA/IBA為10∶1和30∶1的配比下，分化率達(dá)最高，分別為89.58%、94.97%；在6-BA/IBA為1∶2配比下有利于兩個(gè)品種不定芽伸長(zhǎng)，伸長(zhǎng)率分別高達(dá)91.67%、96.88%.【結(jié)論】 適宜‘蘭雜一號(hào)’和‘蘭雜二號(hào)’不定芽分化的培養(yǎng)基分別為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA和MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA；適宜不定芽伸長(zhǎng)的培養(yǎng)基為MS+0.1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA；最佳生根培養(yǎng)基為1/2 MS培養(yǎng)基.

關(guān)鍵詞：茄子；離體再生體系；子葉；下胚軸；不定芽

茄子(SolanummelongenaL.)為茄科茄屬一年生草本植物，其產(chǎn)量高，適應(yīng)性強(qiáng)，耐運(yùn)輸和儲(chǔ)藏，是世界各地廣泛栽培的重要蔬菜作物[1].中國(guó)是世界上最大的茄子生產(chǎn)國(guó),栽培面積達(dá)73.88萬(wàn)hm2,占世界總面積(161.14萬(wàn)hm2)的45.85% (FAO,2009).蘭州地區(qū)自主培育的茄子品種‘蘭雜一號(hào)’(SolanummelongenaL.cv Lanza)與‘蘭雜二號(hào)’(SolanummelongenaL.cv Lanza)均為高秧長(zhǎng)茄類型，極豐產(chǎn)，適應(yīng)性廣，在西北地區(qū)廣泛種植.‘蘭雜一號(hào)’果形長(zhǎng)條形、略彎曲，是極早熟品種；‘蘭雜二號(hào)’果實(shí)長(zhǎng)棒形，直而較粗，早熟品種.

自1997年Aroaia等[2]成功地將改造了的Bt基因轉(zhuǎn)入茄子一來(lái)，茄子轉(zhuǎn)基因技術(shù)經(jīng)過(guò)了將近二十年的歷史，目前嚴(yán)重制約茄子轉(zhuǎn)基因技術(shù)發(fā)展的因素是茄子離體再生頻率較低.國(guó)內(nèi)外茄子離體再生研究已取得部分進(jìn)展：如花藥(粉)培養(yǎng)[3-4]，建立小孢子培養(yǎng)體系[5-6]，器官分化培養(yǎng)[7-8]，原生質(zhì)體培養(yǎng)[9-10]，體細(xì)胞融合獲得再生植株[11]，以及胚狀體誘導(dǎo)[10]等.但由于基因型的不同，導(dǎo)致茄子品種間的再生頻率差異很大，缺少通用的再生體系[12].

影響植物離體再生成功與否的最主要因素還在于適宜的外源激素種類和濃度配比[13].同科、屬中不同品種(基因型)植物內(nèi)源激素水平不同，其對(duì)外源激素的種類和濃度要求也不同.通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基的中外源激素，協(xié)調(diào)不同外植體材料內(nèi)源激素間的不平衡性來(lái)提高植物再生頻率是一條非常有效的途徑[14]，以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基添加6-BA，再配合其他激素，通常在茄子離體培養(yǎng)中可以取得較好效果[15-16].本研究充分參考前人研究結(jié)果，選用兩個(gè)西北主栽品種，對(duì)其再生體系進(jìn)行研究，以便建立高效的離體再生體系為遺傳轉(zhuǎn)化、種質(zhì)創(chuàng)新研究奠定良好基礎(chǔ)，也為快速繁殖脫毒試管苗和優(yōu)良品種保存提供可靠途徑.

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試茄子品種：‘蘭雜一號(hào)’(SolanummelongenaL.cv Lanza)、‘蘭雜二號(hào)’(SolanummelongenaL.cv Lanza)，購(gòu)于甘肅省農(nóng)科院.

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1無(wú)菌苗的制備選取飽滿的種子，溫湯浸種后在超凈臺(tái)內(nèi)依次用70%酒精快速浸泡30 s，0.1%HgCl2浸泡6 min進(jìn)行消毒，然后用無(wú)菌水沖洗3-4次.消毒后的種子播種于MS培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)溫度為(25±1)℃，每日光照16 h，光強(qiáng)度2 000～3 000 lx的光照培養(yǎng)箱里培養(yǎng)，促使其發(fā)芽.

1.2.2不同外源激素配比誘導(dǎo)再分化篩選方法待茄子子葉展開(kāi)后，剪取無(wú)菌苗的子葉接種于以MS固體培養(yǎng)基(MS+瓊脂6 g/L，蔗糖20 g/L，pH5.8～6.2)為基本培養(yǎng)基，添加不同質(zhì)量濃度的6-BA和IAA(如表1)的不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)其分化.接種時(shí)子葉剪成0.5 cm×0.5 cm的小塊，正面向上.每處理設(shè)4個(gè)重復(fù)，每重復(fù)處理為4個(gè)培養(yǎng)皿，每個(gè)培養(yǎng)皿接種6片，培養(yǎng)4周，培養(yǎng)條件與無(wú)菌苗制備條件相同.連續(xù)觀察統(tǒng)計(jì)不定芽分化情況，篩選出有利于不定芽誘導(dǎo)分化最佳外源激素組合[17].

分化率

1.2.3外植體的篩選方法剪取生長(zhǎng)狀態(tài)一致的子葉，下胚軸，莖段接種于適宜的分化培養(yǎng)基上.下胚軸剪取離子葉基部(遠(yuǎn)離子葉基部的腋芽區(qū))1 cm左右的小段，莖段選取莖端幼嫩的部分，下胚軸、莖段橫向放置.不同外植體接種數(shù)量、培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)條件同前.

1.2.4苗齡的篩選方法子葉展開(kāi)3 d后開(kāi)始，隔天剪取無(wú)菌苗的子葉和下胚軸分別接種于適宜的分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，直至子葉開(kāi)始黃化脫落試驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行.不同苗齡外植體接種數(shù)量、培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)條件同前.

1.2.5不同外源激素配比促進(jìn)不定芽伸長(zhǎng)的篩選方法將誘導(dǎo)產(chǎn)生的健壯芽苗轉(zhuǎn)接到添加不同外源激素組合的芽伸長(zhǎng)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)培養(yǎng)，外植體接種數(shù)量、培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)條件同前(表2)[18].

表2誘導(dǎo)茄子不定芽伸長(zhǎng)的激素組合

Tab.2The different hormone combinations for

induction of the elongation of adventitious

buds of eggplant

處理外源激素質(zhì)量濃度組合6-BA/(mg·L-1)IAA/(mg·L-1)100200.1300.2400.550.050.160.050.270.050.580.10.190.10.2100.10.5

1.3生根培養(yǎng)基的篩選方法

選擇不定芽伸長(zhǎng)至2 cm、伸出2片真葉以上的植株，將其自基部切下轉(zhuǎn)接至不同生根培養(yǎng)基上，促使其發(fā)根.每個(gè)處理設(shè)4個(gè)重復(fù)，每重復(fù)為10個(gè)三角瓶，每個(gè)三角瓶中接4棵芽，生根培養(yǎng)基為附加不同質(zhì)量濃度NAA的1/2 MS培養(yǎng)基，Ⅰ：1/2 MS+0.0 mg/L NAA；Ⅱ：1/2 MS+0.1 mg/L NAA；Ⅲ：1/2 MS+0.2 mg/L NAA；Ⅳ：1/2 MS+0.3 mg/L NAA.

1.4數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進(jìn)行方差分析(ANOVA),用Duncan法進(jìn)行差異顯著性檢測(cè).

2結(jié)果與分析

2.1不同外源激素組合對(duì)不定芽分化的影響

由圖1可以看出，‘蘭雜一號(hào)’的不定芽分化率為2.08%～89.58%，‘蘭雜一號(hào)’在F組合培養(yǎng)上不定芽分化率最高達(dá)89.58%，顯著高于其他任何處理；其次為處理E組合，顯著高于處理A、B、C、D和G組合，其中處理G與C、C與B、B與D組合差異不顯著但都與處理A組合差異達(dá)顯著水平.‘蘭雜二號(hào)’的不定芽分化率為21.88%～94.79%.不同組合下的不定芽分化率差異顯著，其中，D組合上的不定芽分化率最高達(dá)94.79%，顯著高于任一激素組合；其次為處理G組合，顯著高于處理A、C、E、F組合，其中除處理A、B組合間無(wú)顯著性外，其他處理間差異達(dá)到顯著水平.

A-G表不同的激素處理組合；柱圖上的誤差線表示標(biāo)準(zhǔn)偏差，n=4；不同字母表示差異顯著(P<0.05).圖1　不同激素組合對(duì)茄子不定芽分化的影響Fig.1　Effect of different hormone combinations on the differentiation of adventitious buds of eggplant

從激素組合來(lái)看，‘蘭雜一號(hào)’不定芽分化率在同一生長(zhǎng)素質(zhì)量濃度下隨著細(xì)胞分裂素質(zhì)量濃度的升高而先升高后下降，如處理B、C、D上的不定芽分化率分別為41.67%、50.00%和31.25%；在相同細(xì)胞分裂素質(zhì)量濃度下隨生長(zhǎng)素質(zhì)量濃度升高而升高，如處理C、F上的不定芽分化率分別為50.00%、89.58%,且‘蘭雜一號(hào)’在6-BA/IAA質(zhì)量濃度配比為10∶1的培養(yǎng)基處理F(2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA)上不定芽分化率最高，且形成的愈傷組織比較致密.試驗(yàn)表明，低質(zhì)量濃度生長(zhǎng)素促進(jìn)‘蘭雜一號(hào)’分化，高質(zhì)量濃度生長(zhǎng)素抑制‘蘭雜一號(hào)’；一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，提高細(xì)胞分裂素質(zhì)量濃度促進(jìn)‘蘭雜一號(hào)’分化，即低的6-BA/IAA質(zhì)量濃度比有利于促進(jìn)‘蘭雜一號(hào)’形成愈傷組織和分化不定芽.與‘蘭雜一號(hào)’不同的是，在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)高質(zhì)量濃度生長(zhǎng)素促進(jìn)‘蘭雜二號(hào)’不定芽分化，高質(zhì)量濃度細(xì)胞分裂素抑制‘蘭雜二號(hào)’分化，即較高的6-BA/IAA質(zhì)量濃度比有利于‘蘭雜二號(hào)’不定芽分化.說(shuō)明，不同基因型茄子內(nèi)源激素水平不同，其離體培養(yǎng)對(duì)外源激素質(zhì)量濃度要求也不同.

2.2不同外植體對(duì)不定芽分化的影響

從圖2可以看出，兩個(gè)茄子品種子葉平均不定芽分化率都最高，分別為89.58%和94.79%，莖段不定芽分化率最低平均只有31.25%和56.25%，下胚軸不定芽分化率居中.方差分析結(jié)果表明，子葉、下胚軸、莖段三者不定芽分化率差異達(dá)顯著水平.說(shuō)明，‘蘭雜一號(hào)’和‘蘭雜二號(hào)’兩茄子品種均子葉分化能力最強(qiáng)，是再生體系中較好的外植體材料.

不同字母表示差異顯著(P<0.05).圖2　外植體對(duì)不定芽分化的影響Fig.2　Effect of different explant types on the differentiation of adventitious buds of eggplant

2.3不同苗齡對(duì)不定芽誘導(dǎo)分化的影響

從圖3可以看出，‘蘭雜一號(hào)’以9～13 d苗齡的外植體不定芽分化率最高為84.38%～88.54%，3～9 d苗齡的外植體隨著苗齡的增長(zhǎng)，不定芽分化率呈上升趨勢(shì)，13 d苗齡以后的外植體不定芽分化率開(kāi)始下降，25 d以后植株的子葉開(kāi)始枯黃脫落無(wú)法再進(jìn)行試驗(yàn)；‘蘭雜二號(hào)’5～11 d苗齡的外植體隨著苗齡的增加，芽分化率持續(xù)升高，以11～15 d苗齡的外植體不定芽分化率最高為85.42%～89.58%，以后隨苗齡的增加不定芽分化率降低，23 d以后無(wú)子葉試驗(yàn)終止.說(shuō)明，外植體苗齡是影響植株再生的關(guān)鍵因素，苗齡較小時(shí)外植體幼嫩，形成的愈傷組織易玻璃化；苗齡較老外植體難以形成愈傷組織，不定芽分化率迅速下降.因此，11～13 d苗齡的外植體的不定芽誘導(dǎo)分化能力最強(qiáng).

圖3　苗齡對(duì)不定芽分化的影響Fig.3　Effect of different seedling age on the differentiation of adventitious buds of eggplant

2.4不同基因型的不定芽分化

從圖1可以看出，無(wú)任何激素的處理A(MS培養(yǎng)基)上，‘蘭雜一號(hào)’的平均不定芽分化率為2.08%，與‘蘭雜二號(hào)’的不定芽分化率差異極顯著.‘蘭雜一號(hào)’接種后絕大部分子葉除逐漸枯黃萎蔫外再無(wú)其他變化(即無(wú)不定芽產(chǎn)生也無(wú)愈傷組織產(chǎn)生)，極少數(shù)子葉切口處分化出淡黃色疏松的愈傷組織，顏色逐漸轉(zhuǎn)綠最終分化出翠綠色嫩芽；‘蘭雜二號(hào)’接種后部分子葉迅速分化出大塊的、結(jié)構(gòu)緊湊的淺綠色愈傷組織，繼續(xù)培養(yǎng)，愈傷組織顏色加深，部分愈傷組織周圍分化出墨綠色的不定芽.除處理G(3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA)外，添加其他不同激素組合的處理下，兩個(gè)品種的不定芽分化率差異顯著.來(lái)自不同基因型的相同外植體，其不定芽分化率也存在明顯差異如(圖2)，來(lái)自不同基因型相同苗齡的外植體，其不定芽分化率也存在差異如(圖3).因此說(shuō)明，不同基因型的茄子不定芽分化能力存在明顯差異.

2.5不同外源激素組合對(duì)不定芽伸長(zhǎng)的影響

從圖4可以看出，在各種外源激素組合處理下均有芽的伸長(zhǎng)，‘蘭雜一號(hào)’不定芽伸長(zhǎng)率為36.46%～91.67%，‘蘭雜二號(hào)’的芽伸長(zhǎng)率為38.54%～96.88%.在生長(zhǎng)素質(zhì)量濃度一定時(shí)隨著細(xì)胞分裂素質(zhì)量濃度的升高不定芽伸長(zhǎng)率下降，如‘蘭雜一號(hào)’在2、3、4處理下的不定芽分化率為61.46%、57.29%和44.79%；在一定細(xì)胞分裂素質(zhì)量濃度下隨著生長(zhǎng)素質(zhì)量濃度升高不定芽伸長(zhǎng)率先升高后下降，如‘蘭雜二號(hào)’在處理8、9、10的作用下其不定芽伸長(zhǎng)率分別為81.25%、96.88%和90.63%.方差分析結(jié)果表明，在6-BA/IAA配比為1∶5的9號(hào)培養(yǎng)基(6-BA 0.1 mg/L+IAA 0.2 mg/L)上，兩個(gè)品種的不定芽伸長(zhǎng)率最高，分別高達(dá)91.67%和96.88%顯著高于其他激素組合，其次為10號(hào)培養(yǎng)基，兩個(gè)品種不定芽伸長(zhǎng)率分別為84.38%和90.63%.試驗(yàn)表明，低質(zhì)量濃度的細(xì)胞分裂素促進(jìn)‘蘭雜一號(hào)’和‘蘭雜二號(hào)’不定芽伸長(zhǎng)，升高細(xì)胞分裂素質(zhì)量濃度抑制其不定芽伸長(zhǎng)；一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)生長(zhǎng)素促進(jìn)其不定芽伸長(zhǎng).說(shuō)明，植物離體培養(yǎng)在不同階段對(duì)外源激素質(zhì)量濃度要求不同，‘蘭雜一號(hào)’和‘蘭雜二號(hào)’不定芽經(jīng)高質(zhì)量濃度外源激素誘導(dǎo)分化后在低質(zhì)量濃度外源激素配比培養(yǎng)基上有利于不定芽伸長(zhǎng).

1-10表示不同的激素組合.圖4　激素組合對(duì)不定芽伸長(zhǎng)的影響Fig.4　Effect of different hormone combinations on the elongation of adventitious buds of eggplant

2.6生根培養(yǎng)

選擇生長(zhǎng)健壯的再生苗接種至生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)兩周后再生苗基部發(fā)生白色須根，培養(yǎng)3周后1/2 MS+NAA 0.1 mg/L培養(yǎng)基上的再生苗生根率最高可達(dá)96.25%(表2).在不添加任何生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的1/2MS培養(yǎng)基上，茄子再生苗的不定根發(fā)根數(shù)最多，根系健壯，根長(zhǎng)3～4 cm，生根效果最佳，適宜移栽.隨培養(yǎng)基中NAA質(zhì)量濃度的升高發(fā)根條數(shù)減少，不定根逐漸變短，根系纖細(xì)，且在根基部出現(xiàn)白色愈傷組織，影響移栽成活率.本試驗(yàn)研究表明，適宜生根的培養(yǎng)基為1/2 MS培養(yǎng)基.

表3　不同生根處理對(duì)根系生長(zhǎng)的影響

3討論

3.1基因型對(duì)茄子再生體系的影響

在組織培養(yǎng)過(guò)程中，茄子不同品種不定芽的誘導(dǎo)分化和芽伸長(zhǎng)存在顯著差異，‘蘭雜二號(hào)’平均不定芽分化率和不定芽伸長(zhǎng)率都顯著高于‘蘭雜一號(hào)’的.說(shuō)明，不定芽誘導(dǎo)分化、不定芽伸長(zhǎng)特性有不同的生理生化代謝機(jī)制，受基因調(diào)控與品種的遺傳特性密切相關(guān)[15].植物對(duì)于植物外源激素的反應(yīng)由于物種、品種、器官而不同，特定品種的年齡、環(huán)境和生理發(fā)育狀態(tài)、營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)均影響其對(duì)激素的響應(yīng)[19].植物組織培養(yǎng)中，針對(duì)組培苗不同時(shí)期的生長(zhǎng)特點(diǎn)，只有配合恰當(dāng)?shù)募に兀拍苷T導(dǎo)細(xì)胞分裂的啟動(dòng)、愈傷組織的形成和增殖、不定芽與不定根分化等變化.外植體對(duì)激素的需求取決于它本身的激素水平對(duì)激素的敏感性，也因植物種類不同而各異[20].

3.2外源激素組合對(duì)茄子再生體系的影響

前人研究表明茄科植物外植體中不具有足夠的內(nèi)源激素，因此，在組織培養(yǎng)中要添加不同濃度的外源激素才能促進(jìn)外植體不定芽分化和芽伸長(zhǎng)[21].6-BA是組織培養(yǎng)中廣泛應(yīng)用的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，尤其是在茄科植物中應(yīng)用都有良好的效果[22-23]，對(duì)于芽的誘導(dǎo)作用突出[24].IAA則能促進(jìn)子葉和下胚軸不定芽的誘導(dǎo)和分化，也能促進(jìn)細(xì)胞的伸長(zhǎng)，不定根的發(fā)生[19].細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素組合應(yīng)用對(duì)植物組織培養(yǎng)起關(guān)鍵作用，本試驗(yàn)結(jié)果顯示，一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，細(xì)胞分裂素質(zhì)量濃度與生長(zhǎng)素質(zhì)量濃度比值較大時(shí)促進(jìn)細(xì)胞分化形成不定芽；細(xì)胞分裂素質(zhì)量濃度與生長(zhǎng)素質(zhì)量濃度比值較小時(shí)有利于細(xì)胞分裂不定芽伸長(zhǎng)，與Foley[25]、歐陽(yáng)達(dá)等[26]的研究一致.因此對(duì)于植物特定的生理發(fā)育過(guò)程來(lái)說(shuō)，植物激素的平衡至關(guān)重要.

在不定芽分化培養(yǎng)基上分化出的芽生長(zhǎng)極其緩慢或很難伸長(zhǎng)，說(shuō)明植物在不同階段所需植物激素不同，有利于芽分化的激素組合不一定有利于芽的伸長(zhǎng).許多植物組織培養(yǎng)的一部分細(xì)胞在長(zhǎng)期的繼代培養(yǎng)中逐步獲得了獨(dú)立合成細(xì)胞分裂素、而不再依賴外援細(xì)胞分裂素的能力[27].在增殖后期若不適當(dāng)降低BA的質(zhì)量濃度，而是持續(xù)使用初期的相同質(zhì)量濃度的BA，會(huì)出現(xiàn)試管苗增殖過(guò)快、玻璃化嚴(yán)重、難以生根[23]等現(xiàn)象.本研究中發(fā)現(xiàn)適合誘導(dǎo)不定芽分化的高質(zhì)量濃度6-BA培養(yǎng)基并不適合不定芽的伸長(zhǎng)，分化的不定芽若不及時(shí)轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)基上，則大部分會(huì)畸形矮化，甚至黃化萎蔫直至死亡，說(shuō)明茄子不定芽經(jīng)高質(zhì)量濃度外源激素誘導(dǎo)分化后再轉(zhuǎn)接至低質(zhì)量濃度的外源激素配比培養(yǎng)基上有利于不定芽迅速生長(zhǎng)、伸長(zhǎng).試驗(yàn)中將畸形黃化的不定芽轉(zhuǎn)接至成倍降低6-BA質(zhì)量濃度或不添加任何外源激素的MS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)10～15 d不定芽形態(tài)明顯改善，再將不定芽轉(zhuǎn)接至不定芽伸長(zhǎng)培養(yǎng)基，不定芽正常生長(zhǎng).

3.3苗齡對(duì)茄子不定芽萌發(fā)的影響

前人研究表明，一般生理上幼嫩材料比老齡材料易于誘導(dǎo)不定芽分化[16-17]，本試驗(yàn)表明，對(duì)于茄子離體再生培養(yǎng)并非外植體越幼嫩越有利于不定芽分化.11～13 d苗齡的子葉和下胚軸分化不定芽率達(dá)到最高點(diǎn)，表明在此苗齡段外植體不定芽分化能力最強(qiáng)，在此之前隨著苗齡的減小外植體傷口周圍形成的愈傷組織越疏松，顏色越淺，不定芽分化率越小，在此之后隨著苗齡增加，外植體不定芽分化率呈下降趨勢(shì)，與前人的研究結(jié)果一致[28-29].

3.4外植體種類對(duì)不定芽萌發(fā)的影響

影響不定芽形成的另一個(gè)因素是外植體種類.據(jù)報(bào)道茄子用于再生體系的外植體有子葉、葉片、下胚軸、子葉柄、類Flamingo-bill外植體等[30]，但曹必好等[31]研究表明茄子子葉再生能力最強(qiáng).本試驗(yàn)研究比較了茄子子葉、下胚軸和莖段的再生能力，結(jié)果也證明子葉的再生能力高于下胚軸和莖段，是茄子再生體系建立的良好外植體材料.試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)子葉機(jī)械傷口周圍迅速產(chǎn)生大量淺綠色疏松愈傷，隨著培養(yǎng)時(shí)間增加愈傷顏色加深，質(zhì)地緊密，透出嫩綠的芽點(diǎn)，最后分化成不定芽；下胚軸的形態(tài)學(xué)上端較其下端容易形成愈傷，且分化出不定芽的概率也較其下端大；莖段在分化培養(yǎng)基上緩慢脫分化形成白色愈傷組織，隨著時(shí)間增長(zhǎng)，莖段形態(tài)學(xué)上端的愈傷組織顏色逐漸加深，分化出綠色不定芽，莖段形態(tài)學(xué)下端的愈傷組織不斷褐化、萎蔫不再生長(zhǎng)，最終死亡.

4結(jié)論

本試驗(yàn)研究表明，‘蘭雜二號(hào)’平均不定芽分化率和不定芽伸長(zhǎng)率均顯著高于‘蘭雜一號(hào)’；子葉平均不定芽分化率顯著高于下胚軸；外植體苗齡在11～13 d時(shí)分化能力最強(qiáng)；誘導(dǎo)‘蘭雜一號(hào)’不定芽分化的最適激素組合為處理F(2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA)，其不定芽分化率達(dá)89.58%，誘導(dǎo)‘蘭雜二號(hào)’不定芽分化的最適激素組合為處理D(3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA)，其不定芽分化率為(94.79)%；不定芽伸長(zhǎng)培養(yǎng)基處理9(0.1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA)為兩個(gè)品種的最宜的不定芽伸長(zhǎng)培養(yǎng)基，且不定芽伸長(zhǎng)率分別高達(dá)91.67%、96.88%；在生根培養(yǎng)基1/2MS培養(yǎng)基作用下植株根系健壯，根長(zhǎng)3～4 cm適宜移栽.

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(責(zé)任編輯趙曉倩)

Establishment of high-efficient regeneration system of two cultivars ofSolanummelongena

ZHANG Ling，WANG Yan-xiu，CHEN Bai-hong，WANG Shu-hua，SHI Xiao-yun，DANG Zhao-xia

(College of Horticulture,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China)

Abstract：【Objective】 The research was order to establish the high-efficient regeneration system of Solanum melongena laying foundation of genetic transformation and germplasm innovation.【Method】 Two cultivars of Solanum melongena 'Lanza I' and 'lanza II'were used to research the effects of genotypes,explant types,seedling age and plant exogenous growth regulators combinations on adventitious bud differentiation and elongation of Solanum melongena explants.【Result】 Adventitious buds differentiation rate 'lanza II' was higher than that of 'Lanza I'.The cotyledons of Solanum melongena had stronger regenerative capacity than hypocotyls and stem cutting.Seedlings aged 11-13 d had higher differentiation rate.The 6-BA/IAA ratio maximized the differentiation and regeneration of 'lanza I' at 10∶1 with 89.58% and 'lanza II'at 30∶1 with 94.79%.The 6-BA/IAA ratio at 1∶2 was beneficial to bud elongation of the two cultivars with 91.67% and 96.88%,respectively.【Conclusion】 The optimal differentiation medium were MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA for 'Lanza I' and MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA for ‘lanza II’.The suitable medium for bud elongation was MS+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IAA.The optimal rooting medium was 1/2 MS.

Key words：Solanum melongena；regeneration system；cotyledon；hypocotyls；adventitious bud

通信作者：王延秀，女，副教授，博士，研究方向?yàn)楣麡?shù)栽培生理及技術(shù).E-mail：wangxy@gsu.edu.cn

基金項(xiàng)目：教育部春暉計(jì)劃項(xiàng)目(z2005-2-62012).

收稿日期：2015-03-11；修回日期：2015-04-21

中圖分類號(hào)：S 641.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1003-4315(2016)01-0062-07

第一作者：張玲(1987-)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)楣麡?shù)生物技術(shù).E-mail：zhanggsau@126.com