Bmi-1、Bax和Survivin在喉鱗癌中的表達(dá)及意義

王建秋　楊蓓蓓　徐　玨　羅旭東　蘭龍江　任　剛

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院耳鼻咽喉科，浙江　杭州　310009)

?

Bmi-1、Bax和Survivin在喉鱗癌中的表達(dá)及意義

王建秋1楊蓓蓓徐玨1羅旭東1蘭龍江1任剛1

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院耳鼻咽喉科，浙江杭州310009)

〔摘要〕目的檢測(cè)喉鱗癌中原癌基因Bmi-1、促凋亡基因Bax和生存素(Survivin)的表達(dá)關(guān)系，分析其臨床意義。方法57例喉鱗癌術(shù)后蠟塊組織作為觀(guān)察組，選擇聲帶不典型增生蠟塊組織30例作為對(duì)照組，選擇聲帶息肉的蠟塊組織30例作為對(duì)正常照組，應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)三組中Bmi-1、Bax和Survivin的表達(dá)。結(jié)果三組中Bmi-1、Bax和Survivin的陽(yáng)性率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，觀(guān)察組中Bmi-1、Bax和Survivin表達(dá)的陽(yáng)性率與腫瘤的最大徑、分化程度、是否伴有壞死和增殖指數(shù)密切相關(guān)。相關(guān)性分析顯示觀(guān)察組中Bmi-1和Bax呈正相關(guān)性，Bmi-1和Survivin呈負(fù)相關(guān)性。結(jié)論喉鱗癌術(shù)后組織中Bmi-1和Bax低表達(dá)、Survivin高表達(dá)是腫瘤形成的重要因素，Bmi-1與Bax、Survivin具有一定的協(xié)同作用。

〔關(guān)鍵詞〕喉鱗癌；Bmi-1；Bax；Survivin；免疫組化

喉鱗癌病變形成中常為不典型增生-癌的過(guò)程，此時(shí)機(jī)體的蛋白表達(dá)失調(diào)〔1〕。原癌基因Bmi-1是僅含Bcl-2家族4個(gè)同源結(jié)構(gòu)域中的BH3結(jié)構(gòu)域，而B(niǎo)H3被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡起始的必需因子，具有促進(jìn)凋亡的作用〔2，3〕。促凋亡基因Bax具有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的功能〔4〕。生存素(Survivin)是一種凋亡抑制蛋白，是抑制細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵分子〔5〕。本研究應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)喉鱗癌術(shù)后組織中Bmi-1、Bax和Survivin的表達(dá)，分析三者的關(guān)系及意義。

1 材料與方法

1.1一般資料2013年1月至2014年12月行喉鱗癌根治手術(shù)的患者57例作為觀(guān)察組，術(shù)前均未進(jìn)行放、化療，均再次制片，并經(jīng)病理醫(yī)師復(fù)診。其中男30例，女27例；年齡46～84歲，平均64.3歲。選擇同期聲帶不典型增生的蠟塊組織30例作為對(duì)照組，其中男15例；女15例，年齡44～76歲，平均59.5歲。選擇聲帶息肉的蠟塊組織30例作為正常對(duì)照組，其中男15例，女15例；年齡41～70歲，平均51.3歲。

1.2Bmi-1、Bax和Survivin表達(dá)的檢測(cè)應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)組織中Bmi-1、Bax和Survivin蛋白的表達(dá)，DAB染色，操作均由同一主管技師完成，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作，減少誤差。

1.3Bmi-1、Bax和Survivin結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)Bmi-1、Bax和Survivin均以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，選擇5個(gè)表達(dá)較為集中的視野，應(yīng)用400倍鏡計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性率，取平均值作為最終結(jié)果。以<10%為陰性，≥10%為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)或線(xiàn)性相關(guān)性分析。

2結(jié)果

2.1三組中Bmi-1、Bax和Survivin陽(yáng)性率的比較正常對(duì)照組、對(duì)照組及觀(guān)察組中Bmi-1、Bax的表達(dá)有下降趨勢(shì)，Survivin的表達(dá)有增高趨勢(shì)(P<0.000 1)。見(jiàn)表1。

2.2Bmi-1、Bax和Survivin在觀(guān)察組不同臨床特征分組中的比較觀(guān)察組中Bmi-1、Bax和Survivin表達(dá)的陽(yáng)性率與腫瘤的最大徑、分化程度、是否伴有壞死和增殖指數(shù)密切相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3觀(guān)察組中Bmi-1、Bax和Survivin的相關(guān)性分析結(jié)果觀(guān)察組中Bmi-1和Bax呈正相關(guān)性(r=0.53，P=0.021 3)，Bmi-1和Survivin呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.47，P=0.043 2)。

表1　三組中Bmi-1、Bax和Survivin陽(yáng)性率的比較〔n(%)〕

表2　Bmi-1、Bax和Survivin陽(yáng)性表達(dá)在觀(guān)察組不同臨床

3討論

喉鱗癌是上呼吸道惡性腫瘤中最多見(jiàn)的。吸煙及酒精與喉鱗癌的關(guān)系密切。組織學(xué)上分為高分化、中分化及低分化三種，高分化者的癌組織角化明顯，可見(jiàn)細(xì)胞間橋，低分化者癌組織無(wú)角化，細(xì)胞較小，細(xì)胞間橋不明顯，核分裂象多見(jiàn)。中分化介于高、低分化之間〔6〕。一般來(lái)說(shuō)，腫瘤體積越小，分化越好，預(yù)后較好。腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，腫瘤進(jìn)展時(shí)可形成腫瘤性壞死，并可見(jiàn)與凋亡相關(guān)的細(xì)胞形態(tài)。Bcl-2家族蛋白是調(diào)節(jié)凋亡的重要因子，Bmi-1是家族中的重要成員，定位于7p15.2，其表達(dá)蛋白編碼129個(gè)氨基酸，已有研究表明Bmi-1可能通過(guò)啟動(dòng)促凋亡蛋白Bax發(fā)揮生物學(xué)作用〔7，8〕。也有觀(guān)點(diǎn)認(rèn)為正常細(xì)胞中Bmi-1與微管動(dòng)力蛋白復(fù)合體結(jié)合，凋亡信號(hào)刺激細(xì)胞時(shí)，Bmi-1從復(fù)合體上釋放出來(lái)易位于線(xiàn)粒體，與Bcl-2結(jié)合，抑制了Bcl-2的抗凋亡作用〔9〕。腫瘤性病變時(shí)，此種作用下降或丟失。Bax是1993年學(xué)者用Bcl-2基因蛋白產(chǎn)物特異性單克隆抗體免疫沉淀發(fā)現(xiàn)的蛋白，能降低細(xì)胞凋亡的閾值，并通過(guò)影響線(xiàn)粒體功能和膜的完整性調(diào)節(jié)凋亡〔10，11〕。Survivin基因定位于17q25，編碼含有142個(gè)氨基酸，分子量16.5 kD〔12〕。Survivin不僅有抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，還對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖、血管新生等生物學(xué)行為有直接的影響〔13，14〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示Bmi-1、Bax作為促進(jìn)凋亡的基因起作用，當(dāng)二者表達(dá)下降或丟失后，對(duì)腫瘤細(xì)胞自身啟動(dòng)的程序性死亡功能的調(diào)節(jié)下降，腫瘤細(xì)胞死亡的數(shù)量明顯減少，使腫瘤細(xì)胞的數(shù)量增加，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)活躍。本結(jié)果提示Bmi-1、Bax和Survivin異常表達(dá)使腫瘤的體積增大，腫瘤細(xì)胞處于低分化或未分化狀態(tài)，細(xì)胞更加幼稚，細(xì)胞的生長(zhǎng)更活躍，異型性更大，預(yù)后差。Bmi-1、Bax和Survivin三種蛋白在影響腫瘤細(xì)胞凋亡過(guò)程中可以使腫瘤細(xì)胞壞死程度發(fā)生改變。Bmi-1、Bax低表達(dá)、Survivin高表達(dá)時(shí)可以引起腫瘤細(xì)胞的增殖進(jìn)程，也使腫瘤細(xì)胞處于繁殖的活躍階段，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛〔15，16〕。三種蛋白存在一定的關(guān)聯(lián)性，這與三者均為凋亡相關(guān)蛋白有關(guān)，也是凋亡相關(guān)基因互相調(diào)節(jié)的結(jié)果〔17，18〕。綜上，喉鱗癌術(shù)后組織中Bmi-1和Bax低表達(dá)、Survivin高表達(dá)是腫瘤形成的重要因素，Bmi-1與Bax、Survivin具有一定的協(xié)同作用。

4參考文獻(xiàn)

1姜琳琳，韓瑞珠，徐秀玉，等.Survivin、Bcl-2和Bax在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)〔J〕.中國(guó)耳鼻咽喉頭頸外科，2005；12(4)：243-5.

2Kafara P，Icard P，Guillamin M，etal.Lipoic acid decreases Mcl-1，Bcl-xL and up regulates Bmi on ovarian carcinoma cells leading to cell death〔J〕.J Ovarian Res，2015；8(1)：36.

3Jung KJ，Min KJ，Bae JH，etal.Carnosic acid sensitized TRAIL-mediated apoptosis through down-regulation of c-FLIP and Bcl-2 expression at the post translational levels and CHOP-dependent up-regulation of DR5，Bmi and PUMA expression in human carcinoma caki cells〔J〕.Oncotarget，2015；6(3)：1556-68.

4耿敬姝，王麗春，佟丹丹.大腸癌及癌旁組織中Bmi、Bax、Bcl-2的表達(dá)及意義〔J〕.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2008；24(3)：296-9.

5Xia H，Chen J，Shi M，etal.The over-expression of survivin enhances the chemotherapeutic efficacy of YM155 in human hepatocellular carcinoma〔J〕.Oncotarget，2015；6(8)：5990-2.

6李大偉，董頻，孫臻峰，等.Survivin在喉鱗癌中的表達(dá)及其與腫瘤細(xì)胞增殖凋亡的關(guān)系〔J〕.臨床腫瘤學(xué)雜志，2010；15(11)：966-8.

7Xiong H，Wang J，Guan H，etal.SphK1 confers resistance to apoptosis in gastric cancer cells by downregulating Bmi via stimulating Akt/FoxO3a signaling〔J〕.Oncol Rep，2014；32(4)：1369-73.

8Li H，Zhou S，Li X，etal.Gefitinib-resistance is related to Bmi expression in non-small cell lung cancer cell lines〔J〕.Cancer Biother Radiopharm，2013；28(2)：115-23.

9楊清，王玉，張淑蘭，等.Bmi與P-Bad蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義〔J〕.腫瘤防治雜志，2004；11(5)：505-7.

10Khodapasand E，Jafarzadeh N，F(xiàn)arrokhi F，etal.Is Bax/Bcl-2 ratio considered as a prognostic marker with age and tumor location in colorectal cancer〔J〕.Iran Biomed J，2015；19(2)：69-75.

11Fickova M，Macho L，Brtko J.A comparison of the effects of tributyltin chloride and triphenyltin chloride on cell proliferation，proapoptotic p53，Bax，and antiapoptotic Bcl-2 protein levels in human breast cancer MCF-7 cell line〔J〕.Toxicol In Vitro，2015；29(4)：727-31.

12Zhou WQ，Sheng QY，Sheng YH，etal.Expressions of survivin，P16(INK4a)，COX-2，and Ki-67 in cervical cancer progression reveal the potential clinical application〔J〕.Eur J Gynaecol Oncol，2015；36(1)：62-8.

13Jang MH，Jung KC，Min HS.The diagnostic usefulness of HMGA2，survivin，CEACAM6 and SFN/14-3-3 δ in follicular thyroid carcinoma〔J〕.J Pathol Transl Med，2015；49(2)：112-7.

14康惠貞，李勝棉，趙玉斌.Survivin、Bcl-2和Bax在肝外膽管異型增生組織和癌組織中的表達(dá)及意義〔J〕.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010；19(9)：1061-3.

16侯雯雯，李波，魯成，等.促凋亡基因Bax在胰腺癌中的研究進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010；10(3)：581-3.

17Qu Y，Zhang X，Wu R.Knockdown of NF-κB p65 subunit expression suppresses growth of nude mouse lung tumor cell xenografts by activation of Bax apoptotic pathway〔J〕.Neoplasma，2015；62(1)：34-40.

18Li Y，Zhou Y，Zheng J，etal.Downregulation of survivin inhibits proliferation and migration of human gastric carcinoma cells〔J〕.Int J Clin Exp Pathol，2015；8(2)：1731-6.

〔2014-12-16修回〕

(編輯苑云杰)

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R739

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)06-1376-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.06.043

通訊作者：楊蓓蓓(1959-)，女，主任醫(yī)師，博士，主要從事耳鼻喉臨床及內(nèi)鏡、耳顯微外科手術(shù)研究。

1湖州市第一人民醫(yī)院耳鼻咽喉科

第一作者：王建秋(1981-)，男，碩士在讀，主治醫(yī)師，主要從事耳鼻咽喉臨床研究。