喉鱗癌組織中脆性組氨酸三聯(lián)體基因和增殖蛋白的關(guān)系

劉　瑤　崔　穎　劉衛(wèi)芳

(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科,遼寧　錦州　121001)

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喉鱗癌組織中脆性組氨酸三聯(lián)體基因和增殖蛋白的關(guān)系

劉瑤崔穎劉衛(wèi)芳

(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科,遼寧錦州121001)

〔摘要〕目的檢測喉鱗癌中脆性組氨酸三聯(lián)體基因(FHIT)、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)和Ki67增殖蛋白(Ki67)的表達(dá)特征，探討FHIT對增殖的作用。方法67例喉鱗癌患者的臨床資料和術(shù)后蠟塊組織作為觀察組，喉黏膜不典型增生的術(shù)后組織53例作為對照組，收集上述距腫物邊緣>2 cm非腫瘤性喉黏膜組織53例作為正常對照組。應(yīng)用免疫組化二步法檢測三組FHIT、PCNA和Ki67的表達(dá)。結(jié)果三組FHIT、PCNA和Ki67的陽性率差別顯著(P<0.000 1)。觀察組中FHIT、PCNA和Ki67的陽性率均與腫瘤最大徑、分化程度、是否伴有脈管內(nèi)瘤栓相關(guān)。PCNA和Ki67的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。線性相關(guān)分析顯示觀察組中FHIT和PCNA、FHIT和Ki67的表達(dá)均具有負(fù)相關(guān)性。結(jié)論喉鱗癌術(shù)后組織中FHIT低表達(dá)，PCNA和Ki67高表達(dá)對促進(jìn)腫瘤形成和進(jìn)展有一定作用，F(xiàn)HIT在調(diào)節(jié)腫瘤性進(jìn)展過程中可能與對腫瘤細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕喉鱗癌；脆性組氨酸三聯(lián)體基因(FHIT)；增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)；Ki67；免疫組化

喉鱗癌在六、七十歲的老年人中發(fā)病率最高，男性較為多見，主要發(fā)生于聲門上區(qū)和聲門區(qū)〔1〕。病變的形成因素較多，如吸煙、酒精的作用等，在這些因素的誘導(dǎo)下，機(jī)體的基因和蛋白表達(dá)失調(diào)，對誘發(fā)腫瘤起重要作用。正常細(xì)胞在腫瘤性病變過程中形成明顯的失控性增生和分化成熟障礙，使細(xì)胞的繁殖能力增強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)中標(biāo)記細(xì)胞增殖的蛋白主要是Ki67增殖蛋白(Ki67)和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)，二者表達(dá)升高，提示細(xì)胞處于活躍狀態(tài)，腫瘤的進(jìn)展迅速〔2,3〕。脆性組氨酸三聯(lián)體基因(FHIT)是1996年發(fā)現(xiàn)的基因，其編碼的蛋白質(zhì)具有多種生物學(xué)功能，尤其對細(xì)胞生長信號的阻斷作用更為明顯，有效抑制腫瘤的繁殖及生長〔4,5〕。本實(shí)驗(yàn)探討喉鱗癌術(shù)后組織中FHIT、PCNA和Ki67的表達(dá)特征及其相關(guān)性。

1資料與方法

1.1臨床資料2012年1月至2014年12月我院診斷為喉鱗癌的67例患者的臨床資料和術(shù)后蠟塊組織作為觀察組，男42例，女25例；年齡52~89歲，平均(69.2±6.8)歲。納入均經(jīng)病理醫(yī)師確診，并按WHO的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分型。喉黏膜不典型增生的術(shù)后組織53例作為對照組，男27例，女26例；年齡46~86歲，平均(67.2±6.6)歲。觀察組距腫物邊緣>2 cm非腫瘤性喉黏膜組織53例作為正常對照組，男32例，女21例；年齡53~85歲，平均(68.7±6.4)歲。三組常規(guī)資料差異無顯著性。

1.2免疫組化檢測FHIT、PCNA和Ki67的表達(dá)FHIT、PCNA和Ki67抗體均應(yīng)用0.1 ml的濃縮液。依不同比例進(jìn)行稀釋后行預(yù)實(shí)驗(yàn)，由病理醫(yī)師選擇最理想的濃度用于正式實(shí)驗(yàn)。正式實(shí)驗(yàn)中FHIT、PCNA和Ki67的檢測采用免疫組化二步法，完全按說明書進(jìn)行操作，做好質(zhì)控工作。

1.3FHIT、PCNA和Ki67結(jié)果的判斷FHIT陽性部位定位于細(xì)胞質(zhì)(對于散在少數(shù)細(xì)胞核和細(xì)胞膜著色的上皮細(xì)胞不計(jì)為陽性)，PCNA和Ki67的陽性部位定位于細(xì)胞核。三種蛋白均以染成中-強(qiáng)等強(qiáng)度的棕黃色為陽性細(xì)胞。觀察組中選擇上皮細(xì)胞集中的癌巢區(qū)域進(jìn)行計(jì)數(shù)，對照組和正常對照組選擇上皮細(xì)胞區(qū)域進(jìn)行計(jì)數(shù)，選擇5個(gè)400倍視野，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞的百分率，取平均值。以<10%為陰性，以≥10%為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及線性相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1三組中FHIT、PCNA和Ki67表達(dá)陽性率的比較三組中FHIT、PCNA和Ki67的陽性率差別顯著(P<0.000 1)。見表1。

2.2觀察組中FHIT、PCNA和Ki67在不同臨床特征中比較的分析觀察組中FHIT、PCNA和Ki67的陽性率均與腫瘤最大徑、分化程度、是否伴有脈管內(nèi)瘤栓相關(guān)。PCNA和Ki67的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。見表2。

2.3觀察組中FHIT、PCNA和Ki67相關(guān)性觀察組中FHIT和PCNA(r=-0.47,P=0.042 1)、FHIT和Ki67的表達(dá)均具有負(fù)相關(guān)性(r=-0.52,P=0.024 1)。

表1　三組中FHIT、PCNA和Ki67陽性率比較〔n(%)〕

表2　觀察組中FHIT、PCNA和Ki67陽性表達(dá)在

3討論

鱗癌是發(fā)生在喉部最多見的腫瘤，病變形成過程中伴有鱗狀細(xì)胞的分化，常見各種各樣的“角化珠”形成的角化現(xiàn)象，并且侵襲性生長是鱗癌的首要特征。侵襲表現(xiàn)為穿透基底膜，通常伴有較多的間質(zhì)反應(yīng)。而血管淋巴管及神經(jīng)周圍侵襲是惡性腫瘤的附加特征〔1〕。高分化鱗癌與正常的鱗狀上皮類似，中分化鱗癌具有獨(dú)特的核多形性和核分裂象，包括非正常核分裂，角化不常見。低分化鱗癌是以不成熟的細(xì)胞為主，有大量的正常或不正常的核分裂，角化極少。在腫瘤侵襲及分化過程中，多種蛋白表達(dá)失調(diào)參與其中〔6〕。FHIT是1996年利用外顯子捕獲法發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，由10個(gè)外顯子組成〔7,8〕。FHIT通過對ApnA進(jìn)行水解，阻止細(xì)胞生長信號的傳導(dǎo)途徑，引起細(xì)胞凋亡，進(jìn)而抑制腫瘤生長〔9,10〕。也有觀點(diǎn)認(rèn)為FHIT可以與Ap3A等結(jié)合成FHIT底物復(fù)合物，其可能是一種信號物質(zhì)，可能比水解酶的作用更重要〔11〕。Campiglio等〔12〕通過對29例原發(fā)性乳腺癌中檢測FHIT的表達(dá)，認(rèn)為FHIT低表達(dá)是乳腺癌發(fā)生和進(jìn)展的重要因素。Koda等〔13〕通過對膽囊癌中FHIT的表達(dá)進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)FHIT低表達(dá)是促進(jìn)腫瘤形成的重要因素，而且FHIT的表達(dá)與重組人MutL同系物(MLH)1具有相關(guān)性，而對P53沒有明顯的調(diào)節(jié)作用。PCNA是一種細(xì)胞周期蛋白，是DNA多聚酶的輔助蛋白，為DNA合成中不可缺少的因子〔14,15〕。PCNA定位于增殖細(xì)胞的細(xì)胞核中，呈顆粒型或彌漫型，在許多有絲分裂細(xì)胞內(nèi)可見PCNA著色顆粒，而非有絲分裂的細(xì)胞中存在較少〔16〕。Ki67是存在于增殖細(xì)胞核中的一種非蛋白性核蛋白，與細(xì)胞增殖有密切的關(guān)系〔17〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示FHIT、PCNA和Ki67異常表達(dá)在黏膜癌變中有重要促進(jìn)作用，F(xiàn)HIT低表達(dá)、PCNA和Ki67高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的生長，引起腫瘤的體積增大，侵襲能力增強(qiáng)。FHIT、PCNA和Ki67三者異常表達(dá)與腫瘤的形成過程中腫瘤由原始向成熟發(fā)育過程有關(guān)。FHIT低表達(dá)、PCNA和Ki67高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤對血管淋巴管的侵襲進(jìn)程，使腫瘤具有明顯的遷移潛能。PCNA和Ki67二者不僅對增殖有重要的標(biāo)記作用，還對腫瘤經(jīng)淋巴道遷移有重要促進(jìn)作用。由于以上因素是腫瘤形成及進(jìn)展過程中的重要因素，因此三者的異常表達(dá)提示腫瘤處于進(jìn)展期，可能有不良的預(yù)后。FHIT低表達(dá)時(shí)可以促進(jìn)以PCNA和Ki67為主的增殖作用。當(dāng)FHIT低表達(dá)時(shí)，使其對細(xì)胞增殖的抑制作用減弱，細(xì)胞生長旺盛，細(xì)胞增殖明顯〔18,19〕。

綜上，喉鱗癌術(shù)后組織中FHIT低表達(dá)，PCNA和Ki67高表達(dá)對促進(jìn)腫瘤的形成及進(jìn)展有一定作用，F(xiàn)HIT在調(diào)節(jié)腫瘤性進(jìn)展過程中可能與對腫瘤細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)有關(guān)。

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〔2014-12-17修回〕

(編輯苑云杰)

〔中圖分類號〕R739

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)05-1118-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.044

通訊作者：崔穎(1972-)，女，博士，主任醫(yī)師，主要從事干細(xì)胞研究。

第一作者：劉瑤(1983-)，女，碩士，住院醫(yī)師，主要從事耳鼻咽喉科學(xué)研究。