546例新生兒耳聾基因與聽力聯(lián)合篩查結(jié)果分析*

陳欣　王智楠　夏忠芳　李雋　陳平

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·研究報告·

546例新生兒耳聾基因與聽力聯(lián)合篩查結(jié)果分析*

陳欣1王智楠1夏忠芳1李雋1陳平1

【摘要】目的探討新生兒耳聾基因與聽力聯(lián)合篩查的意義。方法對2014年6～12月出生的546例新生兒，采集足跟血進(jìn)行基因測序，對常見的4個耳聾基因的20個位點(diǎn)進(jìn)行篩查；包括GJB2(35delG、167delT、176_191de116、235delC、299_300delAT),GJB3 (538C→T、547G→A),SLC26A4 (281C→T、589G→A、IVS7-2A→G、1174A→T、1226G→A、1229C→T、IVS15+5G→A、1975G→C、2027T→A、2162C→T、2168A→G), 線粒體DNA12S rRNA(1494C→T、1555A→G)，同時利用TEOAE和AABR進(jìn)行聯(lián)合聽力篩查。 結(jié)果546例中，22例(4.03%，22/546)有耳聾基因突變，包括：GJB2基因突變14例，占2.56%(14/546)；SLC26A4基因突變7 例，占1.28%(7/546)；線粒體DNA12SrRNA基因突變1例，占0.18%(1/546)。聽力初篩未通過25例(4.58%，25/546)，25例均進(jìn)行復(fù)篩，復(fù)篩未通過12例，確診9例聽力損失，其中雙耳極重度聽力損失1例，雙耳重度聽力損失2例，雙耳中度聽力損失2例，左耳中度聽力損失4例，這9例中8例耳聾基因篩查異常。結(jié)論單純進(jìn)行聽力篩查或者單純進(jìn)行耳聾基因篩查可能會漏掉部分耳聾患兒，新生兒耳聾基因聯(lián)合聽力篩查，有利于耳聾兒童的早期發(fā)現(xiàn)與早期干預(yù)。

【關(guān)鍵詞】新生兒；耳聾基因；聽力篩查

先天性耳聾是人類最常見的出生缺陷之一，約每1 000個新生兒中就有1個耳聾患兒，其中遺傳因素約占50%～60%[1,2]。2007年國內(nèi)首次提出新生兒聽力與基因聯(lián)合篩查的理念[3]，包括普遍人群篩查和目標(biāo)人群篩查[4]，目前已逐步在臨床推廣。本文對546例新生兒耳聾基因聯(lián)合聽力篩查的結(jié)果進(jìn)行分析，進(jìn)一步探討其臨床應(yīng)用價值及意義。

1資料與方法

1.1研究對象選擇2014年6～12月在武漢市婦女兒童醫(yī)療保健中心出生的足月新生兒546例為研究對象，其中男314例，女232例，天齡2～5天，平均2.2±0.2天。

1.2方法對546例新生兒均進(jìn)行耳聾基因及聽力聯(lián)合篩查。本研究獲武漢市婦女兒童醫(yī)療保健中心倫理委員會批準(zhǔn)，所有新生兒在篩查前均詳細(xì)告知家長耳聾基因及聽力篩查的相關(guān)知識，取得同意后填寫知情同意書。

1.2.1耳聾基因篩查方法所有新生兒在出生后3 d內(nèi)采集足跟血送往華大基因?qū)嶒?yàn)室，提取基因組DNA, 采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜法檢測常見的4個耳聾基因的20個位點(diǎn),包括GJB2(35delG、167delT、176_191de116、235delC、299_300delAT),GJB3 (538C→T、547G→A),SLC26A4 (281C→T、589G→A、IVS7-2A→G、1174A→T、1226G→A、1229C→T、IVS15+5G→A、1975G→C、2027T→A、2162C→T、2168A→G), 線粒體DNA12SrRNA(1494C→T、1555A→G)。首先進(jìn)行PCR擴(kuò)增目的片斷區(qū)域，然后加入多對特異性引物，進(jìn)行單堿基延伸，再將單堿基延伸產(chǎn)物純化后打質(zhì)譜，根據(jù)不同引物擴(kuò)增產(chǎn)物的質(zhì)荷比不同，判斷有無堿基突變。

1.2.2聽力篩查方法新生兒聽力初篩采用瞬態(tài)耳聲發(fā)射(TEOAE)，聽力復(fù)篩用TEOAE+AABR聯(lián)合篩查，所用儀器為丹麥Madsen Accuscreen全功能聽力篩查儀，測試環(huán)境為噪聲水平<45 dB A的相對安靜環(huán)境。初篩時間為出生后3～5天，新生兒入睡后，首先將其耳道清理干凈，對其進(jìn)行TEOAE檢查，通過標(biāo)準(zhǔn)為：偽跡率<20%，刺激穩(wěn)定率>80%。AABR測試：用 95 % 的酒精進(jìn)行局部皮膚脫脂, 記錄電極放置在前額部 , 參考電極放置在后頸部 , 接地電極放置在頰骨部或眉心偏上; 極間電阻 ≤ 12 kΩ , 刺激聲為 35 dB nHL 的短聲 ; 放大器帶通濾波范圍 70～4 000 Hz; 刺激聲相位交替,應(yīng)用回旋式模板信號以二項(xiàng)式統(tǒng)計(jì)方法提取 ABR 的波 V。初篩未通過者在出生 42 d左右復(fù)篩，復(fù)篩未通過者在出生3個月左右進(jìn)行診斷性聽力學(xué)檢查。

1.2.3聽力學(xué)診斷方法復(fù)篩未通過的患兒進(jìn)行聽性腦干反應(yīng)、 診斷型耳聲發(fā)射、聲導(dǎo)抗等測試。所用儀器為 IHS SmartEP 誘發(fā)電位儀 和 Madsen公司的CAPELLA耳聲發(fā)射儀器及 Otoflex100 中耳分析儀。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對聽力篩查的結(jié)果采用EXEL軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2結(jié)果

2.1新生兒聽力篩查結(jié)果546例新生兒中，初篩未通過25例，其中雙耳未通過18例，右耳未通過4例，左耳未通過3例，未通過率為4.58%(25/546)；25例均進(jìn)行復(fù)篩，復(fù)篩未通過12例，占聽力初篩未通過的48%(12/25)，其中雙耳未通過10例，左、右耳未通過各1例。

2.2新生兒耳聾基因篩查結(jié)果546例新生兒中，22例攜帶耳聾基因突變，陽性率為4.03%(22/546)。其中，1例為mtDNA12SrRNAm.1555A>G突變，突變率為0.18%(1/546)，該例聽力初篩雙耳通過；14例為GJB2 c.235delC基因突變(3例純合，11例雜合)，突變率為2.56%(14/546)，其中，聽力初篩通過8例，未通過6例；7例為SLC26A4 c.919-2A>G基因雜合突變，突變率為1.28%(7/546)，其中聽力初篩通過4例，未通過3例；未發(fā)現(xiàn)GJB3基因突變。

2.3耳聾基因與聽力聯(lián)合篩查結(jié)果546例新生兒中，耳聾基因與聽力篩查均通過的有521例，耳聾基因與聽力篩查均未通過9例；耳聾基因篩查通過但聽力篩查未通過3例；耳聾基因篩查未通過但聽力篩查通過13例(表1)。

表1　耳聾基因篩查與聽力篩查結(jié)果(例，%)

2.4聽力診斷結(jié)果12例復(fù)篩未通過的新生兒均在3個月時進(jìn)行了聽力學(xué)診斷，確診聽力損失9例，其中2例重度聽力損失，ABR閾值左耳90、右耳80 dB nHL，耳聾基因篩查結(jié)果均為GJB2c. 235delC純合突變；1例極重度聽力損失，ABR檢測105 dB nHL雙耳未引出，耳聾基因篩查正常；2例中度聽力損失，ABR閾值左耳50、右耳55 dB nHL，耳聾基因篩查顯示GJB2c. 235delC雜合突變；4例左耳中度聽力損失，ABR閾值55 dB nHL，右耳聽力正常，耳聾基因篩查顯示2例為GJB2c. 235delC雜合突變，2例為SLC26A4基因c.919-2A>G雜合突變；3例雙耳聽力正常，耳聾基因篩查1例SLC26A4基因c.919-2A>G雜合突變，2例耳聾基因篩查正常。本組先天性聽力損失檢出率約為1.65%(9/546)。

3討論

據(jù)相關(guān)流行病學(xué)數(shù)據(jù)報道，耳聾在人群中的總體發(fā)病率為0.1%～0.3%[5]。隨著聽力篩查工作的深入開展，逐步發(fā)現(xiàn)常規(guī)的聽力篩查并不能發(fā)現(xiàn)所有先天性聾患兒，有些耳聾基因突變攜帶患兒出生時并不會表現(xiàn)出耳聾，而是在出生后數(shù)月甚至數(shù)年后才會出現(xiàn)耳聾?；驕y序是目前應(yīng)用范圍最廣也是分子診斷學(xué)中基因突變檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，不僅適用于已知耳聾基因的檢測，也適用于新的耳聾基因的發(fā)現(xiàn)。臺灣吳振吉等報道1 017例新生兒耳聾基因聯(lián)合聽力篩查中，3.7%(38/1 017)未通過聽力篩查，19.57%(199/1 017)為耳聾基因攜帶者[6]。本研究發(fā)現(xiàn)，在546例新生兒中，22例新生兒的三個基因突變位點(diǎn)異常，陽性率為4.03%(22/546)。其中，3例 GJB2 基因c.235delC純合突變，11例235delC雜合突變，其中6例出生時即表現(xiàn)為耳聾，聽力篩查未通過，耳聾基因篩查和聽力篩查結(jié)果相互得到了印證。本研究發(fā)現(xiàn)1例mtDNA12SrRNA m. 1555A>G陽性，突變率為0.18%(1/546)，該患兒出生時聽力篩查雙耳通過，但如果不做基因篩查和遺傳性聾相關(guān)指導(dǎo)，以后使用氨基糖苷類藥物時，則會出現(xiàn)不可逆的藥物性聾，因此，需告知家長該患兒應(yīng)避免使用耳毒性藥物；同時，由于線粒體DNA為母系遺傳，此基因檢測結(jié)果對該患兒家系所有母系成員均起到警示作用。本研究發(fā)現(xiàn)7例(1.28%)SLC26A4 c.919-2A>G雜合突變，其中4例聽力篩查通過，這些人即使日后不表現(xiàn)出聽力損失，但如果與具有相同基因型的攜帶者婚配，則其后代聽力損失發(fā)病率為25%。因此，耳聾基因篩查有助于耳聾遺傳信息的獲取，對婚育指導(dǎo)和提高下一代質(zhì)量有重要意義，通過采取有效的防護(hù)措施可減少聽力損失新生兒的出生或減緩新生兒聽力下降的速度[7]。

12例聽力篩查未通過的新生兒中，有3例耳聾基因篩查未見異常,可能與本研究僅篩查了四種常見耳聾相關(guān)基因有關(guān)，也可能與目前仍有許多耳聾基因未被發(fā)現(xiàn)有關(guān)。因此，耳聾基因篩查不能替代聽力篩查，聽功能的最終評估仍需聽力學(xué)檢測。但是從基因篩查的結(jié)果中可看到，本組546例新生兒中線粒體DNA12SrRNA、GJB2和SLC26A4三個常見聾病易感基因突變位點(diǎn)陽性率為4.03%，先天性聽力損失的檢出率為1.65%，說明單純進(jìn)行聽力篩查將會遺漏一部分耳聾高危兒童。

綜上所述，新生兒耳聾基因聯(lián)合聽力篩查提高了高危聾兒的檢出率，擴(kuò)大了耳聾兒童的防治與干預(yù)范圍，通過采取合適的干預(yù)措施，可真正降低耳聾患兒的出生率和發(fā)病率，對遺傳性聾的診斷、預(yù)防起到了巨大的推動作用，適合全面推廣，真正實(shí)現(xiàn)提高人口素質(zhì)的目標(biāo)。

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(2015-08-11收稿)

(本文編輯李翠娥)

【中圖分類號】R764.05

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1006-7299(2016)02-0182-03

DOI：10.3969/j.issn.1006-7299.2016.02.018

網(wǎng)絡(luò)出版時間：http://www.cnki.net/kcms/detail/42.1391.R.20160201.1619.032.html

網(wǎng)絡(luò)出版地址：2016-2-116:19

*武漢市青年科技晨光計(jì)劃項(xiàng)目(200950431210)

1武漢市婦女兒童醫(yī)療保健中心耳鼻咽喉科(武漢430016)