應(yīng)用秩和比法綜合評價(jià)幾種促透劑的效果

惲昊，肖海容，鄧春燕，王愛娟，王暉

(廣東藥學(xué)院 中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006)

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藥理學(xué)

應(yīng)用秩和比法綜合評價(jià)幾種促透劑的效果

惲昊，肖海容，鄧春燕，王愛娟，王暉

(廣東藥學(xué)院 中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006)

摘要:目的 探討基于秩和比(RSR)值的秩和比法在透皮吸收促進(jìn)劑促透效果綜合評價(jià)中的應(yīng)用。方法 研究1%冰片、1%氮酮、1%薄荷醇、1%冰片+1%氮酮、1%薄荷醇+1%氮酮和1%冰片+1%氮酮+1%薄荷醇對模型藥物雙氯芬酸鈉在雌性SD大鼠的離體背部皮膚進(jìn)行透皮實(shí)驗(yàn)，計(jì)算滯后時(shí)間、滲透系數(shù)、穩(wěn)態(tài)流量和增滲倍數(shù)，利用秩和比法的RSR值綜合評價(jià)促透效果。結(jié)果 1%冰片+1%氮酮+1%薄荷醇和1%薄荷醇+1%氮酮組對雙氯芬酸鈉的促透效果最好，1%冰片+1%氮酮、1%薄荷醇和1%氮酮次之，1%冰片最差。結(jié)論 基于RSR值的秩和比法可作為促透劑科學(xué)、客觀評價(jià)的一種新方法。

關(guān)鍵詞:秩和比法； 促透劑； 促透效果

目前考察促透劑促透效果評價(jià)的指標(biāo)主要有單一指標(biāo)評價(jià)和多指標(biāo)綜合評價(jià)法。單一指標(biāo)評價(jià)主要有穩(wěn)態(tài)透皮速率(Js)、滲透系數(shù)(Kp)、增滲倍數(shù)(ER)、累積透過量(Q)、穩(wěn)態(tài)流量(Jss)和滯后時(shí)間(Tlag)等[1]；綜合評價(jià)法有：熵權(quán)系數(shù)法[2]、主成分分析法[3]、Topsis[4]等。但單指標(biāo)評價(jià)由于評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)是界限明顯的量化標(biāo)準(zhǔn)，將遺漏一些有用的信息,往往存在不合理，難以做出確切的評價(jià)。多指標(biāo)綜合評價(jià)方法是把描述評價(jià)對象不同方面的多個(gè)指標(biāo)的信息綜合起來,并得到一個(gè)綜合指標(biāo)，由此對評價(jià)對象作一個(gè)整體上的評判，是目前比較受關(guān)注的一種評價(jià)方法。目前處于不成熟的狀態(tài)，有待進(jìn)一步研究。

秩和比法是一種多指標(biāo)評價(jià)法，集參數(shù)統(tǒng)計(jì)與非參數(shù)統(tǒng)計(jì)于一體，以秩和比為統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果的評價(jià)模型，是一種理論簡單、客觀實(shí)際、易于解釋的方法。本研究用秩和比法對不同類型促透劑的多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行綜合評價(jià)，為合理使用促透劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料

1.1動物

SPF級SD大鼠，雌性，廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供,體質(zhì)量180～220 g，生產(chǎn)許可證號：SCXK(粵)2008-0020。

1.2主要儀器

UV-2450紫外可見分光光度計(jì)(日本，島津)；雙室透皮擴(kuò)散裝置(自制)；KYC 100B恒溫氣浴(上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；電子天平(福州富日衡之寶電子有限公司)。

1.3藥品與試劑

雙氯芬酸鈉(中國藥品生物制品鑒定所，批號：H00328-200502)；氮酮(新鄉(xiāng)高金藥業(yè)有限公司，批號：20110710)；冰片(廣州化工廠)；薄荷醇(上海品純試劑有限公司，批號：201008268)；其余所用試劑均為分析純。

2方法

2.1透皮吸收實(shí)驗(yàn)

2.1.1方法學(xué)考察波長范圍內(nèi)掃描，選取其最大吸收波長275 nm作為檢測波長。精密檢測后得回歸方程為：y=0.002 05x+0.001 4(R2=1.000 0)，y為吸光度值，x為濃度值，線性范圍為：2.50～50.00 μg/mL。見圖1。

1.21.00.80.60.40.20A1020304050600y=0.0205x+0.0014R2=1.0000ρ/(μg?L-1)

圖1雙氯芬酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

Figure 1Standard curve of diclofenac sodium

實(shí)驗(yàn)測得日內(nèi)精密度RSD為：0.41%、0.42%、0.39%,日間精密度RSD為：1.65%、1.23%、0.99%，精密度良好。取5.00、10.00、25.00 μg/mL 3個(gè)濃度雙氯芬酸鈉溶液2.00 mL，每個(gè)濃度取3個(gè)樣品，分別加入10.21 μg/mL 溶液2.00 mL，測定其吸光度值，以測得量與加入量的比值計(jì)算回收率?；厥章史謩e為102.99%、102.44%、101.27%，RSD分別為0.083%、0.079%、0.036%，回收率合格。并且鼠皮浸出物對雙氯芬酸鈉在275 nm 附近沒有干擾峰出現(xiàn)，說明此實(shí)驗(yàn)方法符合檢測要求。

2.1.2離體皮膚的制備將大鼠脫臼處死后，用剃毛器小心剃去大鼠背部的毛，剪下背部皮膚，去除皮下脂肪組織，用生理鹽水反復(fù)沖洗，直至無混濁為止。然后放在4 ℃冰箱中保存，1周內(nèi)使用。

2.1.3釋放液和接收液的制備根據(jù)各促透劑的常見用量，用75%(φ)乙醇作為溶媒，制成以下各組質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)的釋放液: 1組，空白組，不含促透劑；2組，含1%冰片；3組，含1%氮酮；4組，含1%薄荷醇；5組，含1%冰片+1%氮酮；6組，含1%薄荷醇+1%氮酮；7組，含1%冰片+1%氮酮+1%薄荷醇。各組中雙氯芬酸鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均為1%,接受液為生理鹽水。

2.1.4透皮實(shí)驗(yàn)在雙室透皮擴(kuò)散裝置上[5],以離體大鼠背部的皮為滲透屏障進(jìn)行體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)。釋放液用量為0.1 mL,接收液5 mL,實(shí)驗(yàn)溫度(32.0 ±1.0) ℃,振速為120次/min，擴(kuò)散面積0.502 cm2,在2、4、8、12、24 h時(shí)間點(diǎn)分別取4 mL,同時(shí)補(bǔ)加等量接收液，測定吸光度，代入回歸方程求得濃度C，算出不同時(shí)間的累積滲透量Q。

2.1.5透皮實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)處理[4]按下式計(jì)算透皮累積滲透量Q(μg·cm-2)：

(1)

式中Q為n時(shí)間點(diǎn)的累積滲透量；A為擴(kuò)散滲透面積(cm2),Cn為第n個(gè)取樣點(diǎn)的藥物濃度(μg/mL)，Ci為第i個(gè)取樣點(diǎn)的藥物濃度,V1為接收液體積，V2為取樣量。

以Q對時(shí)間(t)進(jìn)行線性回歸擬合，所得方程的直線斜率即為穩(wěn)態(tài)流量Jss(μg·cm-2·h-1)； 滯后時(shí)間(Tlag，h)和穩(wěn)態(tài)流量Jss(μg·cm-2·h-1)的計(jì)算按下式進(jìn)行:

Q=Jss×t-Jss×Tlag

(2)

藥物的滲透系數(shù)(Kp)按下式計(jì)算：

Kp=Jss/c

(3)

式中C為樣品池的藥物濃度。

增滲倍數(shù)(ER)按下式計(jì)算：

ER=Kp/Kpo

(4)

式中Kp為加促透劑后藥物的滲透系，Kpo為藥物固有的滲透系數(shù)，即本實(shí)驗(yàn)中未加促透劑(空白)的滲透系數(shù)。

2.2秩和比法綜合評價(jià)促透劑的效果[6]

2.2.1評價(jià)指標(biāo)的分類將不同評價(jià)指標(biāo)按實(shí)際意義區(qū)分類型，一般分為3類：高優(yōu)指標(biāo)、低優(yōu)指標(biāo)和適度指標(biāo)。對于低優(yōu)指標(biāo)和適度指標(biāo)先高優(yōu)化，再按高優(yōu)指標(biāo)處理。一般情況下，對于低優(yōu)指標(biāo)，通常取原低優(yōu)指標(biāo)的倒數(shù)就可得到正向指標(biāo)Y，即

(5)

對于適度指標(biāo)Xi，應(yīng)先確定一個(gè)最優(yōu)適度值X0，再按下述公式轉(zhuǎn)化為高優(yōu)指標(biāo)：

(6)

2.2.2編秩在秩和比(RSR)法中，每一個(gè)具體指標(biāo)按其值大小進(jìn)行排序得到秩次R，用秩次R代替原來指標(biāo)值，即在n個(gè)評價(jià)對象中，高優(yōu)指標(biāo)的編秩方法是對最大觀測值編秩次n，次最大觀測值編秩次n-1，次小的觀測值編秩次2，最小的觀測值編秩1。如遇同一指標(biāo)觀測值相等時(shí)，則編秩平均秩次，如甲、乙兩個(gè)評價(jià)對象的某個(gè)指標(biāo)實(shí)際值相等，本應(yīng)它們之間排除第6位和第7位，這時(shí)均應(yīng)取為第6.5位。則排序得到的秩次為：

R11,R12……R1n

R21,R22……R1n

Rn1，Rn2……Rnn

式中：Ri(i=1,2,……,m)是按照排序的各列秩次，m為指標(biāo)數(shù)，n為被評價(jià)對象數(shù)。

2.2.3計(jì)算RSR值計(jì)算各行秩和比值：

(7)

2.2.4確定Y值，計(jì)算回歸方程將RSR值從小到大排列，計(jì)算向下累積頻率，并據(jù)此查《百分?jǐn)?shù)與概率單位對照表》，求其所對應(yīng)概率單位Y值。通過相關(guān)和回歸分析，要求R2至少大于等于0.9，以說明RSR與Y具有高度的線性相關(guān)關(guān)系。以RSR為因變量，概率單位Y為自變量，計(jì)算線性回歸方程：

RSR=A+B×Y

(8)

并進(jìn)行方差分析，要求所求線性回歸方程有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.2.5對被評價(jià)對象最佳分檔評價(jià)對象進(jìn)行分檔的原則是：每檔至少2個(gè)個(gè)體，各檔方差一致，各檔之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即應(yīng)用Bartlett檢驗(yàn)方差一致，進(jìn)而進(jìn)行方差分析，要求各檔差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A取0.01，用SNK法兩兩比較，要求各檔間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

3結(jié)果

3.1幾種促透劑對雙氯芬酸鈉透皮吸收的影響

計(jì)算Jss、Tlag、Kp和ER，見表1。考慮到實(shí)驗(yàn)中雙氯芬酸鈉使用的促透劑較多，本研究提出理想促透劑這一指標(biāo)，建立基于秩和比的評價(jià)體系。將滲透系數(shù)、穩(wěn)態(tài)流量、增滲倍數(shù)和滯后時(shí)間4個(gè)指標(biāo)按照以下原則進(jìn)行排序編秩。高優(yōu)指標(biāo)最大值編以最高秩次，最小值編以1。編秩RSR法中，按各評價(jià)指標(biāo)分別對被評價(jià)單位進(jìn)行編秩，情況越好，秩次應(yīng)編得越高，當(dāng)有相同值存在時(shí)，應(yīng)使用平均秩次，對于評價(jià)指標(biāo)，從評價(jià)方向來說，分為高、低指標(biāo)，前者是取值越大越好，后者反之。

表1　不同促透劑對雙氯芬酸鈉透皮吸收的影響

注：括號內(nèi)數(shù)字為編秩的秩次，情況越好秩次越高。

3.2各種促透劑促透效果RSR的分布情況

根據(jù)RSR的分布，計(jì)算回歸方程將各種促透劑促透效果的RSR值由小到大排列起來，計(jì)算頻率及向下累計(jì)頻率，通過查《百分?jǐn)?shù)與概率單位對照表》，求出其對應(yīng)的概率單位值Y，見表2。

表2各種促透劑促透效果RSR的分布情況統(tǒng)計(jì)

Table 2RSRdistribution of the promoting effect of different transdermal enhancers

RSRff累加RRR/n×100%Y0.179111114.33.9330.429122228.64.4350.571243～43.550.05.0000.607155571.45.5650.750166685.76.0700.893177798.0*7.054

*按1-(7/50n)校正。

運(yùn)用相關(guān)和回歸分析，RSR與Y具有較高的線性相關(guān)關(guān)系(R2=0.939 2)，它們之間的線性回歸方程為RSR=0.213 0Y-0.566 5，方差分析結(jié)果顯示：F=61.81，P=0.001<0.01,說明所求線性回歸方程非常顯著。

3.3各促透劑使用RSR分檔表情況

根據(jù)促透劑促透效果RSR值，擬分差、中、好3檔，見表3。方差分析:F比較大，P<0.01，說明分檔相差非常顯著，兩兩比較，各檔間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù)RSR由大到小大小排序分檔，得到對雙氯芬酸鈉的促透效果從優(yōu)到劣順序?yàn)?%薄荷醇+1%氮酮+1%冰片和1%氮酮+1%薄荷醇兩組最好，1%薄荷醇、1%氮酮、1%氮酮+1%冰片3組的促透效果次之，1%冰片最差。結(jié)果表明：1%薄荷醇、1%氮酮、1%冰片均有促透作用，其中作用效果最好的是三者聯(lián)用，最差的是1%冰片。

表3各促透劑使用RSR分檔表情況統(tǒng)計(jì)

Table 3Statistics of penetration enhancers usingRSRfile table

分檔差中好Y<5.05.0

4討論

由單一指標(biāo)如穩(wěn)態(tài)流量、滯后時(shí)間、滲透系數(shù)、增滲倍數(shù)簡單評價(jià)不能全面、客觀的評價(jià)反映促透劑的促透效果。秩和比法是利用穩(wěn)態(tài)流量、滯后時(shí)間、滲透系數(shù)、增滲倍數(shù)4個(gè)指標(biāo)，提出理想促透效果指標(biāo)對藥物的促透效果進(jìn)行綜合評價(jià)。秩和比法是基于秩和比這一綜合指標(biāo)來概括多個(gè)指標(biāo)綜合水平的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，利用RSR值的大小來反映促透劑的促透效果。秩和比法為反映藥物經(jīng)皮吸收情況提供了一種新方法。

秩和比法利用RSR值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，基本思想是：首先將各指標(biāo)編秩獲得無量綱統(tǒng)計(jì)量RSR值，在此基礎(chǔ)上，運(yùn)用參數(shù)統(tǒng)計(jì)分析的概念和方法，確定RSR分布，最后對RSR分析結(jié)果進(jìn)行科學(xué)闡釋．算得的RSR值越大越好，根據(jù)促透劑的促透效果，對不同指標(biāo)合理編秩進(jìn)行科學(xué)的評估，并用于指導(dǎo)促透劑的分配使用。

本次透皮吸收實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)處理利用秩和比法綜合4個(gè)指標(biāo)，評價(jià)1%薄荷醇、1%氮酮、1%冰片或者其相互聯(lián)用對雙氯芬酸鈉的促透作用。其中促透作用最好的是1%薄荷醇+1%氮酮+1%冰片。氮酮、薄荷醇和冰片3種促透劑已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于藥物透皮吸收[7-8]。薄荷醇屬于中藥促進(jìn)劑，毒副作用比人工合成促透劑低，而且本身具有一定的藥理作用，兼具治療和促透兩種作用。氮酮對皮膚的毒性、刺激性都很低，冰片的促透作用可能存在多種方式，進(jìn)入血腦屏障可能是作用機(jī)制之一[9]。冰片近年的研究表明，在臨床實(shí)踐應(yīng)用中，冰片能促進(jìn)藥物吸收，增強(qiáng)血管壁通透性，促進(jìn)血腦屏障開放，提高藥物治療效果。氮酮對皮膚的毒性、刺激性都很低。1%氮酮是良好的促滲劑[10]，是目前廣泛應(yīng)用的透皮吸收促進(jìn)劑。但三者的聯(lián)用效果有待科學(xué)的深入研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明三者聯(lián)用促透效果最好，氮酮與薄荷醇聯(lián)用效果都是最好，而冰片單用效果最差。原因可能是冰片對本實(shí)驗(yàn)采用的藥物雙氯酚酸鈉的促透效果不明顯，因此三者聯(lián)用和氮酮與薄荷醇兩者聯(lián)用效果同樣是最好。

本實(shí)驗(yàn)所用的秩和比法是一組統(tǒng)計(jì)信息分析方法，具有簡單實(shí)用、且將非參數(shù)統(tǒng)計(jì)和參數(shù)統(tǒng)計(jì)相互融通，集描述性和推斷性為一身的特點(diǎn)。將其用于評價(jià)促透劑的促透效果合理應(yīng)用上，可以消除不同指標(biāo)的影響，反映多個(gè)指標(biāo)的綜合分配情況，避免了單一指標(biāo)評價(jià)的片面性，因此，秩和比法可以作為評價(jià)促透劑促透效果的新方法。

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(責(zé)任編輯：幸建華)

Evaluation of promoting effect of several transdermal enhancers withRSR

YUN Hao,XIAO Hairong,DENG Chunyan,WANG Aijuan,WANG Hui

(SchoolofTraditionalChineseMedicine,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China)

Abstract:Objective To investigate the application of RSR in evaluating the promoting effect of transdermal enhancers. Methods Diclofenac sodium was used as drug mode. 1% borneolum,1% azone,1% menthol,1% borneolum+1% azone,1% menthol+1% azone and 1% borneolum+1% azone+1% menthol were used as transdermal enhancers. Transdermal absorption experiment of diclofenac sodium was detected on the device of penetrating skins of rat in vitro and lag time,penetrating rates,steady fluxes and enhancement ratio were calculated to evaluate the promoting effect of transdermal enhancers with RSR. Results The promoting effect on diclofenac sodium showed that 1% borneolum+1% azone+1% menthol and 1% menthol+1% azone were the best. The function drops slightly with 1% azone+1% borneolum,1% menthol and 1% azone ranked behind. The worst was 1% borneolum. Conclusion The promoting effect of transdermal enhancers could be objectively evaluated by RSR.

Key words:RSR; transdermal enhancers; promoting effects of transdermal enhancers

DOI:10.16809/j.cnki.1006-8783.2015102303

中圖分類號:R283

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號:1006-8783(2016)01-0061-05

作者簡介：惲昊，男，2013級碩士研究生,主要從事中藥皮膚藥理學(xué)的研究，Email：xikuangyh@163.com；通信作者：王暉(1964—)，男，碩士，教授，主要從事皮膚藥理學(xué)研究，Email:gdwanghui2006@126.com。

基金項(xiàng)目：廣東省人才培養(yǎng)模式創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)區(qū)([粵教高函[2014]97號])資助項(xiàng)目

收稿日期：2015-10-23

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-01-12 11:44網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160112.1144.005.html