銀翹散的抗病毒作用研究進展

范紅江　王克林

(中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所,北京,100700)

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銀翹散的抗病毒作用研究進展

范紅江王克林

(中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所,北京,100700)

文章從銀翹散單味藥實驗研究、銀翹散復(fù)方實驗研究對銀翹散抗病毒效應(yīng)作一綜述,為進一步深入探討其作用機制提供基礎(chǔ)。

銀翹散;流感;抗病毒效應(yīng);研究進展

銀翹散出自《溫病條辨》,是清代著名醫(yī)家吳瑭論治溫病的重要方劑之一。此方是吳氏謹遵《黃帝內(nèi)經(jīng)》“風(fēng)淫于內(nèi),治以辛涼,佐以苦甘;熱淫于內(nèi),治以咸寒,佐以甘苦”的宗旨,法喻嘉言芳香逐穢之說,又用李東垣清心涼膈散而成,此法為辛涼解表之法[1]。全方共金銀花、連翹、牛蒡子、生甘草、芥穗、淡豆豉、薄荷、竹葉、苦桔梗、蘆根10味藥,奇奏辛涼解表,清熱解毒之功。方中加辛涼之銀花、芳香之芥穗,散熱解毒;潤肺辛平之牛蒡子,解熱散結(jié),除風(fēng)利咽,皆手太陰藥也;而病初起,且去入里之黃芩,勿犯中焦[1]。臨床用治溫病初起,發(fā)熱微惡風(fēng)寒,無汗或有汗不暢,頭痛口渴,咳嗽咽痛,舌尖紅,苔薄白或薄黃,脈浮數(shù)[2]。現(xiàn)代臨床主要用于流感[3]、手足口病[4]、外感耳鳴[5]、紫癜性腎炎[6]、玫瑰糠疹[7]、菊池病[8]等。我們就近20年來銀翹散之抗病毒研究綜述如下。

1　銀翹散方中單味藥的抗病毒效應(yīng)之實驗研究

銀翹散中主要抗病毒藥物有金銀花、連翹、牛蒡子、生甘草。

1.1金銀花《本草新編》謂其消毒、解毒、敗毒、散毒之神品。金銀花中富含揮發(fā)油、有機酸、環(huán)烯醚萜、黃酮以及三萜皂苷等多種化學(xué)成分,這些成分也正是金銀花發(fā)揮抗病毒的有效物質(zhì)[9]。金銀花中活性成分綠原酸對呼吸道合胞病毒和柯薩奇B組3型病毒具有明顯的抑制作用[10]。金銀花中黃酮類成分有較強的抗呼吸道病毒作用[11]。金銀花1∶20水煎劑抗流感病毒和皰疹病毒有效[12]。雙花噴霧劑體內(nèi)實驗表明[13]大劑量(114 g/kg·d)對小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖有顯著抑制作用。

1.2連翹《神農(nóng)本草經(jīng)》謂其專主結(jié)熱蠱毒,惡瘡癭瘤,寒熱鼠瘺,瘰疬癰腫。連翹揮發(fā)油對流感病毒感染小鼠有保護作用,在雞胚內(nèi)能抑制流感病毒亞甲型、副流感仙臺株的增殖[14]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)[15]連翹具有抗病毒作用,且連翹水煎劑在Hep-2細胞有明顯抑制HSV-1作用。有研究認為連翹抑制RSV活性作用可能是通過抑制合胞體的形成實現(xiàn)的[16]。在Hep-2細胞中,連翹不同部位的有效成分對單純皰疹病毒的復(fù)制過程均有抑制作用,且抑制作用程度與有效成分的部位有關(guān)[17]。

1.3牛蒡子《本草經(jīng)疏》謂其散風(fēng)除熱解毒要藥。主要活性成分有牛蒡子苷和牛蒡子苷元。牛蒡子苷的定量測定對于銀翹散抗流感病毒有效部位群(EFY)的質(zhì)量控制應(yīng)具有重要意義[18]。牛蒡子苷元是抗HIV/AIDS的活性物質(zhì),它對人類免疫缺陷病毒I(HIV-1)及DNA拓撲異構(gòu)酶2整合酶活性有抑制作用[19]。牛蒡子乙醇提取物能抑制B95-8細胞中EBV抗原的表達,且抑制效果較好,除藥后仍有較長時間的抑制作用,細胞毒性作用甚微[20]。王雪峰[21]發(fā)現(xiàn)牛蒡子提取物可有效抑制甲型流感病毒FM1株。

1.4甘草《本經(jīng)逢原》謂其九土之精,梢去莖中痛,節(jié)解癰疽毒,條草生用解百藥毒。甘草主要成分有甘草酸、甘草苷、甘草甜素、甘草次酸等。在HeLa細胞中,抗病毒有效部位(GD4)具有明顯抑制呼吸道合胞病毒的作用[22]。在Vero細胞內(nèi),甘草酸有抑制CVB3病毒增殖的作用,且其作用與濃度的變化密切相關(guān),這些是在等量病毒感染細胞的前提下完成的[23]。甘草黃酮具有良好的抗艾滋病毒效果[24],但它抑制HIV感染的有效濃度高,范圍較窄[25]。體外研究發(fā)現(xiàn),甘草甜素除了抑制帶狀皰疹病毒(VZV)的增殖(ID50=0.71 mmol/L)外,還對VZV有直接滅活作用[26]。實驗證明甘草酸可誘導(dǎo)干擾素增強自然殺傷細胞活動、激活免疫,并且可以抑制HIV增殖[27]。甘草多糖具有明顯的抗水皰性口炎病毒、腺病毒3型,單純皰疹病毒1型和牛痘病毒活性作用,具體表現(xiàn)為明顯抑制CPE的形成,且具有較好的保護培養(yǎng)細胞的作用[28]。

2　銀翹散方加減抗病毒效應(yīng)與機制研究

石鉞等[29-30]研究發(fā)現(xiàn),金銀花、連翹、荊芥、薄荷對銀翹散抗病毒有效部位群(EFY)貢獻程度最大,且黃酮類成分(醉魚草苷、金合歡素、金絲桃苷等)可能是銀翹散抗流感病毒的主要物質(zhì)基礎(chǔ)之一。銀翹散體外實驗對甲1型流感病毒的增殖未見抑制作用,但體內(nèi)實驗結(jié)果表明,可顯著改善流感病毒引起的小鼠肺炎癥狀,延長生存率,對甲1型流感病毒感染小鼠有死亡保護作用,對病毒性感冒顯示了較好的療效[31]。而周遠鵬等研究發(fā)現(xiàn),銀翹解毒片體內(nèi)表現(xiàn)出明顯減少病毒引起的死亡,體外也有明顯的抗病毒作用[32],這與前者研究結(jié)果略有不同。銀翹滴鼻劑抗病毒作用優(yōu)于銀翹解毒丸[33]。銀翹散含有的有效成分是牛蒡子素和甘草甜素,單獨應(yīng)用抗病毒效果弱于銀翹散,這提示銀翹散在各種成分協(xié)同下抗病毒作用大于單獨成分的抗病毒效果[34]。銀翹散體內(nèi)抗病毒效果水提物強于乙醇提取物[35]。與此不同,另有體外研究發(fā)現(xiàn),30%醇提物抑制流感病毒作用最強。Kobayashi M等研究結(jié)果表明,銀翹散對流感病毒感染小鼠的保護作用主要表現(xiàn)在提高存活率、延長平均存活時間和減少肺實變3個方面[36]。吳瑩等研究發(fā)現(xiàn),銀翹散合犀角地黃湯(XDY)及其含藥血清,可明顯抑制流感病毒性肺炎小鼠肺泡巨噬細胞內(nèi)炎性細胞因子、炎性遞質(zhì)、氧自由基的產(chǎn)生[37-38]。

XDY治療流感病毒性肺炎的作用機制,可能與抑制流感病毒感染引起的RPMVECs黏附分子表達,或可能是主要通過抑制機體的炎癥級聯(lián)反應(yīng)有關(guān)[39-40]。張秀英等研究[41]發(fā)現(xiàn),流感病毒感染小鼠時激活了MyD88/NF-κBP65信號通路,雙表法(銀翹散合玉屏風(fēng)散)能較好的抑制MyD88 mRNA及NF-κBP65 mRNA的表達。銀翹散治療病毒性肺炎的機制是通過抑制TLR-7介導(dǎo)的MYD88依賴性信號通路,抑制了NF-κBP65的表達,或很可能是降低NF-κBp65、TLR4表達[42]。時宇靜等[43]研究發(fā)現(xiàn),銀翹散可能通過上調(diào)流感病毒感染鼠肺組織內(nèi)IFN-γmRNA相對表達量,來發(fā)揮抗流感病毒的作用。銀翹散可以降低血清中IFN-γ,從而減少炎性損傷,并且IgG含量與感染模型組差異不明顯,有可能因為在病毒早期,機體只能產(chǎn)生具有親和力的抗體[44]。銀翹解毒口服液不僅提高流感病毒FM1感染SCID小鼠血清TGF-β1含量,降低TNF-α含量,維持免疫系統(tǒng)的平衡,而且有提高小鼠脾臟NK細胞活性以及血清IFN-γ含量的作用,并且對NK細胞活性和IFN-γ含量具有不同的時效影響[45-47]。

3　討論

以上關(guān)于銀翹散抗病毒研究可以分為體內(nèi)、體外研究方法,其中體外研究方法一般采用流感病毒感染MDCK細胞法和雞胚法,體內(nèi)研究方法往往采用流感病毒肺適應(yīng)株感染小鼠模型。隨著對銀翹散研究的不斷深入，也發(fā)現(xiàn)了一些問題:1)銀翹散體外是否具有抗病毒效應(yīng)報道不一致,有待深入的實驗研究;2)銀翹散抗流感病毒機制與TL7的表達相關(guān)?還是與TL4的表達相關(guān)?或者二者表達都相關(guān)?有待深入研究予以確認;3)銀翹散抗流感病毒效應(yīng)多為體外藥效學(xué)實驗,缺少體內(nèi)實驗證實;4)銀翹散制劑及銀翹散的量-效關(guān)系有待于進一步重視。

中醫(yī)傳統(tǒng)理論認為:“大都發(fā)散之藥,及芳香之藥,不宜多煎,取其多而疏蕩……故方藥雖中病,而煎法失度,七藥必?zé)o效”。吳鞠通在銀翹散方后注:“香氣大出”“勿過煎”的要求,體現(xiàn)了吳氏“治上焦如羽,非輕莫舉”之用藥原則。故煎煮時間是銀翹散抗病毒作用有效發(fā)揮的重要保證,今后應(yīng)該予以重視。使用血凝實驗來探討中藥復(fù)方干預(yù)研究中,常常引發(fā)紅細胞聚集現(xiàn)象,并導(dǎo)致假陽性結(jié)果[36],因此,必須先測定中藥的最大不凝血濃度,以盡可能的避免不良的影響因素[49]。

[1]吳瑭.溫病條辨[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:18-19.

[2]鄧中甲.方劑學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2010:34.

[3]李曦,段玲,歐陽剛.銀翹散加減治療甲型H1N1流感43例[J].河南中醫(yī),2014,34(10):1938-1939.

[4]王云飛,劉偉霞,于秋麗.銀翹散加減治療外感后耳鳴36例[J].中國鄉(xiāng)村醫(yī)藥,2006,13(6):49.

[5]朱奕豪,王真,陳婉姬.銀翹散加藿樸夏苓湯治療小兒手足口病的隨機臨床對照研究[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2008,32(4):448-449.

[6]韓玉昆,郭鵬麗,王衛(wèi)東.銀翹湯加減治療紫癜性腎炎65例[J].光明中醫(yī),2014,29(1):68-69.

[7]徐忠良,鐘堅,張璉影.銀翹散加味治療玫瑰糠疹38例[J].江西中醫(yī)藥,2006,37(10):37.

[8]管煒,胡愛民.銀翹散治療菊池病1例[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2014,34(5):631-632.

[9]王亞丹,楊建波,戴忠,等.中藥金銀花的研究進展[J].藥物分析雜志,2014,34(11):1928-1935.

[10]劉恩荔,李青山.大孔吸附樹脂分離純化金銀花中總有機酸的研究[J].中草藥,2006,37(12):1792-1796.

[11]馬雙城,劉燕,畢培曦,等.金銀花藥材中抗呼吸道病毒感染的黃酮類成分的定量研究[J].藥物分析雜志,2006,26(4):426-430.

[12]胡克杰,孫考祥,王璟璐,等.氯原酸體外抗病毒作用研究[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2001,35(6):430-432.

[13]馬丙祥,段曉穎,王志超.雙花噴霧劑治療小兒上呼吸道感染臨床與實驗研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2000,20(9):653.

[14]馬振亞,趙愛玲.連翹種子揮發(fā)油抗流感病毒等病原微生物作用的實驗研究[J].山西新醫(yī)藥,1980,9(11):51.

[15]張欣.中草藥連翹、白芍水煎劑的抗病毒作用研究[J].天津醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1990,14(1):35-38.

[16]田文靜,李洪源,姚振江,等.連翹抑制呼吸道合包病毒作用的實驗研究[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)報,2004,38(5):421-423.

[17]劉穎娟,楊占秋,肖紅,等.中藥連翹有效成分體外抗單純皰疹病毒的實驗研究[J].湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2004,6(1):36-38.

[18]石鉞,石任兵,陸蘊如,等.RP-HPLC測定銀翹散抗流感病毒有效部位群中牛蒡子苷的含量[J].中國藥學(xué)雜志,2003,38(4):293-295.

[19]E Eich,H Pertz,M Kaloga,et al.(-)-Arctigenin as a lead structure for inhibitors of human immunodeficiency virus type-1 integrase[J].Journal of medicinal chemistry,1996,39(1):86-95.

[20]陳鐵宏,黃迪.牛蒡子對Epstein-Barr病毒抗原表達的抑制作用[J].中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志,1994,8(4):323-326.

[21]王雪峰,潘曌曌,閆麗娟,等.牛蒡子提取物體外抗甲型流感病毒FM1株的實驗研究[J].中醫(yī)研究,2007,20(6):18-21.

[22]王秀琴,李洪源,劉鑫妍,等.甘草抗病毒有效部位(GD4)體外抑制呼吸道合胞病毒作用的研究[J].中藥材,2006,29(7):692-694.

[23]何巧靈.甘草酸體外抗柯薩奇B3病毒感染的研究[D].杭州:浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院,2002:19-20.

[24]孫蕓,阿依努爾·吾買爾,燕雪花,等.甘草黃酮的提取方法及藥理作用研究進展[J].新疆中醫(yī)藥,2009,27(1):72-75.

[25]Pliasunova OA,Il′ina TV,IaIu K,et al.The anti-HIV activity of glycyrrhizic acid penta-O-nicotinate[J].Vestn Ross Akad Med Nauk,2004(11):42-6.

[26]Baba M,Shigeta S.Antiviral activity of glycyrrhizin against varicella-zoster virus in vitro[J].Antiviral Res,1987,7(2):99-107.

[27]劉麗萍,任翠愛,趙宏艷.甘草酸的免疫調(diào)節(jié)作用研究進展[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2010,16(6):272-276.

[28]常雅萍,畢無邪,楊貴貞.甘草多糖抗病毒作用研究[J].中國中藥雜志,1989,14(4):44-46.

[29]石鉞,石任兵,劉斌,等.銀翹散抗流感病毒有效部位群總黃酮含量的測定[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2001,24(2):44-45.

[30]石鉞,石任兵,劉斌,等.銀翹散抗流感病毒有效部位群中黃酮類成分研究[J].中國中藥雜志,2001,26(5):320-322.

[31]楊子峰,黃碧松,劉妮,等.銀翹散抗甲1型流感病毒作用的實驗研究[J].中國熱帶醫(yī)學(xué),2005,5(7):1423-1425.

[32]周遠鵬,江京莉,嚴少敏,等.銀翹解毒片的藥理研究[J].中成藥,1990,12(1):22-25.

[33]唐湘娟,劉禮意,陳顯雄,等.銀翹滴鼻劑藥理作用的研究[J].湖南中醫(yī)雜志,1999,15(2):51-52.

[34]Chu XL.Research progression antivirus of Chinese Traditional Medicine[J].Chen J Trad Veter Sci,2006(1):33-36.

[35]陳俏妍,李潤峰,楊春光,等.不同銀翹散提取物體內(nèi)抗甲型流感作用的比較[J].新中醫(yī),2013,54(10):141-142.

[36]Kobayashi M,Davis SM,Utsunomiya T,et al.Antiviral effect of gingyo-san，a traditional Chinese herbal medicine,on influenza A2 virus infection in mice[J].Am J Chin Med,1999,27(1):53-62.

[37]吳瑩,李季倩,孟建,等.犀角地黃湯合銀翹散對流感病毒性肺炎小鼠炎性因子和自由基表達的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2012,19(7):28-30.

[38]吳瑩,金葉智,孟建,等.犀角地黃湯合銀翹散含藥血清抑制流感病毒感染大鼠肺泡巨噬細胞致炎物質(zhì)的研[J].中華中醫(yī)藥雜志,2010,25(12):1974-1978.

[39]張晨月,張舒,吳瑩,等.犀角地黃湯合銀翹散對流感病毒感染的小鼠肺組織及大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞ICAM-1和VCAM-1表達的影響[J].中國病理生理雜志,2013,29(9):1685-1690.

[40]郝鈺,李季倩,吳瑩,等.犀角地黃湯合銀翹散對流感病毒性肺炎小鼠肺病毒滴度和肺組織病理改變的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2010,33(11):739-744,后插1.

[41]張秀英,王雪峰,王思源,等.雙表法對流感病毒感染鼠肺組織MyD88及NF-κB P65mRNA表達的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)雜志,2014,23(10):1027-1030.

[42]張海嬰,王雪峰,王思源,等.銀翹散提取物對流感病毒性肺炎小鼠組織TLR4及NF-κBp65的影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2014,25(10):2321-2323.

[43]時宇靜,趙曄,姜晶,等.銀翹散對流感病毒感染小鼠模型肺組織病毒載量和IFN-γ mRNA表達的影響[J].中國藥學(xué)雜志,2008,43(19):1475-1478.

[44]朱露莎,畢明剛,季宇彬.銀翹散對流感病毒FM1感染胸腺缺陷小鼠血清中INF-γ、IgG含量的影響[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2009,5(2):13-15.

[45]馬榮,鄧景岳,劉東華,等.銀翹解毒口服液對流感病毒FM1感染SCID小鼠血清TNF-α及TGF-β1含量的影響[J].中國中藥雜志,2010,35(18):2488-2490.

[46]馬榮,許揚,畢明剛,等.銀翹解毒口服液對流感病毒FM1感染SCID小鼠NK細胞活性及IFN-γ含量的影響[J].中國中藥雜志,2010,35(11):1456-1459.

[47]潘曌曌,王雪峰,岳志軍,等.金銀花、連翹配伍提取物體外抗甲型流感病毒FM1株的實驗研究[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2007,24(2):5-8.

(2015-05-05收稿責(zé)任編輯：王明)

Research Progress on the Antiviral Effect of Yinqiao San

Fan Hongjiang, Wang Kelin

(InstituteofTraditionalChineseMedicineBasicTheoryofChineseAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China)

This paper reviewed literature on Yinqiao San single medicine research and its compound application research and tried to summarize the antiviral effect of Yinqiao San, and thus to shed lights on its mechanism of action.

Yinqiao San; Antiviral effect; Research progress

國家重大科技專項(編號:2012ZX10004301008);中國中醫(yī)科學(xué)院自主選題項目(編號:YZ-1413)

王克林(1964.05—),男,研究生,研究員,病毒病中心主任,研究方向:中醫(yī)藥防治流感與艾滋病分子機制研究,E-mail:wang_kl@hotmail.com

R285

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.07.059