不同卵巢儲(chǔ)備功能患者血清GnSAF水平比較

田陽(yáng)，謝鐵男，扈聰，鄧萍，劉彥紅

(1吉林大學(xué)第一醫(yī)院生殖產(chǎn)前中心，長(zhǎng)春 130021；2 吉林省腫瘤醫(yī)院)

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不同卵巢儲(chǔ)備功能患者血清GnSAF水平比較

田陽(yáng)1，謝鐵男1，扈聰1，鄧萍2，劉彥紅1

(1吉林大學(xué)第一醫(yī)院生殖產(chǎn)前中心，長(zhǎng)春 130021；2 吉林省腫瘤醫(yī)院)

目的 比較不同卵巢儲(chǔ)備功能患者血清促性腺激素平抑因子(GnSAF)水平。方法 根據(jù)卵巢儲(chǔ)備功能將244例患者分為卵巢功能正常組(60例)、卵巢高反應(yīng)組(111例)、卵巢功能減退組(73例)，采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)三組患者血清GnSAF并進(jìn)行比較。采用Spearman分析所有患者血清GnSAF水平與抗苗勒管激素(AMH)、基礎(chǔ)卵泡刺激素(FSH)、竇狀卵泡數(shù)(AFC)的相關(guān)性。結(jié)果 卵巢功能正常組、卵巢高反應(yīng)組、卵巢功能減退組血清GnSAF水平分別為25.52(18.51～32.53)、27.56(20.26～34.33)、27.125(22.181～33.281)pg/mL，三組比較，P均>0.05。在244例患者中，血清GnSAF水平與AMH(r=-0.028，P=0.668)、FSH(r=-0.012，P=0.856)、AFC(r=0.022，P=0.728)無(wú)關(guān)。結(jié)論 不同卵巢儲(chǔ)備功能患者血清GnSAF水平無(wú)差異。

卵巢儲(chǔ)備功能；卵泡；促性腺激素平抑因子；抗苗勒氏管激素;卵泡刺激素

輔助生育技術(shù)尤其是體外受精-胚胎移植技術(shù)(IVF-ET)已成為治療不孕癥的最佳手段?？刂菩猿倥怕咽禽o助生殖技術(shù)的關(guān)鍵，而促排卵很大程度取決于卵巢的儲(chǔ)備功能。臨床醫(yī)生需要對(duì)患者的卵巢功能進(jìn)行預(yù)測(cè)，選擇最佳的促排卵方案，提高促排卵的成功率。促性腺激素平抑因子(GnSAF)是由卵泡刺激素(FSH)刺激卵巢顆粒細(xì)胞產(chǎn)生的一種能夠降低垂體對(duì)促性腺激素致敏作用的非甾體類(lèi)激素。前期研究發(fā)現(xiàn)，卵巢儲(chǔ)備功能低下患者卵泡液中的GnSAF水平較正常人低，但由于卵泡液提取相對(duì)困難，因此希望尋求一種更為簡(jiǎn)單直接的預(yù)測(cè)卵巢儲(chǔ)備功能的指標(biāo)[1]。本研究比較了不同卵巢儲(chǔ)備功能患者血清GnSAF水平，探討用血清GnSAF評(píng)估患者卵巢儲(chǔ)備功能的可行性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年4月～2016年1月在吉林大學(xué)第一醫(yī)院生殖中心就診的不孕癥及孕前優(yōu)生檢查的患者244例，根據(jù)卵巢儲(chǔ)備功能[2]將其分為卵巢功能正常組(60例)、卵巢高反應(yīng)組(111例)、卵巢功能減退組(73例)。卵巢功能正常組、卵巢高反應(yīng)組、卵巢功能減退組年齡分別為(31.1±4.5)、(27.0±3.9)、(36.1±7.3)歲，抗苗勒管激素(AMH)分別為2.23(1.745～3.30)、9.16(7.05～10.49)、0.51(0.23～0.91)ng/mL，基礎(chǔ)FSH分別為6.295(5.295～7.415)、5.94(5.45～6.63)、8.07(6.34～12.94)mIU/mL，竇狀卵泡數(shù)(AFC)分別為14.41(11～16.22)、24.41(23.11～26.16)、5.86(3.85～7.90)個(gè)，三組比較，P均<0.01。所有入選對(duì)象均提前告知血清將用于臨床科學(xué)研究，簽署知情同意書(shū)且本研究已獲吉林大學(xué)第一醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 血清GnSAF檢測(cè) 所有研究對(duì)象均于月經(jīng)第2～4天(月經(jīng)失調(diào)或閉經(jīng)患者時(shí)間不限，但需B超監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示雙側(cè)卵巢中無(wú)優(yōu)勢(shì)卵泡)清晨空腹抽取靜脈血5 mL，并當(dāng)日于離心機(jī)上3 000 r/min離心10 min，取上清液分裝于離心管中保存于-80 ℃冰箱，避免反復(fù)凍融。血清GnSAF測(cè)定采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，采用自動(dòng)酶標(biāo)儀于波長(zhǎng) 450 nm處讀取OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算血清GnSAF水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。非正態(tài)分布計(jì)量資料以中位數(shù)(四分位數(shù)范圍)表示,比較采用Kruskal-Wallis非參數(shù)檢驗(yàn)。GnSAF水平和其他指標(biāo)之間的相關(guān)性分析采用Spearman分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

卵巢功能正常組、卵巢高反應(yīng)組、卵巢功能減退組血清GnSAF水平分別為25.52(18.51～32.53)、27.56(20.26～34.33)、27.13(22.18～33.28)pg/mL，三組比較，P均>0.05。在244例患者中，血清GnSAF水平與AMH(r=-0.028，P=0.668)、FSH(r=-0.012，P=0.856)、AFC(r=0.022，P=0.728)無(wú)關(guān)。

3 討論

卵巢儲(chǔ)備功能是指卵巢皮質(zhì)中剩余的仍具有功能的生殖細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量，是女性生育潛能的一個(gè)重要標(biāo)志[3]。評(píng)估卵巢儲(chǔ)備功能能提供更多的預(yù)后信息，間接預(yù)測(cè)卵巢的反應(yīng)性，有助于臨床醫(yī)生為患者提供咨詢(xún)和制定個(gè)體化治療方案。前期的研究[1]認(rèn)為，GnSAF是一種良好的預(yù)測(cè)卵巢反應(yīng)性的指標(biāo)。但血清GnSAF水平在預(yù)測(cè)卵巢儲(chǔ)備功能方面的價(jià)值還沒(méi)有定論。

GnSAF是人卵泡液中分離出的一種分子量為12.5 kDa、對(duì)應(yīng)序列為人類(lèi)血清白蛋白C-末端子區(qū)域ⅢB的一段含有95個(gè)氨基酸的多肽鏈[4～6]。但目前對(duì)于此物質(zhì)確切的氨基酸序列及物質(zhì)特征仍需要進(jìn)一步的研究與探討。同AMH一樣，GnSAF也是由在竇前卵泡和小卵泡的顆粒細(xì)胞產(chǎn)生，并且在自然周期為6～8 mm而FSH刺激周期直徑<11 mm的卵泡中GnSAF的生物活性最高。因GnSAF與雌激素的拮抗作用，在卵泡早期雌激素濃度一直維持在低水平，當(dāng)一個(gè)優(yōu)勢(shì)卵泡出現(xiàn)，其他小卵泡自行閉鎖。GnSAF的濃度降低，對(duì)垂體的抑制作用開(kāi)始減弱，從而增加GnRH誘導(dǎo)的黃體生成素(LH)的釋放，但是對(duì)基礎(chǔ)的FSH作用不大。相應(yīng)的卵泡分泌雌激素增加，正反饋效應(yīng)引起FSH、LH峰的出現(xiàn)。因此GnSAF在控制卵泡發(fā)育、調(diào)節(jié)內(nèi)源性LH峰以及避免過(guò)早黃素化等方面起重要作用[7～9]。

有研究[3]發(fā)現(xiàn)，一般大于40歲的女性卵巢儲(chǔ)備功能減退的發(fā)生率超過(guò)50%，對(duì)促性腺激素的反應(yīng)性也大幅下降，生育力下降速度也更快。本研究發(fā)現(xiàn)卵巢功能減退組年齡大于功能正常組、高反應(yīng)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與上述研究觀點(diǎn)相符，因此可以用年齡對(duì)卵巢儲(chǔ)備功能進(jìn)行粗略預(yù)測(cè)。但由于我們并不能預(yù)測(cè)卵巢儲(chǔ)備功能下降的速度及質(zhì)量，故而相似年齡段的女性的卵巢儲(chǔ)備功能卻不一定相同。基礎(chǔ)FSH水平即是指月經(jīng)周期第2～4天(即卵泡早期)時(shí)血清中FSH的含量。卵巢儲(chǔ)備功能減退的女性卵泡數(shù)目減少，從而導(dǎo)致顆粒細(xì)胞減少，其產(chǎn)生的抑制素減少，卵泡早期FSH濃度增加。沒(méi)有明確的卵巢功能減退患者的FSH閾值，但根據(jù)各項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)SH>10 U/L對(duì)預(yù)測(cè)卵巢功能減退有很高的敏感性(83%～100%)[2]。本研究中的卵巢功能減退組FSH水平明顯高于功能正常組和高反應(yīng)組，與此觀點(diǎn)相符。但由于FSH在各個(gè)周期間及周期內(nèi)的波動(dòng)使得它在預(yù)測(cè)卵巢儲(chǔ)備功能方面存在相對(duì)的局限性[10]。AMH是一類(lèi)肽類(lèi)生長(zhǎng)因子，屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β家族，由竇前卵泡及小的竇狀卵泡的顆粒細(xì)胞產(chǎn)生，不依賴(lài)促性腺激素，在各個(gè)時(shí)間保持相對(duì)一致性，測(cè)定時(shí)間沒(méi)有特殊要求，相對(duì)更加方便、簡(jiǎn)單。研究[11]發(fā)現(xiàn)，在老年女性FSH增加之前,AMH已經(jīng)開(kāi)始降低，因此相比較而言，它對(duì)于預(yù)測(cè)卵巢儲(chǔ)備功能更準(zhǔn)確。根據(jù)目前的研究證據(jù)發(fā)現(xiàn)，AMH<1.1 ng/mL預(yù)示著卵巢反應(yīng)性降低、妊娠結(jié)局差，AMH>4.5 ng/mL則預(yù)示著卵巢的高反應(yīng)性，且敏感性及特異性都很高。

本研究通過(guò)檢測(cè)不同卵巢儲(chǔ)備功能患者血清GnSAF水平，發(fā)現(xiàn)卵巢高反應(yīng)組血清GnSAF水平高于卵巢功能減退組、卵巢功能正常組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并沒(méi)有出現(xiàn)理論上的卵巢反應(yīng)低下組GnSAF水平降低的結(jié)果，提示不能用血清GnSAF評(píng)估卵巢儲(chǔ)備功能，考慮與患者卵泡數(shù)增多引起GnSAF稀釋及其生物活性降低有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，患者卵泡液的容量增長(zhǎng)了2.6倍，但是GnSAF的生物活性卻降低了22倍[12]。GnSAF由卵泡顆粒細(xì)胞產(chǎn)生并分泌到卵泡液中，在入血過(guò)程中生物活性可能受到了一定物質(zhì)的滅活，或者入血過(guò)程中發(fā)生了GnSAF的丟失。卵巢功能減退組的患者多是在我中心行IVF-ET治療的患者，目前最常用的控制性促排卵藥物即為含F(xiàn)SH及LH成分的藥物，此藥物的應(yīng)用是否提高了這部分患者GnSAF水平值得深一步的研究，且部分卵巢儲(chǔ)備功能下降者卵泡提前募集可能使得GnSAF峰值提前出現(xiàn)。

綜上所述，不同卵巢儲(chǔ)備功能患者血清GnSAF水平無(wú)差異，不能用血清GnSAF評(píng)估患者卵巢儲(chǔ)備功能。

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吉林省發(fā)改委基金資助項(xiàng)目(2010019-2)。

謝鐵男(E-mail: xietienan@126.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.35.024

R711.6

B

1002-266X(2016)35-0073-03

2016-06-22)