淺談如何做好禽流感的檢測工作

張 雁

（酒泉市肅州區(qū)銀達鎮(zhèn)畜牧站，甘肅酒泉 735000）

淺談如何做好禽流感的檢測工作

張 雁

（酒泉市肅州區(qū)銀達鎮(zhèn)畜牧站，甘肅酒泉 735000）

已知的流感病毒分 A、B、C3 個血清型。A 型的為人畜（禽）共患，B、C 型僅對人致病。禽流感則是由 A 型禽流感病毒引起的傳染病，又稱真性雞瘟（歐洲雞瘟）。按流感病毒的致病性不同分為 3 類：高致病性毒株如 H5N1、中弱毒株如 H9N2和無毒株。雖然禽流感病毒血清型很多，分離毒株上千株，但有致病性的毒株占極少數，大多數為無毒株，只有高致病性禽流感病毒才對養(yǎng)禽業(yè)造成毀滅性的損失。

禽流感；抗體檢測；免疫

禽流感早期又稱真性雞瘟、歐洲雞瘟。近幾年，許多國家和地區(qū)相繼暴發(fā)本病。在病毒學上，禽流感病毒屬于正粘病毒科A型流行性感冒病毒屬。禽流感病毒根據血凝素（HA）分為16個亞型（分別為H1-H16）；根據神經氨酸酶（NA）可分為10個亞型（分別為N1-N10）。臨床上常見的血清型毒株有H9N2、H5N1、H7N3等。這些禽流感病毒在不同禽類品種上表現的臨床癥狀和病理變化不盡相同。

禽流感監(jiān)測最為常用的是微量紅細胞凝集抑制試驗（HI檢測），其優(yōu)點是所用儀器設備簡單，操作簡便、快速等，在基層獸醫(yī)實驗室及養(yǎng)禽場普遍應用。但常因不能正確熟練地掌握這一技術或試驗條件不具備，而影響監(jiān)測結果，從而錯失免疫良機，造成疫情發(fā)生，遭受嚴重損失。現將禽流感監(jiān)測工作應注意的幾個問題，淺析如下：

1 正確采樣

1.1 采樣時間

應根據抗體產生的規(guī)律，在免疫后21～30 d左右進行采樣監(jiān)測，依此結果來判定免疫質量和雞群免疫后抗體水平，指導免疫工作的進行。如果只簡單地隨機采樣，就會出現：（1）剛剛免疫后就采樣 這時抗體水平還未上升，其測的結果，不能說明免疫工作做得好壞。（2）免疫后期采樣 在免疫后期或是超過免疫期的時間采樣監(jiān)測時，其抗體水平必然會下降，這是正常的。此時測得的結果不能認為是免疫失敗，而是采樣監(jiān)測時間較晚。應及時采取免疫措施。

1.2 采樣登記

在采樣時，應注意將雞舍棟號、品種、代次、日齡、規(guī)模、采樣數量、免疫情況（免疫程序、時間、疫苗種類、疫苗生產廠家、免疫質量等）進行詳細登記。以便監(jiān)測后進行結果的分析和判斷，為免疫工作提供科學依據。

1.3 采樣數量

采樣數量少，測得的結果不能代表全群抗體水平。因此，采血時，應根據雞群數量多少，按照一定的比例采樣。一般雞群500羽要采10～15羽；1 000羽雞群要采15～20羽；2 000～4 000羽雞群要采20～25羽；5 000羽以上的雞群采30羽，并要求隨機采樣。

1.4 采樣操作

現多采用塑料管引流采血，其優(yōu)點是簡便、快速，對雞只損傷小，封存后便于攜帶、存放和分離血清。采樣前，把塑料管剪成6～8 cm長各段，采樣時，要一雞一針一管，血量不得少于管長的三分之二，否則血量過少，分離到的血清不足，監(jiān)測的結果不準確。同時塑料管的一端一定要燒融封閉好，以免分離時漏掉血清。如果用注射器采血，可用干凈消過毒的小離心管盛血，血液要放成斜面，不能直立，否則不易分離出血清。還要防止振動過猛或變質造成溶血，如有血樣溶血不能用。另外，還應在塑料管或離心管上標明編號，以便區(qū)分。

2 采集血樣析出血清

除了離心分離血清外，如果想讓血清自然析出，不要急于將血樣放入冰箱內。一般說氣溫在23℃以上時，采集完的血樣放置2～3 h，就可以析出清亮的血清。但氣溫為10℃以下的時候，采集完的血樣血清很難自然析出，最好立即將血樣管放入37℃培養(yǎng)箱中孵育2～3 h，可見血清析出。待血清析出后再次放入4℃冰箱內，這樣不但有利于血清的析出，又可避免溶血現象的發(fā)生。被檢血清，應無溶血，無雜菌污染，保存于4℃15d內檢查。如果血清待檢超過15d，需低溫冰凍保存。

3 配成1%紅細胞懸液

標準采樣應將多只雞血混合，制成紅細胞液，減少有的雞紅細胞有自凝現象的干擾。采血時要采非免疫成年健康公雞的血。針管內加3.8 %的枸椽酸鈉抗凝，從翅靜脈（或心臟）采血。若采免疫雞的血，要充分洗去血清及其它物質，一般洗7～8次。配成1%紅細胞懸液，4℃冰箱中可保存3 d，時間再長會發(fā)生溶血，最好現配現用，得出的結果快且明顯。切記，在使用前必須把紅血球混勻，并不時地搖動。

4 濃度要準確的配制抗原

當抗原濃度高時，HI滴度就下降；當抗原濃度低時，HI滴度就會上升。用血凝試驗測出標準抗原的效價，倒退2孔，為此病毒的4個血凝單位抗原。為保證抗原的配制準確無誤，需作抗原回歸試驗。一般來說，抗原開啟后，放在4℃冷藏，在一個月內，抗原效價變化不大，每次檢測時根據樣品量多少來配制工作抗原，保證HI檢測結果的準確，不會因為工作抗原配制不準確而反復進行抗原回歸試驗造成浪費時間。4個血凝單位抗原需現配現用。

5 掌握稀釋液pH值

稀釋液pH值為5.8以下時，紅細胞會發(fā)生自凝現象，從而影響監(jiān)測結果。pH值為7.8以上時，吸附在紅細胞上的病毒易脫落，即凝聚圖形易消失，會造成觀察誤差。pH值為7.0時，紅細胞沉降最充分，圖形最清晰，HI滴度最大。試驗證明，使用pH值為7.0～7.2的磷酸緩沖（PBS）比使用pH值為7.0～7.2的生理鹽水作稀釋液的效果好。

6 小結

商品代肉雞、肉鴨，在免疫后 21d 進行 HI 抗體檢測，抗體滴度≥4log2 為免疫合格。其他家禽加強免疫后 1 個月進行 HI 抗體水平檢測，抗體滴度≥5log2 為免疫合格。存欄禽群免疫合格率必須≥70%。根據 HI 滴度判定禽群禽流感免疫狀況還應注意使用疫苗種類、免疫方法、免后時間等，若檢測后抗體滴度達不到上述指標，必須查明原因并立即重新進行免疫；若檢測的禽群沒有進行過禽流感免疫，而 HI 抗體滴度很高，應注意是否有野毒入侵。

禽流感已經給我國養(yǎng)禽業(yè)造成巨大損失，我國的各級政府、社會各界對禽流感的防制高度重視，目前我國的禽流感防制研究工作在全面有效開展，且接近國際先進水平。但AIV一直嚴重威脅著養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展及人類的健康，尤其是我國現有的養(yǎng)殖條件所限，更應加大對禽流感的防制力度。在研究敏感快速的檢測方法的同時，禽流感的血清學抗體檢測方法仍是目前條件下最重要的監(jiān)測方法，及早的發(fā)現禽流感、對實際生產的指導作用不容忽視。科學運用禽流感抗體檢測方法對禽流感防控體系的建立提供切實的技術保障。

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