張 璐,桂 萌,李平蘭
(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院,北京 100083)
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食品防腐中群體感應(yīng)及其抑制劑的研究進(jìn)展
張璐,桂萌,李平蘭*
(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院,北京 100083)
食品的腐敗變質(zhì)是食品工業(yè)長期以來一直面對的重大問題。近年來研究表明細(xì)菌群體感應(yīng)(quorum sensing,QS)現(xiàn)象與食品腐敗變質(zhì)密切相關(guān)。本文簡要介紹了群體感應(yīng)系統(tǒng)和信號分子的分類,重點(diǎn)闡述了群體感應(yīng)抑制劑(quorum sensing inhibitors,QSIs)的研究進(jìn)展,并討論了利用群體感應(yīng)抑制劑控制食品腐敗變質(zhì)的應(yīng)用前景。
群體感應(yīng),抑制劑,食品腐敗變質(zhì)
每年我國因食品腐敗造成的經(jīng)濟(jì)損失問題十分嚴(yán)重,其中生鮮食品的腐敗變質(zhì)大都是由微生物活動引起,開發(fā)新型防腐劑、開辟防腐新途徑成為關(guān)注的焦點(diǎn)。近年來國內(nèi)外研究表明:群體感應(yīng)(quorum sensing,QS)現(xiàn)象與食品腐敗變質(zhì)過程密切相關(guān),在食品腐敗變質(zhì)過程中發(fā)揮重要作用[1]。QS系統(tǒng)參與食品腐敗變質(zhì)的過程,與食品腐敗相關(guān)的酶系活性受QS系統(tǒng)的調(diào)控[2];此外,在變質(zhì)食品中也檢測到若干QS系統(tǒng)的信號分子。因此,阻斷腐敗微生物QS系統(tǒng)對于調(diào)控影響食品腐敗變質(zhì)相關(guān)的基因表達(dá)具有重要作用,加強(qiáng)對群體感應(yīng)抑制劑(quorum sensing inhibitors,QSIs)的研究有助于新型防腐劑的研制與開發(fā)。
1.1群體感應(yīng)
在特定環(huán)境中,細(xì)菌產(chǎn)生并向環(huán)境中釋放信號分子,隨著細(xì)菌密度的增加信號分子積累到臨界值時(shí),信號分子就可以調(diào)節(jié)菌體中相關(guān)基因的表達(dá),進(jìn)而調(diào)控細(xì)菌的行為以適應(yīng)環(huán)境變化。這種細(xì)菌之間的信息交流稱為群體感應(yīng)[3]。
1.2群體感應(yīng)系統(tǒng)的分類
革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌存在不同的群體感應(yīng)系統(tǒng),依據(jù)產(chǎn)生信號分子的不同,細(xì)菌的群體感應(yīng)系統(tǒng)主要分為以下三類,下面對其進(jìn)行具體闡述。
1.2.1革蘭氏陰性菌群體感應(yīng)系統(tǒng)革蘭氏陰性菌QS系統(tǒng)中的信號分子以N-?;呓z氨酸內(nèi)酯(N-acylhomoserine lactones,AHLs)及其衍生物為主。近年來研究表明,在導(dǎo)致食品腐敗變質(zhì)的過程中,革蘭氏陰性菌是起主要作用的微生物,因此對革蘭氏陰性菌群體感應(yīng)與食品腐敗變質(zhì)關(guān)系的探討更加吸引人們的注意[4]。LuxI/LuxR QS系統(tǒng)是革蘭陰性菌中群體感應(yīng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)的典型代表,研究表明,費(fèi)氏弧菌的發(fā)光現(xiàn)象是LuxI/LuxR QS系統(tǒng)控制的[5]?,F(xiàn)已證實(shí),大多數(shù)革蘭氏陰性菌的QS系統(tǒng)都與費(fèi)氏弧菌的LuxI/LuxR QS系統(tǒng)相似。LasI/LasR-RhlI/RhIR系統(tǒng)是存在于革蘭氏陰性菌中更復(fù)雜的調(diào)節(jié)機(jī)制,該系統(tǒng)在銅綠假單胞菌中有發(fā)現(xiàn)[6],此外,在銅綠假單胞菌中還發(fā)現(xiàn)喹喏酮信號系統(tǒng)以及群體感應(yīng)輔助系統(tǒng)——GacS/GacA系統(tǒng)[7]。
1.2.2革蘭氏陽性菌群體感應(yīng)系統(tǒng)革蘭氏陽性菌QS系統(tǒng)中的信號分子主要是氨基酸和短肽類,常見的是自誘導(dǎo)短肽AIP(autoinducing peptide)。在革蘭氏陽性菌QS系統(tǒng)中,調(diào)控的機(jī)制為依靠寡肽前體形成自誘導(dǎo)劑,在ABC轉(zhuǎn)移酶的協(xié)助下分泌到胞外起作用,以調(diào)控細(xì)菌基因的表達(dá)[8],代表菌株如金黃色葡萄球菌;在有些革蘭氏陽性菌中,AIP也可以被轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)中與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合來調(diào)控基因表達(dá),如蠟樣芽孢桿菌,成熟的AIP分子在細(xì)胞質(zhì)中與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合,其復(fù)合物可以調(diào)節(jié)蠟樣芽孢桿菌毒力因子的產(chǎn)生[9]。
1.2.3革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌共有的群體感應(yīng)系統(tǒng)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌共有的群體感應(yīng)系統(tǒng)以AI-2類分子為基礎(chǔ)。Mok和Bassler等研究發(fā)現(xiàn),哈維氏弧菌的QS系統(tǒng)既能識別AHL分子,也能識別AI-2類分子,其中AI-2類分子存在于革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌的QS系統(tǒng)中,參與革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌的群體感應(yīng),細(xì)菌通過識別AI-2類分子感知周圍環(huán)境的菌量變化,進(jìn)而調(diào)節(jié)自身行為[10]。
1.3群體感應(yīng)信號分子
細(xì)菌之間的信息交流依靠其合成釋放的信號分子,當(dāng)釋放的信號分子濃度達(dá)到臨界值時(shí),會啟動菌體內(nèi)相關(guān)基因的表達(dá),調(diào)控細(xì)菌的行為以適應(yīng)環(huán)境的變化,如形成生物膜、產(chǎn)生抗生素、產(chǎn)生毒素、產(chǎn)生色素、菌體發(fā)光等[11]。常見的信號分子有AHL分子、自誘導(dǎo)短肽AIP、AI-2類分子。
在導(dǎo)致食品腐敗變質(zhì)的諸多因素中,微生物污染是最活躍、最普遍的因素。在生鮮食品中,肉類、水產(chǎn)品等畜產(chǎn)食品,因其高營養(yǎng)價(jià)值更易受到微生物的污染而導(dǎo)致腐敗變質(zhì)。許多與食品腐敗變質(zhì)有關(guān)的革蘭氏陰性菌都會產(chǎn)生AHL,比如假單胞菌(Pseudomonasspp)、腸桿菌(Enterobacteriaceae)、嗜水氣單胞菌(A.hydrophila)。Gram等發(fā)現(xiàn),在由革蘭氏陰性菌腐敗作用導(dǎo)致的食品腐敗中檢測到AHL,當(dāng)腐敗細(xì)菌達(dá)到一定數(shù)量后AHL被檢測到,這說明AHL的水平與腐敗細(xì)菌的數(shù)量具有一定的相關(guān)性[12]。Lars Ravn分離出148株與食品腐敗有關(guān)的革蘭氏陰性菌,其中146株存在明顯的群體感應(yīng)效應(yīng)[13]。綦國紅等從市售魚中分離出的三株假單胞菌均能產(chǎn)生AHL,發(fā)現(xiàn)腐敗細(xì)菌通過QS系統(tǒng)調(diào)控腐敗特性的表達(dá)[14]。Jay等研究認(rèn)為假單胞菌生物膜的形成受到AHL介導(dǎo)的群體感應(yīng)的控制[15]。另外有研究稱,在食品儲藏過程中AHL是穩(wěn)定可積累的[16]。相比于革蘭氏陰性菌,對革蘭氏陽性菌QS系統(tǒng)與食品腐敗變質(zhì)過程的研究較少,多集中在食源性病原菌的致病性研究上,如抑制金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的外毒素表達(dá)[17]。
食源性細(xì)菌的特性表達(dá)與細(xì)菌的QS系統(tǒng)密切相關(guān),如致腐敗性。與食品腐敗有關(guān)的信號分子主要是革蘭氏陰性菌分泌產(chǎn)生的AHL,如胡蘿卜軟腐歐文氏菌(Erwiniacarotovora)、蜂房哈夫尼菌(Hafniaalvei)、變形斑沙雷氏菌(Serratiaproteamaculans)都可以產(chǎn)生AHL信號分子[18]。通過干擾食品中微生物的QS系統(tǒng),可以有效減緩腐敗變質(zhì)過程,延長食品的貨架期。研究發(fā)現(xiàn),存在對細(xì)菌群體感應(yīng)有抑制和干擾作用的物質(zhì),用以阻斷細(xì)菌種內(nèi)或種間的信息交流。對于細(xì)菌群體感應(yīng)的抑制和干擾主要有以下三種途徑:抑制信號分子的合成,促進(jìn)信號分子的降解,抑制信號分子與受體蛋白的結(jié)合。利用QSIs可以抑制和干擾信號分子,但QSIs存在的一個(gè)問題是它們大多具有一定毒性且不適于在人類生活生產(chǎn)中應(yīng)用,如鹵代呋喃酮及其衍生物雖有較強(qiáng)的干擾QS信號通路的活性,卻有一定誘變致癌作用[19]。因此,尋找安全無害的QSIs就顯得極為重要。作為用于食品的群體感應(yīng)抑制劑,考慮到食品安全性,從食源性植物提取物中篩選QSIs是一種有效方式,且食源性植物提取物來源豐富,但其同時(shí)也存在濃度低、有毒性等缺點(diǎn)。根據(jù)QSIs分子的來源,在食品防腐保鮮方面考慮,作如下歸類:基于原核生物的QSIs、基于動物的QSIs、基于植物的QSIs、合成的QSIs。
3.1基于原核生物的QSIs
原核生物產(chǎn)生的QSIs有AHL-內(nèi)酯酶、AHL-酰基轉(zhuǎn)移酶、脫氨酶、脫羧酶等。首次被報(bào)道的群體感應(yīng)淬滅酶是從芽孢桿菌Bacillus240b1中篩選得到的AiiA酶,它可以有效減弱胡蘿卜軟腐歐文氏菌的致病性。研究表明若將AHL內(nèi)酯水解酶的基因轉(zhuǎn)入煙草、馬鈴薯中,就可以獲得抗軟腐病能力較強(qiáng)的菌株[20]。希瓦氏菌屬屬于革蘭氏陰性菌,主要腐敗魚、蝦等海產(chǎn)品,它是少數(shù)已知的同時(shí)具有AHL產(chǎn)生及降解能力的菌種,QS系統(tǒng)所調(diào)控的基因表達(dá)會在AHL降解過程中自行關(guān)閉,推測其依靠產(chǎn)生的AHL-?;D(zhuǎn)移酶降解信號分子[21]。
3.2基于動物的QSIs
在發(fā)酵牛奶中發(fā)現(xiàn)了部分銅綠假單胞菌產(chǎn)生的群體感應(yīng)信號分子能夠被2(H)-呋喃酮阻斷,從而延長發(fā)酵牛奶的貯藏期[22]。豬的腎酰轉(zhuǎn)移酶被發(fā)現(xiàn)能使兩種QS信號分子失活,這對減少嗜水氣單胞菌的生物膜形成在一定程度上有減緩效果[23]。研究表明,在牛肉中含有可以抑制哈維氏弧菌中AI-2介導(dǎo)的生物發(fā)光的化合物,同時(shí)家禽肉中的長鏈脂肪酸對V.harveyiBB170的AI-2具有很強(qiáng)的抑制能力[24]。也有學(xué)者初步研究發(fā)現(xiàn),蜂蜜中的提取物對AHL介導(dǎo)的群體感應(yīng)有顯著的抑制作用,并提出蜂蜜的防腐作用可能和這種化合物的性質(zhì)有密切關(guān)系[25]。
3.3基于植物的QSIs
海洋紅藻產(chǎn)生的溴化呋喃酮是具有群體感應(yīng)抑制活性的天然產(chǎn)物,它能夠抑制細(xì)菌的群體感應(yīng),溴化呋喃酮也可以抑制AI-2介導(dǎo)的群體感應(yīng)[26]。在對鼠傷寒沙門氏桿菌(Salmonellatyphimurium)、大腸桿菌(E.coli)和銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)的研究中發(fā)現(xiàn),葡萄柚汁中所含的呋喃香豆素可有效抑制AI-1、AI-2活性和被膜的形成。漿果中的香豆素可以抑制V.harveyiBB886和BB170的AI-1和AI-2活性并且可以抑制致病菌如大腸桿菌O157∶H7,對鼠傷寒沙門氏桿菌和銅綠假單胞菌的生物膜形成也有抑制作用[27]。檸檬苦素類似物對于AI-2介導(dǎo)的生物發(fā)光具有非常有效的抑制作用[28]。這些香豆素和檸檬苦素類似物共同具有呋喃結(jié)構(gòu),這部分結(jié)構(gòu)具有QSIs的能力[29]。研究發(fā)現(xiàn),食用植物素對人體有益并具有抗菌活性,在非致死量濃度下呈現(xiàn)對群體感應(yīng)的抑制作用[30]。又有研究表明黃酮類化合物能夠抑制群體感應(yīng)信號受體并在體外抑制被膜形成[31]。Juanmei Zhang等研究發(fā)現(xiàn),茶多酚(RTP)提取物,含有豐富的多酚類和類黃酮,能夠特異性抑制QS系統(tǒng)控制的紫色桿菌的生長繁殖,對生物膜的形成有抑制作用,可作為QSIs用于延長貨架期[32]。研究者們在豌豆、水稻、番茄和大豆等高等植物中發(fā)現(xiàn)了細(xì)菌QS系統(tǒng)信號分子的類似物,而且已經(jīng)證實(shí)這些植物提取物可以影響由 AHL介導(dǎo)的某些基因的表達(dá),其他的高等植物例如番茄、野豌豆、水稻等也可分泌QSIs,影響細(xì)菌AHL介導(dǎo)的QS系統(tǒng)[33]。
3.4合成的QSIs
天然QSIs已經(jīng)被大量發(fā)現(xiàn),然而天然QSIs的應(yīng)用限制在于它們濃度太低并且往往伴有毒性。在特定情況下,可以通過化學(xué)合成繞開這些限制,但目前QSIs的合成十分匱乏?,F(xiàn)有的許多合成QSIs的嘗試,主要包括信號分子合成、AHL側(cè)鏈修飾、AHL環(huán)部分修飾、受體配體相互作用的拮抗、AIP-2信號修飾等。Morohoshi 等合成了一系列具有不同?;滈L的N-酰基環(huán)戊胺,發(fā)現(xiàn)N-九酰-環(huán)戊胺(C9-CPA)對粘質(zhì)沙雷菌(Serratia marcescens)的QS介調(diào)的致病基因表達(dá)具有抑制活性[34]。此外,合成的C-30化合物是也一種有效的QS抑制劑,能特異性抑制QS控制基因的表達(dá)[35]。
食品的腐敗變質(zhì)與微生物的QS系統(tǒng)密切相關(guān),在很多腐敗變質(zhì)食品中都有檢測到群體感應(yīng)信號分子。群體感應(yīng)的研究在生物、制藥、醫(yī)療等領(lǐng)域已經(jīng)取得一定的進(jìn)展,但是在防止食品腐敗變質(zhì)的方面還處在起步階段。隨著細(xì)菌群體感應(yīng)信號分子機(jī)制研究的不斷深入和完善,越來越多安全有效的新型QSIs將被研制與開發(fā)出來,對于天然QSIs的提純降毒以及合成QSIs的設(shè)計(jì)將成為未來研究的熱點(diǎn)。安全穩(wěn)定的QSIs將為解決食品腐敗變質(zhì)問題,延長食品貨架期,保障食品安全提供一種新的途徑。
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Application of quorum sensing inhibitors in food preservation
ZHANG Lu,GUI Meng,LI Ping-lan*
(College of Food Science and Nutritional Engineering,China Agricultural University,Beijing 100083,China)
In food industry,food spoilage is a major problem that people have faced for a long time. Recent studies have shown that bacterial quorum sensing was closely related to food spoilage. Based on the brief introduction of the quorum sensing system and signal molecules,the research progress and application prospect of quorum sensing inhibitors in preventing food were illustrated and discussed in this paper.
quorum sensing;inhibitors;food spoilage
2015-03-27
張璐(1989-),男,碩士,研究方向:食品微生物,E-mail:luzhangcau@163.com。
李平蘭(1964-),女,博士,教授,研究方向:食品微生物,E-mail:lipinglan@cau.edu.cn。
北京市鱘魚、鮭鱒魚創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)專項(xiàng)(SCGWZJ20151105-2);國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31471707,31071591)。
TS201.1
A
1002-0306(2016)03-0364-04
10.13386/j.issn1002-0306.2016.03.068