蛋雞禽流感免疫程序的制定及推廣應(yīng)用

楊　峰，方　英，徐春志，陳　紅，袁翠霞，彭　屹，白　璧（貴州省貴陽市動物疫病預(yù)防控制中心，貴州貴陽550081）

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蛋雞禽流感免疫程序的制定及推廣應(yīng)用

楊峰，方英，徐春志，陳紅，袁翠霞，彭屹，白璧
（貴州省貴陽市動物疫病預(yù)防控制中心，貴州貴陽550081）

禽流感（Avian influenza，AI）是由正黏病毒科流感病毒屬A型流感病毒的禽流感病毒（AIV）所引起禽類烈性、傳染性疫病，雞感染AIV后機(jī)體高熱，采食和產(chǎn)蛋下降等，1878年意大利首次報道暴發(fā)禽流感至今已有120多年的歷史。該病的流行給世界養(yǎng)禽業(yè)造成極大危害和經(jīng)濟(jì)損失，高致病性毒株感染時，易感禽發(fā)病率、死亡率均可達(dá)100%，并能直接感染人類，因此，本病目前已成為危害嚴(yán)重的人畜共患病。

為科學(xué)有效防控蛋雞群禽流感的發(fā)生，提高蛋雞生產(chǎn)性能，本試驗通過采用血清學(xué)方法對規(guī)模蛋雞養(yǎng)殖場進(jìn)行了雞群母源抗體與免疫抗體消長規(guī)律的測定，從而制定了科學(xué)合理的免疫程序，并在蛋雞群中進(jìn)行了推廣應(yīng)用比較。

1　材料與方法

1.1樣本選擇貴州省4個規(guī)模蛋雞養(yǎng)殖場，按研究需要分別采集不同日齡蛋雞血清樣本共計555份（用于母源抗體消長動態(tài)測定140份、免疫抗體消長動態(tài)測定175份和免疫程序推廣應(yīng)用前后比較240份），并隨機(jī)采集臨床健康蛋雞泄殖腔棉拭子120份。

1.2試劑禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗抗原、陽性血清、陰性血清，購自青島易邦生物工程有限公司；1%紅細(xì)胞懸液，本試驗自行制備；禽流感病毒H5亞型RT-PCR檢測試劑盒，購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3母源抗體消長動態(tài)測定采用正向間接血凝抑制試驗（HI）對不同日齡（1、6、11、16、21、26、31日齡）雛雞血清樣本140份進(jìn)行抗體檢測，從而測定蛋雞母源抗體消長動態(tài)?？贵w效價≥5 log2判為陽性。

1.4免疫抗體消長動態(tài)測定采用HI對二次免疫后不同飼養(yǎng)階段（二次免疫后第27、58、86、123、141、170天）的175份蛋雞群血清樣本進(jìn)行抗體檢測，從而測定免疫抗體消長動態(tài)?？贵w效價≥5 log2判為陽性，根據(jù)農(nóng)業(yè)部規(guī)定，群體免疫抗體陽性率達(dá)70%判為免疫合格。

1.5免疫程序制定根據(jù)母源抗體及免疫抗體消長動態(tài)測定結(jié)果，制定蛋雞禽流感科學(xué)免疫程序。

1.6免疫程序推廣應(yīng)用效果比較將制定出的禽流感免疫程序于A、B、C、D 4個規(guī)模蛋雞養(yǎng)殖場推廣應(yīng)用，采集推廣前后雞群血清樣本每場各30份，計240份，進(jìn)行免疫抗體水平監(jiān)測，從而比較免疫程序推廣前后疫苗免疫保護(hù)效果。并以RT-PCR方法對推廣前后雞群中病原核酸進(jìn)行檢測，比較推廣前后雞群隱性感染狀況。

2　結(jié)果

2.1母源抗體消長動態(tài)測定結(jié)果以HI測定不同日齡雛雞血清樣本140份母源抗體效價，結(jié)果見表1。

表1　禽流感母源抗體消長動態(tài)測定

由表1可知，雛雞群禽流感母源抗體水平在1日齡至6日齡呈現(xiàn)輕微上揚(yáng)趨勢；從6日齡以后，抗體水平隨著雛雞日齡增加而呈現(xiàn)下降趨勢；至16日齡時禽流感母源抗體幾何平均效價僅為3.4 log2，抗體陽性率降至20%，低于農(nóng)業(yè)部抗體保護(hù)水平≥70%要求，至21日齡時相應(yīng)降為2.1 log2和0 log2。因此，應(yīng)于雛雞16～20日齡時進(jìn)行禽流感疫苗首免。

2.2免疫抗體消長動態(tài)測定結(jié)果以HI測定蛋雞群多次免疫后不同日齡雞175份血清樣本抗體效價，結(jié)果見表2。

表2　蛋雞群多次免疫后抗體消長動態(tài)

由表2可知，二次免疫后，蛋雞群禽流感免疫抗體呈現(xiàn)逐步下降趨勢。從免疫后第27天至123天，群體免疫合格率達(dá)農(nóng)業(yè)部要求；至第141天，免疫抗體逐步失去保護(hù)力，降至66.9%。因此，應(yīng)于二次免疫后第123～141天加強(qiáng)免疫1次。

2.3免疫程序制定根據(jù)蛋雞母源抗體與免疫抗體消長動態(tài)測定結(jié)果，確定出蛋雞禽流感疫苗首免及多次免疫時間，從而制定出較為科學(xué)合理的蛋雞禽流感免疫程序，見表3。

表3　蛋雞禽流感免疫程序

2.4免疫程序推廣應(yīng)用效果比較

2.4.1免疫保護(hù)率比較選取貴州省4個規(guī)模蛋雞養(yǎng)殖場（A、B、C、D場），將所制定蛋雞禽流感免疫程序于上述場中推廣應(yīng)用，采集推廣前后雞群血清樣本每場各30份進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測，從而比較免疫程序推廣前后疫苗免疫保護(hù)效果，結(jié)果見表4。

表4　推廣前后雞群禽流感免疫保護(hù)率監(jiān)測

由表4可知，將所制定免疫程序推廣應(yīng)用后，4個場中蛋雞群禽流感免疫保護(hù)率均有不同程度提高，總體免疫保護(hù)率提高了11個百分點(diǎn)，表明所制定蛋雞禽流感免疫程序可行，且效果較好。2.4.2隱性感染帶毒檢測隨機(jī)采集推廣前后4個規(guī)模蛋雞養(yǎng)殖場臨床健康雞群泄殖腔棉拭子120份，以H5亞型禽流感病毒RT-PCR檢測試劑盒進(jìn)行禽流感病毒核酸檢測。結(jié)果見表5。

表5　推廣前后雞群禽流感病毒隱性感染檢測

由表5可知，將所制定免疫程序推廣應(yīng)用后，4個場中蛋雞群禽流感病毒隱性感染情況均有不同程度下降，總體病毒感染率下降了8個百分點(diǎn)，表明所制定蛋雞禽流感免疫程序可有效保護(hù)雞群感染禽流感病毒。

3　討論

免疫預(yù)防是控制禽流感發(fā)生的有效手段，首次免疫最佳時間的確定則是做好免疫工作的一個關(guān)鍵。雖然母源抗體能在短時間內(nèi)對雛禽抵御病毒感染產(chǎn)生一定的保護(hù)力，但同時又會對疫苗接種的免疫應(yīng)答進(jìn)行干擾而降低免疫效果[1]。本試驗通過采用血清學(xué)方法對140份不同日齡雛雞血清樣本進(jìn)行抗體檢測，探尋禽流感母源抗體在蛋雞群中消長動態(tài)，發(fā)現(xiàn)雛雞母源抗體至21日齡時降為最低保護(hù)值，確定了蛋雞禽流感疫苗最佳首免日齡為16～20日齡，這與其他研究報道一致[2]。同時，通過對175份二免后不同生長階段的蛋雞血清樣本進(jìn)行抗體檢測，發(fā)現(xiàn)在二免后第123天群體免疫保護(hù)率開始下降，至第141天失去保護(hù)力，確定了補(bǔ)免日期，也為制定科學(xué)的蛋雞禽流感免疫程序提供了依據(jù)[3]。

本試驗制定了蛋雞禽流感免疫程序，并在4個規(guī)模蛋雞養(yǎng)殖場推廣應(yīng)用。發(fā)現(xiàn)在推廣前后，4個場的蛋雞群禽流感免疫合格率均有不同程度提升，總體免疫合格率提高了11個百分點(diǎn)，表明所制定的免疫程序較符合蛋雞生產(chǎn)，且效果較好。另外，為檢驗免疫程序推廣對雞群帶毒影響情況，本研究隨機(jī)采集了推廣前后雞群泄殖腔棉拭子，以H5亞型禽流感病毒RT-PCR檢測試劑盒對禽流感病毒核酸進(jìn)行了檢測。結(jié)果雞群總體禽流感隱性感染率降低了8個百分點(diǎn)，表明所制定的免疫程序能夠有效防控禽流感病毒隱性感染雞群。

盡管本研究所制定蛋雞禽流感免疫程序推廣應(yīng)用效果較好，但僅針對于高致病性禽流感疫苗免疫進(jìn)行了相關(guān)試驗。研究表明[4-5]，免疫方式、免疫時間、疫苗干擾等因素通常會影響雞群抗體水平。因此，更為高效、科學(xué)地防控蛋雞禽流感感染，在后續(xù)試驗中應(yīng)從不同疫病接種時間、方式對禽流感疫苗的影響著手，逐步建立廣譜性強(qiáng)的蛋雞群疫病免疫程序。

參考文獻(xiàn)：

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[5]池建峰.影響禽流感免疫效果的因素分析[J].湖北畜牧獸醫(yī)，2012（5）：35-36.

通訊作者：方英，E-mail：fy6565@126.com

作者簡介：楊峰（1980-），男，獸醫(yī)師，碩士，從事動物防疫工作，E-mail：506031129@qq.com

收稿日期：2014-05-23

中圖分類號：S831

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號：0529- 6005（2016）01- 0064- 02