稀釋回歸法在脂血標本凝血檢測中的應用探討

彭傳梅，高　輝，王　楊，劉云芳，徐　敏，程　云，吳彥峰

(昆明市延安醫(yī)院醫(yī)學檢驗科，云南昆明 650051)

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·論著·

稀釋回歸法在脂血標本凝血檢測中的應用探討

彭傳梅，高輝△，王楊，劉云芳，徐敏，程云，吳彥峰

(昆明市延安醫(yī)院醫(yī)學檢驗科，云南昆明 650051)

摘要:目的探討稀釋回歸法在脂血標本凝血凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)檢測中應用的可行性。方法隨機收集昆明市延安醫(yī)院40例門診及住院外觀正常(無脂血、無黃疸、無溶血)凝血標本，分別檢測原血漿和3倍、5倍稀釋后血漿的PT、APTT兩項指標，將稀釋前與稀釋后兩組數(shù)據(jù)進行線性回歸分析，得到各指標的回歸方程。另外收集昆明市延安醫(yī)院門診及住院外觀脂血標本33例，根據(jù)三酰甘油(TG)的不同濃度分成3組，輕度脂血組(1.7 mmol/L≤TG<11.0 mmol/L)12例，中度脂血組(11.0 mmol/L≤TG<20.0 mmol/L)13例，重度脂血組(TG≥20.0 mmol/L)8例，檢測3倍稀釋血漿和高速離心后血漿的PT、APTT兩項指標，并將稀釋后結果帶入正常凝血標本的回歸方程所得結果與高速離心法結果進行比較。結果正常凝血標本5倍稀釋血漿絕大部分標本無法檢測出結果，所以取3倍稀釋血漿稀釋前后結果進行線性回歸分析得到PT、APTT的回歸方程。3組脂血標本3倍稀釋后的PT、APTT兩項指標經(jīng)過相應回歸方程計算，所得結果與原血漿高速離心后檢測結果的差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論稀釋回歸法可以用于臨床脂血標本的凝血PT和APTT檢測。

關鍵詞:凝血檢測；脂血標本；稀釋回歸法

凝血功能檢測是臨床最常用的止血與血栓篩查試驗，主要項目包括凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)、纖維蛋白原等，在臨床應用已日益廣泛，特別是在止血與血栓性疾病的診斷、溶栓與抗凝治療的監(jiān)測、術前檢查及術后監(jiān)測中都有重要的臨床意義[1]。光學法全自動凝血分析儀是目前血栓與止血實驗室中最常用的設備，其具有結構簡單、靈敏度高的優(yōu)點，為臨床各種疾病的診斷、治療及監(jiān)測提供了簡便、迅速、準確、可靠的監(jiān)測平臺，但是其最大缺點是易受特異血漿的干擾，尤其是易受血漿濁度的干擾[2]。在實驗室工作中經(jīng)常遇到標本脂血的情況，常規(guī)離心無法消除其血漿混濁程度，導致凝血儀檢測結果不準確或部分項目根本無法檢測出結果[3]，解決此問題最為可靠的方法是高速離心法[4]，但一般血栓與止血實驗室沒有條件配備高速離心機，導致實驗室工作人員無法在短時間內將準確有效的檢測結果報告給臨床，不利于臨床快速診療疾病的需要?；鶎訉嶒炇壹毙枵页龇奖?、快捷、準確的方法解決這一問題，因此本文擬探討稀釋回歸法是否可以代替高速離心法在脂血標本凝血PT和APTT檢測中得到普遍應用。

1資料與方法

1.1一般資料收集昆明市延安醫(yī)院2014年10月至2015年3月門診及住院外觀正常(無脂血、無黃疸、無溶血) 凝血標本40例，其中男21例，女19例，平均45歲。外觀脂血標本33例，男18例，女15例，平均37歲。脂血標本另采取3 mL靜脈血用于檢測血清三酰甘油(TG)，根據(jù)TG的濃度不同將脂血標本分為3組，輕度脂血組(1.7 mmol/L≤TG<11.0 mmol/L)12例，中度脂血組(11.0 mmol/L≤TG<20.0 mmol/L)13例，重度脂血組(TG≥20.0 mmol/L)8例。

1.2儀器與試劑日本Sysmex公司CS5100全自動血凝分析儀，美國Beckman-coulter公司AU5421全自動生化分析儀，湖南湘儀TG16-WS臺式高速離心機，湖南湘儀TDZ5-WS多管架自動平衡離心機。德國Siemens公司PT、APTT和OVB稀釋液及儀器配套質控品。日本積水醫(yī)療株式會社TG試劑及儀器配套質控品。

1.3方法試驗前均進行室內質量控制，質控在控后開始試驗。40例正常凝血標本以3 500 r/min離心5 min，先各取100 μL血漿，分別加入200 μL和400 μL OVB稀釋液制成3倍和5倍稀釋血漿，與剩余血漿同時用CS5100檢測PT和APTT。因5倍稀釋后血漿絕大部分標本無法檢測出結果，所以采用稀釋前及3倍稀釋后血漿檢測結果進行線性回歸分析，求出各指標相應的回歸方程。33例脂血標本以3 500 r/min離心5 min，吸取100 μL血漿，加入200 μL OVB緩沖液3倍稀釋。剩余血漿以10 000 r/min離心10 min，棄去上層乳糜層，取下層清亮血漿與3倍稀釋血漿同時用CS5100檢測PT和APTT。將3倍稀釋后檢測結果帶入正常凝血標本的回歸方程換算成稀釋前原血漿結果，與高速離心后檢測結果進行比較。

2結果

2.1正常凝血標本稀釋前后結果線性相關40例正常凝血標本稀釋前和3倍稀釋后PT和APTT檢測結果散點圖以PT和APTT稀釋后結果為橫坐標，稀釋前結果為縱坐標，繪制散點圖，結果顯示PT和APTT稀釋前后檢測結果成線性相關，見圖1、2(見《國際檢驗醫(yī)學雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。

2.2正常凝血標本稀釋法回歸方程應用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件對正常凝血標本PT和APTT稀釋前后的檢測結果進行線性回歸分析，分別得到如下回歸方程(Y表示稀釋前結果，X表示稀釋后結果),PT：Y=0.426X+3.049 (r=0.978,P=0.000)；APTT：Y=0.285X+4.398(r=0.897,P=0.000)。

表1　　輕度脂血組高速離心法和稀釋回歸法PT和

表2　　中度脂血組高速離心法和稀釋回歸法PT和

表3　　重度脂血組高速離心法和稀釋回歸法PT和

2.3脂血標本檢測結果33例脂血標本3倍稀釋后的PT和APTT結果分別按照上述回歸方程換算成稀釋前原血漿結果，并與原血漿高速離心后的檢測結果進行獨立樣本t檢驗。結果顯示輕度脂血組、中度脂血組、重度脂血組高速離心法和稀釋回歸法PT和APTT檢測結果均無明顯變化，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結果見表1～3。

3討論

臨床工作中，脂血標本典型表現(xiàn)是外觀血漿為白色或乳白色，檢測血脂濃度會異常增高，其主要成分是乳糜微粒和極低密度脂蛋白，常規(guī)離心后其乳糜成分仍然懸浮于血漿中[5]。散射比濁法是目前光學法全自動血凝分析儀所采用的主要方法之一，因其原理的特殊性導致血漿中的乳糜成分會干擾檢測，造成檢測結果的偏差[6]。由于脂血嚴重程度的不同，導致結果偏差的程度未知，嚴重脂血標本甚至檢測不出結果導致實驗室人員誤報大于檢測上限，從而嚴重影響臨床醫(yī)生對疾病的判斷[7]。

脂血標本多由于患者飯后尤其是攝入過多油脂性食物后抽血所致，短時間內無法消除，對于急診或術前患者必須由實驗室工作人員迅速將標本進行去脂處理后將檢測結果報告給臨床。在日常工作中，遇到脂血標本時，常用以下幾種方法來處理：一種是標本高速離心[3]后再檢測，結果準確，可信度高，是最好的解決辦法。但一般的中小型醫(yī)院止血與血栓實驗室沒有條件配備高速離心機，限制了高速離心法的廣泛應用[4]。另一種處理方法是利用濾器過濾血漿后再進行檢測，但濾器價格較貴，且操作繁瑣，也不利于基層醫(yī)院廣泛應用[8]。還有一種處理方法是傳統(tǒng)手工法，但操作過程繁瑣，結果也因人為因素的差異導致可信度不高[9]。為了盡可能簡便地消除脂血干擾，短時間內為臨床提供準確的檢測報告，結合本實驗室實際情況，研究者擬建立稀釋回歸法來解決這一問題，并與高速離心法進行比較，從而明確稀釋回歸法臨床應用的可行性及應用范圍。

本研究結果顯示，正常凝血標本PT和APTT稀釋前后的檢測結果均具有較高程度的線性相關性，其相關系數(shù)分別為0.978和0.897。由此建立了標準的正常標本稀釋前后的回歸方程。脂血標本試驗驗證表明，輕度、中度、重度脂血組高速離心法和3倍稀釋后結果經(jīng)回歸方程再換算成原血漿的PT和APTT檢測結果經(jīng)統(tǒng)計學分析差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，證明稀釋回歸法可以替代高速離心法，在輕度、中度、重度脂血標本凝血PT和APTT檢測中得到普遍應用，能滿足目前臨床絕大部分術前檢查、止血與血栓疾病診斷、溶栓與抗凝治療監(jiān)測的需求。但是，需注意的是日常工作中更換不同批號的試劑儀器重新定標后，回歸方程也需要重新制定才能運用[10]。

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Application of dilution regression method in the coagulation detection of fat blood samples

PengChuanmei，GaoHui△，WangYang,LiuYunfang，XuMin，ChengYun，WuYanfeng

(DepartmentofMedicalLaboratory，Yan′anHospitalofKunming，Kunming，Yunnan650051，China)

Abstract:ObjectiveTo explore the dilution regression method of coagulation detection(PT,APTT) in fat blood samples.MethodsWe collected 40 normal blood coagulation specimens (no fat blood，no jaundice，no hemolysis) in Yan′an hospital of Kunming，then we detected the PT and APTT of the original plasma and 3-fold diluted plasma and 5-fold diluted plasma，the we used the data both of before dilution and diluted to do the linear regression analysis，and finally we got the regression equations of each index.we also collected 33 fat blood samples in Yanan hospital of Kunming，which be divide into three groups through the severity of triglycerides:mild fat blood group(1.7 mmol/L≤TG<11.0 mmol/L) and moderate fat blood group(11.0 mmol/L≤TG<20.0 mmol/L)and severe fat blood group(TG≥20.0 mmol/L)，then we detected the PT and APTT after 3-fold diluted plasma and high-speed centrifugation plasma，and then we brought diluted results into the normal regression equations and the results were compared with the high-speed centrifugation results.ResultsBecause most of the 5-fold diluted plasma can not get the effective results，so we use 3-fold diluted plasma to get the regression equations.The results of 3-fold diluted plasma was calculated by the regression equations，which then compared with high-speed centrifugation results，after the analysis of statistical software，two results had not statistically significant (P>0.05).ConclusionDilution regression method can be used to detect the fat blood samples in the clinical coagulation detection.

Key words:blood coagulation detection；fat blood samples；dilution regression method

(收稿日期：2015-10-22)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.026

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0494-03

作者簡介：彭傳梅，女，主治醫(yī)師，主要從事臨床血液細胞檢驗研究?！魍ㄓ嵶髡?，E-mail：meizimh@sina.com。