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    MRI聯(lián)合熒光原位雜交技術在尿路上皮癌術后復發(fā)監(jiān)測中的應用分析

    2016-03-30 00:58:03吳釘郭永連李國灝
    現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志 2016年6期
    關鍵詞:鏡檢查尿路膀胱癌

    吳釘 郭永連 李國灝

    ·臨床研究·

    MRI聯(lián)合熒光原位雜交技術在尿路上皮癌術后復發(fā)監(jiān)測中的應用分析

    吳釘 郭永連 李國灝

    目的 評價MRI聯(lián)合熒光原位雜交技術(fluorescence in situ hybridzation, FISH)和FISH、膀胱鏡檢查在尿路上皮癌術后復發(fā)監(jiān)測中的應用,為完善尿路上皮癌術后復發(fā)監(jiān)測提供理論依據(jù)。 方法 選取2013年1月至2015年1月60例臨床診斷的高危膀胱尿路上皮癌患者,術后第3、6、9、12和18個月隨訪均行FISH、FISH聯(lián)合MRI檢查及膀胱鏡加活組織檢查。 結果 60例入圍患者的監(jiān)測,單純采用FISH檢查,陽性33例,疑似腫瘤復發(fā)占55.0%;MRI加FISH檢查,陽性累計36例,疑似腫瘤復發(fā)占60.0%。所有疑似病例均采用膀胱鏡加活組織檢查,最終確認腫瘤復發(fā)患者35例,占全部患者的58.3%,其中單純采用FISH檢查發(fā)現(xiàn)腫瘤復發(fā)27例,占腫瘤復發(fā)患者的77.1%;而采用MRI聯(lián)合FISH檢查發(fā)現(xiàn)腫瘤復發(fā)累計達32例,占腫瘤復發(fā)患者的91.4%。 結論 MRI聯(lián)合FISH對膀胱腫瘤檢測的陽性率高于單用FISH檢測,MRI聯(lián)合FISH可能成為一種新的早期診斷和監(jiān)測膀胱癌術后復發(fā)的有效方法。

    尿路上皮癌; 熒光原位雜交技術; 復發(fā); 磁共振成像

    膀胱腫瘤是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤。初發(fā)膀胱癌中75%以上為非肌層浸潤性膀胱尿路上皮癌,可行經尿道膀胱腫瘤切除術,術后輔以膀胱灌注治療,但其術后復發(fā)率較高,需長期隨訪監(jiān)測[1]。傳統(tǒng)的尿脫落細胞學檢查的敏感性較低,而膀胱鏡檢為有創(chuàng)檢查,患者大多難以接受[2]。熒光原位雜交技術(fluorescence in situ hybridzation, FISH)作為快速、敏感的一種檢測方法,它主要利用標記熒光的探針與目標染色體或基因片段結合,再通過熒光顯微鏡觀察來確定細胞內染色體結構和數(shù)目的異常。MRI檢查是無創(chuàng)的過程,目前被普遍用于膀胱腫瘤分期的診斷。本研究采用MRI聯(lián)合FISH檢測診斷尿路上皮癌,并與單純采用FISH檢測作對比,以膀胱鏡加活組織檢查最終確診,探討MRI聯(lián)合FISH在預測膀胱癌術后復發(fā)監(jiān)測中的作用。

    對象與方法

    一、臨床資料

    入圍標準:術前相關檢查初步診斷為膀胱占位,并在我科行經尿道膀胱腫瘤電切術,術后病理證實為膀胱尿路上皮癌者(腫瘤臨床分期[3]≤T1期,即淺表性膀胱癌,膀胱鱗癌、腺癌等非尿路上皮癌需除外);高危非肌層浸潤膀胱癌符合以下任何一項條件:T1期腫瘤,G3(高級別)腫瘤,原位癌,同時符合多發(fā)、復發(fā)和直徑>3 cm的Ta低級別(G1~2)腫瘤;術后第3個月行膀胱鏡檢查未見明確腫瘤復發(fā)者。2013年1月至2015年1月,符合入圍標準的患者共60例,其中男43例,女17例;年齡36~75歲,平均54歲。60例患者膀胱腫瘤電切標本分層送病檢,病理分期[3]為原位癌期9例(僅侵犯黏膜層,未侵犯黏膜下層)、Ta期22例、T1期29例;高級別尿路上皮癌24例、低級別尿路上皮癌36例。本研究項目通過我院倫理委員會審核批準,參與研究的患者均簽署相關知情同意書。

    二、檢測方法

    1.MRI灌注成像:掃描前0.5 h囑咐患者飲水至膀胱充滿尿液。使用Philips公司Achieva 3.0 T超導型磁共振掃描儀,采用6通道體相控陣線圈和敏感度編碼掃描技術,取仰臥位,掃描范圍從膀胱頂至膀胱底。

    2.FISH檢測:收集60例患者的新鮮晨尿200~400 ml,按以下步驟檢測。取晨尿200~400 ml,分裝入50 ml離心管后,2 000 r/min離心10 min,去上清后收集細胞,然后加5 ml膠原酶B,用力吹打懸浮細胞后37 ℃水浴20 min,期間吹打2~3次。1 200 r/min離心10 min去上清后,加入37 ℃預熱的0.075 mmol/L的氯化鉀低滲液5 ml,重新輕輕吹打懸浮細胞后,37 ℃水浴30 min,期間吹打一次。低滲后加入2 ml固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1),吹打均勻,預固定10 min,1 000 r/min離心10 min后棄上清。加固定液5 ml于試管中,吹打均勻后,1 000 r/min離心10 min,棄上清,此固定過程再重復2次。探針雜交:取適量懸濁液滴于干燥玻片上,自然晾干后,觀察細胞密度,以10倍鏡下每視野30~50個為宜。將玻片放入37 ℃ 20 g/L胃蛋白酶工作液40 μl消化10 min。室溫下將玻片依次放入70%乙醇、85%乙醇、100%乙醇中脫水各2 min,取出玻片,自然晾干。將探針混合物10 μl加入玻片雜交區(qū)域,加蓋玻片,用封片膠封閉邊緣,80 ℃ 6 min共變性,42 ℃過夜雜交。

    FISH陽性判斷:正常細胞的CSP3、CSP7、CSP17號探針及GLPp16位點為二倍體,細胞核中分別可以見到2個綠色以及2個紅色信號。如果細胞中出現(xiàn)不同于上述二倍體的非二倍體改變,即為異常表現(xiàn)。兩組或兩組以上探針陽性[指標陽性:檢測指標值p16(1)≥15%;p16(2)≥15%,3、7、17號染色體非整倍體異常率≥10%]即判讀為FISH陽性;9p16基因缺失陽性,也判讀為FISH陽性。

    3.膀胱鏡檢查:術后每3個月復查,采用Olympus軟膀胱鏡進行膀胱鏡檢查,疑似腫瘤復發(fā)者取活組織病檢。

    三、統(tǒng)計學方法

    采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行分析,計數(shù)資料用例數(shù)和百分數(shù)表示,配對數(shù)據(jù)組間比較采用McNemar’s檢驗。以膀胱鏡檢查為金標準,計算MRI聯(lián)合FISH和FISH的診斷敏感度、特異性,并進行比較。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    結 果

    60例高危膀胱尿路上皮癌患者在行經尿道膀胱腫瘤電切術后隨訪3~18個月,均以膀胱鏡檢查確診有無復發(fā)。60例患者的監(jiān)測,單純采用FISH檢查,陽性33例,疑似腫瘤復發(fā)占55.0%;MRI加FISH檢查,陽性累計36例,疑似腫瘤復發(fā)占60.0%。所有疑似病例均采用膀胱鏡加活組織檢查,最終確認腫瘤復發(fā)患者35例,占全部患者的58.3%,其中單純采用FISH檢查發(fā)現(xiàn)腫瘤復發(fā)27例,占腫瘤復發(fā)患者的77.1%;而采用MRI聯(lián)合FISH檢查發(fā)現(xiàn)腫瘤復發(fā)患者累計達32例,占腫瘤復發(fā)患者的91.4%。35例膀胱腫瘤復發(fā)患者中,有7例患者最初尿FISH檢測陽性而膀胱鏡檢查陰性。60例高危膀胱尿路上皮癌患者中無腫瘤復發(fā)者25例(41.6%),其中FISH陽性6例(24.0%),F(xiàn)ISH陰性19例(76.0%)。60例患者MRI聯(lián)合FISH分析及單純FISH檢測結果見表1。

    表1 MRI聯(lián)合FISH及單純FISH檢測結果(例)

    分別統(tǒng)計兩種檢查方法的敏感度、特異性、誤診率、漏診率、陽性預測值、陰性預測值和準確率,并進行比較,見表2。MRI聯(lián)合FISH和FISH診斷的準確率分別為88.3%、76.6%,而MRI聯(lián)合FISH診斷的敏感度和特異性均高于FISH??傮w而言,91.4%(32/35)的MRI聯(lián)合FISH診斷陽性者膀胱腫瘤復發(fā),陰性者3例出現(xiàn)膀胱腫瘤復發(fā)。MRI聯(lián)合FISH診斷膀胱尿路上皮癌復發(fā)率高于單純FISH檢測(32/35 vs 27/35,P<0.05)。7例腫瘤復發(fā)患者MRI聯(lián)合FISH陽性先于膀胱鏡檢查及FISH檢查。

    表2 MRI聯(lián)合FISH及FISH檢測的比較

    與FISH檢測比較*P<0.05

    討 論

    目前,尿脫落細胞學檢查與膀胱鏡檢查是膀胱尿路上皮癌術后的主要隨訪項目,但尿脫落細胞學檢查的敏感度不高[4]。MRI和FISH均為無創(chuàng)檢查,MRI聯(lián)合FISH對于檢測膀胱尿路上皮癌具有較高的敏感度和特異性,從一定程度上減少了膀胱鏡檢查的使用[5]。MRI檢查呈多序列、多方位成像,能準確顯示腫瘤的大小、形態(tài)、部位、組織結構及腫瘤與周圍組織的關系,對腫瘤定位、定性診斷及膀胱癌臨床分期有很大幫助。但是MRI對于<1 cm的原位癌難以顯示[6],Dodurga等[7]發(fā)現(xiàn)FISH具有略優(yōu)于細胞學的效果,且其敏感度隨著膀胱腫瘤分級而提高。因此,MRI聯(lián)合FISH有利于早期發(fā)現(xiàn)膀胱腫瘤。

    我們前期研究[8]表明,3號、7號、17號染色體非整倍體的改變及p16位點的異常和膀胱尿路上皮腫瘤存在密切關系。本研究結果進一步顯示,MRI聯(lián)合FISH檢測膀胱尿路上皮腫瘤術后復發(fā)的敏感度高于單純采用FISH檢查(91.4% vs 77.1%,P<0.05)。

    在FISH預測膀胱癌術后復發(fā)方面,Sarosdy等[9]對膀胱鏡檢查陰性而MRI聯(lián)合FISH檢查呈陽性患者的隨訪中發(fā)現(xiàn),F(xiàn)ISH陽性患者最終確診為膀胱癌的比例較高。Yoder等[10]對膀胱癌術后患者進行連續(xù)29個月的隨訪發(fā)現(xiàn),膀胱鏡檢查陰性而尿FISH檢測呈陽性的患者,膀胱癌復發(fā)率高達65%。本研究對60例膀胱腫瘤術后患者進行連續(xù)18個月的隨訪觀察發(fā)現(xiàn),35例膀胱腫瘤復發(fā)患者中有7例最初尿FISH檢測陽性而膀胱鏡檢查陰性。本研究結果顯示MRI聯(lián)合FISH對膀胱腫瘤檢測的陽性率高于單用FISH,且診斷早于膀胱鏡和單用FISH。MRI聯(lián)合FISH將為膀胱癌術后復發(fā)監(jiān)測提供一種簡便、快捷、有效的方法,可為患者的預后提供參考。

    [1] 那彥群,葉章群,孫穎浩,等. 中國泌尿外科疾病診斷治療指南[M]. 北京:人民衛(wèi)生出版社,2014:20-60.

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    (本文編輯:熊鈺芬)

    The application analysis of MRI and fluoresence in situ hybridization in the etiological diagnosis postoperative recurrence of bladder urothelial cancer

    WUDing,GUOYong-lian,LIGuo-hao.

    DepartmentofUrology,theCentralHospitalofWuhan,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430014,China

    LIGuo-hao,E-mail:41504101@qq.com

    Objective To evaluate the clinical utility of MRI combined with fluorescence in situ hybridization (FISH) assay as a non-invasive molecular test, meanwhile to provide the theoretical basis for establishing or improving surveillance of postoperative recurrence of bladder urothelial cancer. Methods Sixty patients diagnosed with bladder urothelial cancer were chosen between January 2013 and January 2015. FISH, FISH combined with MRI and cystoscopy with biopsy were performed in these patients at 3, 6, 9, 12, and 18 months post-operation, and tumor recurrence was recorded. Results Among the 60 patients tested, FISH-positive patients were 33 cases, of which suspected tumor recurrence accounted for 55.0%. MRI and FISH positive patients were a total of 36 positive cases, of which suspected tumor recurrence accounted for 60.0%. All suspected cases were treated with bladder cancer with cystoscopy and biopsy. Finally 35 cases of patients were confirmed with tumor recurrence. Pure FISH findings of tumor recurrence were 27 cases, accounting for 77.1% of the patients with tumor recurrence. However, MRI combined with FISH examination were a total of 32 cases tumor recurrence in patients, accounting for 91.4% of the patients with tumor recurrence. Conclusions The positive rate of MRI combined with FISH for the detection of bladder cancer is higher than that of FISH, MRI and FISH may become a new method for early diagnosis and monitoring of postoperative recurrence of bladder cancer.

    Urothelial carcinoma; Fluoresence in situ hybridization; Recurrence; Magnetic resonance imaging

    武漢市衛(wèi)計委科研項目(WX14C12)

    430014 華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬武漢中心醫(yī)院泌尿外科

    李國灝,E-mail:41504101@qq.com

    10.3870/j.issn.1674-4624.2016.06.005

    2016-08-16)

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