酶聯(lián)免疫法做抗體檢測(cè)時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)

酶聯(lián)免疫法做抗體檢測(cè)時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)

近幾年來(lái)，隨著養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，畜禽抗體水平的檢測(cè)越來(lái)越受到廣大養(yǎng)殖戶的重視。作為獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室工作人員，筆者結(jié)合自己的工作實(shí)踐，現(xiàn)將酶聯(lián)免疫法做抗體檢測(cè)時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)總結(jié)如下：

1　試驗(yàn)前應(yīng)注意的事項(xiàng)

1.1試驗(yàn)前應(yīng)先檢查試劑盒是否過(guò)期，試劑盒內(nèi)的試劑是否因?yàn)槠可w松動(dòng)、破裂等因素造成污染或變質(zhì)。如有以上現(xiàn)象則本試劑盒不能用。

1.2由于試劑盒是在2℃～8℃下保存的，所以整套試劑在使用前應(yīng)平衡至室溫。室溫為22℃～25℃。

1.3檢查樣本血清是否保存完好，是否溶血或污染。若因保存不好發(fā)生變質(zhì)或樣本血清本身就因?yàn)椴杉划?dāng)而發(fā)生溶血或污染則可能影響檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)意義就不大了。

1.4做試驗(yàn)前應(yīng)先對(duì)樣本血清進(jìn)行編號(hào)和標(biāo)記，使其與反應(yīng)板上的編號(hào)一一對(duì)應(yīng)。一般一個(gè)反應(yīng)板一次最多可做90份樣本血清，這樣就可能涉及到多個(gè)養(yǎng)殖戶，所以我們要對(duì)樣本進(jìn)行編號(hào)和標(biāo)記，使其與養(yǎng)殖戶的畜禽一一對(duì)應(yīng)起來(lái)，以便對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。

2　試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意的事項(xiàng)

2.1做試驗(yàn)時(shí)一定要設(shè)定陽(yáng)性對(duì)照孔、陰性對(duì)照孔和空白對(duì)照孔，以便確定試驗(yàn)是否有效。

2.2每次加樣時(shí)要更換滴頭，以免造成交叉污染。特別是在加樣本血清時(shí)，一定要加一個(gè)樣本血清換一次滴頭。

2.3每次加樣所用的時(shí)間應(yīng)盡量縮短，以避免因加樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而出現(xiàn)的前后加樣反應(yīng)時(shí)間不一致導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)誤差。

2.4在溫育反應(yīng)時(shí)，溫育30 min誤差應(yīng)控制在±2 min以內(nèi)，溫育10 min誤差應(yīng)控制在±1 min以內(nèi)，避免因反應(yīng)時(shí)間縮短或延長(zhǎng)而造成整體顯色降低或升高。

2.5每次洗板時(shí)，不管是手洗還是洗板機(jī)洗，洗完后都要把反應(yīng)板拍干。

2.6每次試驗(yàn)溫育反應(yīng)所用的封板膜不能重復(fù)使用，試劑瓶蓋也不能交叉使用，以免造成交叉污染，從而影響試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

2.7試驗(yàn)中所用的終止液屬于強(qiáng)腐蝕性物質(zhì)，一定要做好個(gè)人防護(hù)，避免其掉到身體或衣物上。

2.8在使用酶標(biāo)儀前，一定要先把酶標(biāo)儀的開(kāi)關(guān)打開(kāi)，檢查系統(tǒng)是否能夠正常運(yùn)行。并且在檢測(cè)數(shù)據(jù)前要預(yù)熱30 min。

3　試驗(yàn)完成后應(yīng)注意的事項(xiàng)

3.1試驗(yàn)完成后，應(yīng)先根據(jù)試劑盒說(shuō)明書上提供的指標(biāo)，對(duì)應(yīng)試驗(yàn)數(shù)據(jù)判定試驗(yàn)是否有效。（使用單波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)，各孔OD值應(yīng)先減去空白對(duì)照孔OD值，再進(jìn)行結(jié)果分析。）如未達(dá)到指標(biāo)，則試驗(yàn)無(wú)效需要重做。

3.2試驗(yàn)完成后，試劑開(kāi)封如未用完，反應(yīng)板條應(yīng)和干燥劑一起放入自封袋內(nèi)密封2℃～8℃保存，其它液體組份使用后瓶蓋擰緊置2℃～8℃保存。開(kāi)封的試劑盒應(yīng)在1周內(nèi)用完。

3.3試驗(yàn)結(jié)束后，在確定本次試驗(yàn)有效的情況下，根據(jù)前的面編號(hào)對(duì)各個(gè)養(yǎng)殖戶畜禽的抗體水平進(jìn)行分析。對(duì)分析結(jié)果和原始數(shù)據(jù)做好記錄并保存，以備以后查詢。

3.4不同物種的試劑盒不能用于其它物種樣品的檢測(cè)，不同批號(hào)的試劑盒中的組份不能混用。

3.5試驗(yàn)結(jié)束后，所有樣本、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物做好無(wú)害化處理。

054200河北省內(nèi)丘縣農(nóng)業(yè)局魏永杰